长春花组织培养与快繁技术初探

本文以长春花无菌苗的芽为外植体进行组织培养。适合芽诱导和增殖的培养基为MS＋0．50mg/L6-BA＋0．06mg／LIBA＋300g/L蔗糖＋7g/L琼脂;适合生根的培养基为1／2MS,0．10mg/LIBA＋0．20mg／LNAA＋30g／L蔗糖＋7g/L琼脂。经生根壮苗培养和炼苗25d后,移栽成活率高达92％。     

甘蔗组织培养中不同阶段的抗生素及PPT抗性筛选试验

本试验在甘蔗高效再生体系的基础上,在心叶愈伤组织诱导、胚性愈伤组织芽分化、生长以及生根各阶段的培养基中,分别附加不同质量浓度的G418、潮霉素(Hyg)和除草剂PPT3种选择性试剂,以确定甘蔗遗传转化所用的最佳筛选浓度.试验表明:福农81-745(糖蔗)与Badila(果蔗)2个品种对G418、Hyg和PPT的抗性差异不大;G418、潮霉素和PPT在甘蔗组培各个阶段均对外植体有强烈的抑制作用.因此建议在甘蔗遗传转化中,G418和Hyg对甘蔗愈伤组织诱导生长,芽分化、生长及试管苗生根3个阶段的抗性筛选质量浓度均为30mg·L-1;PPT对愈伤诱导生长和芽分化、生长2个阶段的抗性筛选质量浓度为0.75mg·L-1,而生根阶段为1.00mg·L-1.     

刺五加的组织培养及快速繁殖的研究

为了大量发展刺五加(Acanthopanax senticosus Harms．)这一珍贵的优良品种，适应规模化生产的需要，以刺五加的芽为外植体进行组织培养试验，经试验对比筛选出刺五加的最佳初分化培养基为Ms 6-BA1．0mg／L NAA0．1mg／L，继代芽分化培养基为MS 6-BA0．5mg／L ZT0．1mg／L，生根培养基为1／2MS NAA0．5mg／L，用蛭石 森林腐殖土(1：1)炼苗较好。     

米邦塔食用仙人掌组培快繁技术研究

探索了米邦塔食用仙人掌组培快繁技术。得出不定芽诱导使用培养基MS＋6-BA3．0mg／L＋NAA0．1mg/L，外植体分化率达77．3％；继代增殖使用培养基MS＋6-BA1mg／L＋KT0．5mg／L＋NAA0．3mg/L，试管苗平均增殖倍数达10.19，结合反复利用原外植体的方法，增殖效率可进一步提高；生根培养基使用1／2 MS＋NAA0．1mg／L＋IBA0．1mg／L，生根率达100％，且根系发育优良；驯化及试管苗入地后，以保湿为主要管理措施，可保证移栽成活率在95％左右。     

桑树遗传转化技术中抗生素的浓度优化研究

调查了抗生素对根癌农杆菌介导的桑品种“新一之濑”遗传转化不同培养阶段外植体生长、分化或生根的影响及其对农杆菌的抑制效果 ,并确定 :在叶盘 (或茎尖 )转化筛选培养阶段 ,Kan (卡那霉素 )和 Cab (羧苄青霉素 )适宜浓度分别为 3 0～ 40 mg/ L和 2 0 0～40 0 mg/ L (或 6 0～ 80 mg/ L和 2 0 0～ 6 0 0 mg/ L ) ,在抗性芽继代 (或生根 )培养阶段 ,Kan和Cab分别为 40～ 5 0 mg/ L和 1 0 0～ 2 0 0 mg/ L (或 5～ 1 0 mg/ L和 5 0～ 1 0 0 mg/ L) .Cef(头孢霉素 )对桑树各种外植体的影响效果与 Cab相似 ,但两者的抑菌效果因农杆菌菌株、外植体类型以及培养阶段的不同而存在差异 ,用含 Kan、Rif(利福平 )和 Str(链霉素 )的 LB培养基浸渍叶盘则出现分化率下降、褐化死亡较严重的现象 .     

