烟草花叶病毒单克隆抗体的制备和鉴定

经工程菌表达与纯化,得到了纯度95%以上的TMV-CP-F重组蛋白,配合提取的TMV天然病毒颗粒作为免疫原.通过杂交瘤技术获得了14株能分泌特异针对TMV外壳蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株.经鉴定14株细胞所分泌的抗体亚类为IgG1型,抗体轻链均为κ型.经ProteinA一步法亲和层析纯化所得抗体经鉴定相对分子质量在149.36～157.23 ku之间,抗体纯度在80%以上.经间接ELISA测定,14株抗体均与TMV-CP重组蛋白和TMV病毒有良好特异性反应.所制备的抗TMV抗体的特异性高,可用于与其相关的免疫检测研究和应用.     

神经生长因子抗体亲和柱的制备与应用

利用已分离纯化的神经生长因子为抗原,制备兔抗ＮＧＦ抗血谱,用饱和（ＮＨ４）２ＳＯ４盐析和Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ亲和层析的方法,纯化其中的ＩｇＧ组分,再将其偶联到ＣＮＢｒ活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ上,制备抗ＮＧＦ ＩｇＧ免疫亲和性,应用此亲和柱可一步纯化蛇毒中的ＮＧＦ,大大简化了ＮＧＦ纯化工艺。     

抗家蚕抗菌肽单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

首次报道了抗家蚕抗菌肽（一种小分子多肽）单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立．用ＦＰＬＣ纯化家蚕抗菌肽（ＡＢＰ）获得了电泳一条带的均一样品；将它与辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）偶联，以此偶联物免疫ＢＡＬＢ／Ｃ鼠．以抗菌肽—牛血清白蛋白（ＡＢＰ－ＢＳＡ）做包被物ＥＬＩＳＡ筛选出５个阳性杂交瘤细胞株，冻存复苏后得到三个稳定分泌抗体的阳性细胞株，抗体ＩｇＧ亚型为ＩｇＧ２ａ．统计了杂交瘤的染色体数     

一步法免疫亲和层析纯化重组人肿瘤坏死因子

提出一种简便的免疫亲和层析方法，有效地分离纯化重组人肿瘤坏死因子（ｒＨＴＮＦ），此法不需预先分离纯化单克隆抗体．用交联刘ｄｉｍｅｔｈｙｌｓｕｂｅｒｉｍｉｄａｔｅ使抗ＴＮＦ的单克隆重抗体和ｐｒｏｔｅｉｎＡ—ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ共价结合，成为稳定的免疫基质，制备免疫亲和层析柱，将重组ＴＮＦ粗制品一步纯化为均一组份．     

肾综合征出血热病毒单克隆抗体7C11的纯化与鉴定

为获得高纯度的抗肾综合征出血热病毒单克隆抗体,建立杂交瘤细胞株7C11两步纯化的方法并进行亚类及特异性鉴定。采用Balb/c小鼠制备7C11单克隆抗体腹水,辛酸-硫酸铵法初步分离纯化,蛋白G亲和层析柱进一步分离纯化并鉴定。经初步分离纯化后,单抗IgG纯度>80%,回收率>50%;经过Protein G层析柱二次分离纯化后,单抗IgG纯度>98%,回收率>50%。亚类鉴定为IgG1,且特异性较好。成功获得高纯度的抗HFRS单克隆抗体,为抗汉坦型肾综合征出血热抗原表位的鉴定、抗原物质结构与功能的关系等后续研究奠定基础。     

烟草花叶病毒快速检测方法的建立及应用

应用单克隆抗体技术获得抗烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)单克隆抗体,并通过胶体金标记技术,免疫层析快速检测技术和SQUID磁学定量测定技术建立起烟草花叶病毒的快速检测方法,并开发出用于定性检测的TMV胶体金快速检测试纸及用于定量检测的TMV纳米磁珠快速检测试纸,其检测灵敏度分别为1 ng/mL和0.1 ng/mL.所建立的方法操作简单,快速,灵敏度高,特异性好,是作为烟草育苗中各种TMV无症和有症烟株现场筛查的有效手段.     

单克隆抗体亲和层析纯化基因工程人γ-干扰素研究

用抗基因工程人γ－干扰素单克隆抗体（２Ａ１２）细胞株亲和层析从表达人γ－干扰素的大肠杆菌抽提液中纯化经稀释复性后的γ－干扰素。一步纯化后的γ－干扰素含量达９５％以上，蛋白质的比活性达 １．２×１０ｕ／ｇ，收率为７８％。洗脱液用 ０．５ｍｏｌ／ＬＮａＣＩ的 ＰＢＳ溶液，洗脱率达９２．８％。     

毒品苯环利啶(PCP)单克隆抗体的制备及鉴定

将毒品苯环利啶(PCP)与牛血清白蛋白(BSA)偶联形成复合抗原免疫Balb/c小鼠,获得6株稳定分泌抗PCP单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株.它们的腹水效价在1∶105～1∶106.抗体类型鉴定结果表明,属于IgG1,κ型.这些抗PCP单抗均可用于毒品的免疫检测.     