安祖花的组织培养及快速繁殖研究

以安祖花的叶、叶柄和茎段为外植体在不同培养基上进行诱导愈伤组织和不定芽的发生．筛选出了诱导愈伤组织培养基MS 6—BA1．0mg／L 2，4—D0．5mg／L，不定芽分化及增殖培养基MS 6-BA1．0mg／L IBA0.1mg／L，不断的继代培养，增殖及分化率都很高，将产生的不定芽切割下来转接到1／2MS NAA0．5mg／L的培养基中生根壮苗，生根良好的试管苗移栽后，经过精心的管理。2个月后统计结果。成活率高达96％。     

非洲紫罗兰的组织培养和植株再生

对非洲紫罗兰的组织培养研究表明,外植体消毒以0．1％的升汞溶液浸泡7～8min为宜;不同激素浓度对其芽丛的形成、分化及根的形成有不同的影响;生长素与细胞分裂素的比例决定着芽丛的形成;小苗在1／2MS培养基上生根最好,6-BA对其生根有抑制作用．各培养阶段的最适培养基分别为,芽诱导培养基MS 2mg／L 6-BA 0．2mg／L NAA,芽分化培养基MS 1mg／L 6-BA 0．1mg／L NAA,壮苗培养基MS 0．1 mg／L NAA,生根培养基1／2MS 0．2mg／L IBA。     

芦荟茎组织培养及器官分化的研究

以库拉索芦荟茎段为材料进行离体培养，研究了外植体的取材，激素浓度及配比，抑制外植体褐化，糖，活化炭等因素对芽分化及根形成的影响。结果表明：芦荟幼茎及具芽切段适宜作为外植体材料；不定芽的分化与增殖以MS＋6－BA3.0-4.0mg/L＋NAA0.2mg/L，其6－BA与NAA浓度配比为15－20最佳，生根培养以1／2MS＋NAA0.5-1.0mg/L＋0．3％活性炭为适宜，在诱导芽和根的培养基中，食用白糖的适宜浓度为3％，抗坏血酸浓度为4％时对外植体材料的抗褐化作用较为明显。     

厚荚相思组织培养与快速繁殖

以5年生厚荚相思(Acacia crassicarpa)的萌芽茎段为外植体进行了组织培养的初步研究，结果表明：改良的MS 6-BA2．0mg／L NAA0．2mg／L培养基能够较好地诱导芽的分化和增殖；适宜的继代增殖培养基为改良MS 6-BA1．5mg／L NAA0．2mg／L；较为想的生根培养基为1／2MS IBA0．5mg／L，生根率达95．0％；生根苗的移栽基质以黄心土的移栽效果最好，移栽成活率达90．0％。     

密蒙花(Buddlija officinalis)基因转化受体系统的建立

以密蒙花(Buddlija officinalis Maxim)芽、叶、茎段为外植体，在B5，MS，White培养基上获得愈伤组织。结果表明：芽、幼叶脱分化能力差异不大；不同时期的叶片差异较大，以幼叶诱导为佳；作者筛选出的愈伤组织最佳培养基为B5 6-BA0．5mg／L 2，4-D0．5mg／L。在继代培养阶段，B5比MS和White更适合细胞的快速生长和繁殖；并且以叶片的愈伤组织生长较快，芽、茎段次之，最佳继代培养基为B5 6-BA0．5mg／L NAA0．5mg／L，继代的愈伤组织可在B5 6．BAlmg／L NAA0．1mg／L GA0．1mg／L培养基中分化出幼苗，在生根培养基1／2MS NAA0．2mg／L或1／2MS NAA0．6mg／L中分化出根且获得再生植株，将长4～6cm的再生小苗练苗3d后移植，幼苗成活率达100％，并于当年开花。     

生菜遗传转化受体系统的建立及鲑鱼降钙素基因的导入

以散叶生菜大速生(Lactuca sativa var.capatata L.)为试材，以MS为基本培养基。采用不同激素配比，确定生菜高效诱芽培养基为MS 0．1 mg／L6-BA 0．05mg／LNAA；抗生素敏感性试验表明，筛选培养基中适宜的卡那霉素选择压为75mg／L，抑菌剂羧苄青霉素的适宜质量浓度为300mg／L；通过根癌农杆菌介导的叶盘法将鲑鱼降钙素(sCT)基因转入大速生散叶生菜，PCR检测转化率达25．4％。     

苎麻雄性不育保持系组培再生技术研究

以苎麻雄性不育保持系GS13-X1为实验材料,选用MS培养基附加激素TDZ和2,4-D,研究不同激素浓度组合对种子苗叶片和茎段外植体愈伤诱导与不定芽分化的影响.试验结果表明,GS13-X1再生的最适培养基为MS+0.3 mg/L TDZ+0.05 mg/L 2,4-D+30 g/L蔗糖+7.5 g/L琼脂,叶片和茎段的愈伤诱导率分别为100%和95.24%,出芽分化率分别为11.11%和23.81%.50 mg/L卡那霉素可以明显抑制茎段和叶愈伤诱导与分化.苎麻雄性不育保持系组织培养再生技术是苎麻雄性不育转基因验证的前提条件,也是苎麻遗传工程改良的基础.     