改进双抗夹心ELISA用于筛选单抗杂交瘤细胞株

本文利用改进双抗夹心ELISA筛选一种可测定血清样品中与血浆蛋白结合的蛋白质药物的单抗。用兔抗K102多抗经亲和层析纯化并包被后,加入用10%猴血浆PBS还原后的抗原K102,再加入杂交瘤细胞株上清液和HRP-羊抗鼠IgG、底物反应液筛选阳性单抗杂交瘤细胞株。结果用改进后的双抗夹心ELISA筛成功地选出6株能稳定分泌针对K102的单抗杂交瘤细胞株,分别命名为1C9、2D7、3E2、5F4、5F6、6B9;细胞株产生的单抗用ELISA法能检测出血清样品中的K102的浓度。提示改进的双抗夹心ELISA可用于针对与血浆蛋白结合的蛋白质药物的单抗杂交瘤细胞株的筛选。     

抗Der p 2单克隆抗体细胞株的建立与鉴定

目的:建立Der p 2(屋尘螨Ⅱ类变应原)杂交瘤细胞株,并对其分泌的Der p 2单克隆抗体进行鉴定.方法:用重组Der p 2蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选和3次克隆化,制备出单克隆抗体.采用间接ELISA法、Western blot法确定单克隆抗体的免疫球蛋白的类型和亚类、相对亲和力、特异性,对单克隆抗体进行鉴定.结果:获得3株能稳定分泌高效价Der p 2单克隆抗体的杂交瘤细胞株,1B6为IgG1类,1G11、4B1为IgG2a类.间接ELISA法检测细胞上清效价为104~105,腹水效价为105~106.Westernblot试验证明3株单抗与Der p 2蛋白均有特异性反应.结论:成功制备了3株抗Der p 2的单克隆抗体,均具有良好的特异性和亲和力,为进一步建立Der p 2蛋白检测和纯化的方法奠定了基础.     

抗传染性支气管炎病毒M蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

将传染性支气管炎病毒M41毒株通过接种鸡胚的方法扩繁,从含病毒的尿囊液中提取总RNA,RT-PCR扩增M基因,构建原核表达载体pGEX-6p-1-M,导入大肠杆菌Transetta (DE3)内诱导表达。将纯化后的重组M蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备能稳定分泌抗M蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。通过小鼠体内诱生腹水的方法大量制备抗M蛋白的单克隆抗体,用辛酸/硫酸铵方法纯化腹水,并对纯化的单克隆抗体进行了鉴定。     

ELISA定量测定单克隆抗体方法改进

本文介绍了以亲和层析纯化的免抗鼠IgG类抗体及其酶标物作为捕获及检测抗体进行鼠杂交瘤培养上清及腹水中IgG类单克隆抗体的ELISA定量测定方法。结果表明:小牛血清(BS)、免血清(RS)、马血滑(HS)、人血清(HuS)及非抗体产生细胞的培养上清对本项εLISA实验无干扰,使测定的结果较可靠,测定的鼠IgG各亚类的标准曲线的线性范围均在5～100ng/ml之间,因此这个快速、可靠的方法可为鼠IgG类单克隆抗体的定量测定提供一种实用的手段。     

重组人血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体的制备

为制备人血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体,制备并纯化了VEGF蛋白,通过免疫、细胞融合、筛选等方法获得了能够稳定分泌单克隆抗体的细胞株;采用小鼠腹腔接种法制备腹水,并用G蛋白(Protein G)亲和层析柱对抗体进行了纯化;采用间接ELISA及Western blot实验分别对纯化后的抗体进行了效价测定和特异性验证.结果表明:此方法可成功筛选出能稳定分泌VEGF单克隆抗体的杂交瘤细胞株,纯化后腹水抗体效价为1∶1 024;Western blot检验证实制备的单克隆抗体能特异性识别VEGF蛋白.     

抗人凝血VIII因子的单克隆抗体制备及其鉴定

经凝胶过滤和亲和层析分离得到的人抗血友病A因子——VIII因子抗原VIII:CAg,在用一期法和火箭免疫电泳证实其纯度后,免疫Balb/c小鼠和包被免疫测定板。采用常规鼠杂交瘤技术经间接ELISA法筛选、克隆化得到四个稳定分泌抗VIII:C的单克隆抗体的细胞株,即DC8,DE4,DE7和DE8,腹水效价为1:1×10~4～1:1×10~5,一期法抑制反应表明,单克隆抗体对VIII:C活性有显著的抑制作用,但其抑制是不完全的,对抗体进行了纯化及分析,并将单抗用于血友病A多态性的分析。     

抗人FXYD6单克隆抗体的制备及鉴定

制备了抗人FXYD6单克隆抗体,并进行初步鉴定.以FXYD6合成多肽作为免疫原,利用单克隆抗体杂交瘤技术建立阳性克隆细胞株;腹水诱导法制备抗人FXYD6单克隆抗体;蛋白A亲合层析法纯化;ELISA测定FXYD6单克隆抗体的特异性和效价;以所得特异性抗体为一抗,利用免疫组化法检测胰腺癌组织中FXYD6的表达.结果成功获得1株稳定分泌特异性抗人FXYD6单克隆抗体的杂交瘤细胞株;腹水诱导法生产抗人FXYD6单克隆抗体2.86 mg;FXYD6单克隆抗体可以与FXYD6合成多肽特异性结合,抗体效价1:5400;免疫组织化学显示胰腺癌组织中胞膜呈阳性染色.成功获得FXYD6单克隆抗体可以为进一步研究FXYD6的组织分布、生物学作用创造条件.     

抗猪促卵泡激素小鼠源单克隆抗体的研究

用猪促卵泡激素(PESH)作为抗原免疫BALB/C小鼠。通过将免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠骨髓瘤细胞(SP2/O—Ag14)进行融合,建立了九株能稳定分泌抗PFSH单克隆抗体的杂交瘤细胞。其中三株杂交瘤细胞分泌的抗体被证实是对PFSH特异结合的,它们和另一种非常相近的垂体激素——猪促黄体激素(PLH)不结合。用有限稀释法对全部九株杂交瘤进行了三次亚克隆。有几种单克隆抗体被羟基磷灰石柱层析一步法从小鼠腹水所纯化。以聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测经纯化单克隆抗体制品的纯度。     

沙丁胺醇单克隆抗体的研制及初步应用

用沙丁胺醇和牛血清白蛋白的人工偶联物SAL-BSA免疫BALB/c小鼠,应用细胞融合技术建立3株分泌抗沙丁胺醇抗体的杂交瘤细胞株,并对抗体进行鉴定.结果表明,3株单克隆抗体对沙丁胺醇的半抑制率分别为1.41、5.53、9.62 ng/m L;单克隆抗体2F7与盐酸克伦特罗、马布特罗、特布他林的交叉率分别为217%、128%、70.5%,与莱克多巴胺、西马特罗、肾上腺素和去甲肾上腺素无交叉反应;3株单克隆抗体均为小鼠Ig G1亚类.用单克隆抗体2F7建立的胶体金免疫层析检测试纸条,对沙丁胺醇标准品的最低检出值达到3 ng/m L.制备的抗沙丁胺醇单克隆抗体有可能应用于沙丁胺醇残留快速检测试剂的研制.     

兔抗人多发性骨髓瘤细胞多克隆抗体的制备与鉴定

制备人多发性骨髓瘤全细胞兔多克隆抗体。用人多发性骨髓瘤细胞系ARH-77全细胞和福氏完全佐剂通过背部皮内多点注射首次免疫新西兰大白兔,第14 d用ARH-77全细胞和福氏不完全佐剂同样剂量加强免疫,第28 d和38 d时再次免疫。第45 d颈动脉采血80 mL,4℃静置过夜,收集血清。然后采用亲和层析系统纯化血清中的多克隆抗体。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测纯化多克隆抗体的效价;免疫印迹法和荧光免疫细胞化学检测纯化多克隆抗体的特异性。结果:ELISA检测多克隆抗体滴度为1∶20 000,免疫印迹检测结果显示该抗体具有较高特异性,荧光免疫细胞化学检测多克隆抗体能够有效的结合细胞表面抗原。实验获得了高效价的特异性的兔抗人骨髓瘤细胞多克隆抗体,为进一步研究多发性骨髓瘤诊断和治疗奠定了基础。     

抗人癌胚抗原单克隆抗体的研制及其在免疫组化中的应用

以高纯CEA为抗原,免疫BALB／c小鼠．取其脾细胞和小鼠SP2／0-Ag14骨髓瘤细胞融合．经2次亚克隆。建立3株稳定分泌抗CEA特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。应用经纯化的该单克隆抗体进行了结肠癌组织切片的免疫组织化学实验．结果显示全部3种抗CEA单克隆抗体对结肠癌亚细胞组分均呈现特异性结合。表明已筛选出适于制作癌胚抗原临床诊断试剂盒所需的特异性单克隆抗体。     

单克隆抗体亲和层析法纯化人尿激酶

含抗人尿激酶单克隆抗体的腹水经ＰｒｏｔｅｉｎＡ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ４Ｂ柱纯化得到ＩｇＧ纯品,分子量为１５０ｋＤ（重链５５ｋＤ,轻链２０ｋＤ）,与ＣＮＢｒ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联制成抗人尿激酶单克隆抗－体－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析介质。尿激酶粗品经单抗－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析柱纯化后,所得尿激酶制品比活为９×１０－４～１．７×１０－３ｍｏｌ／ｓ·ｍｇ－１,纯化倍数为１５～３０倍,酶活性回收率在５０％以上。