青花菜组织培养再生体系的研究

采用不同培养基对青花菜（Brassica oleracea var.italica Plenk.)的子叶和下胚轴进行分化培养,结果表明：青花菜不同的外植体的组织培养效果不同,当采用MS基本培养基附加BA0.5mg/L、NAA0.1mg/L和Sucrose5%的处理时下胚轴的不定芽分化频率最高,可达50%;而当培养基中添加BA0.5mg/L、NAA0.1mg/L、Sucrose3%和AgNO34mg/L的子叶的不定芽分化频率最高,约为78%左右;同时在分化培养基中添加不同种类和浓度的激素、蔗糖和AgNO3均对其子叶不定芽的再生具有明显的效应。     

农杆菌介导的ACC氧化酶反义基因转化甜瓜品种河套蜜瓜的研究

将从甜瓜品种河套蜜瓜中克隆的ACC氧化酶基因cDNA片段反向构建到植物表达载体pROK II中,获得重组质粒pRACO 1,用三亲融合法将其导入根癌农杆菌LBA 4404中,转化河套蜜瓜子叶外植体,在芽诱导培养基M S IAA 0.8 m g/L BA 1.0 m g/L ABA 0.26 m g/L C ef 500 m g/L K an 75 m g/L中诱导生芽,待芽长到2cm左右转入M S IBA 0.5 m g/L C ef 300 m g/L K an 50 m g/L的培养基中诱导生根,1~2周后可诱导产生大量的根,形成完整的转化小植株.经PCR检测证明,目的基因已整合到河套蜜瓜的基因组中.     

大豆种子萌发和幼苗生长对锑胁迫的响应

为研究锑（Sb）对大豆种子萌发及幼苗生长的影响,采用水培方法,进行了锑胁迫大豆种子发芽和根伸长观察实验,并对大豆2周幼苗的根部和茎叶部的锑含量用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分别进行了测定。结果表明：0~200 mg/L浓度范围内,Sb对大豆发芽势和发芽指数的作用呈现为整体促进、低强高弱的趋势,即各实验浓度组发芽势均高于空白组,在15 mg/L浓度时达到最大值;对发芽率无影响;对根伸长有抑制作用,且随锑浓度的增大而增大;15 mg/L时,其对大豆的活力指数的促进作用最为明显;15~50 mg/L浓度范围内茎叶部测得Sb含量较高,测定最高值出现在50 mg/L组为2.45 mg/kg,各组根部均未检出。     

Viola baoshanensis, a plant that hyperaccumulates cadmium

This paper reports upon the finding of Viola baoshanensis, a cadmium (Cd) hyperaccumulator through field survey and greenhouse experiments. Average Cd concentration in the shoots and roots of V. baoshanensis growing on Baoshan lead/zinc mine in Hunan Province, China, was 1168 and 981 mg/kg, respectively, varying from 456 to 2310mg/kg in the shoots, and from 233 to 1846 mg/kg in the roots.The ratio of Cd concentration in shoot to root (DW) and that in plant shoots to total concentration in surface soil was 1.32 and 2.38, respectively. Under nutrient solution culture, biomass (DW) of V. baoshanensis exposed to 0-30 mg/L Cd insolution increased with Cd supply increasing and reached a maximum at 30 mg/L Cd. Further increase of Cd concentration (40, 50 mg/L) in solution significantly reduced biomass.Cd concentration in the shoots was positively correlated with Cd concentration in the culture medium. Cd concentration in the shoots reached 4825 mg/kg at 50 mg/L Cd solution. Theratio of Cd concentration of shoots to roots in V. baoshanensis was greater than 1 at all Cd treatments, with an average of 1.67 (1.14-2.22). The results indicate that V. baoshanensis is a Cd hyperaccumulator plant.     

黄瓜再生体系的建立

本实验以黄瓜(CucumissativusL.)品种“LS-21”为实验材料,按如下培养基配方:MS培养基,附加6-BA(0.8～1.6)mg/l IAA0.2mg/l;不同浓度的6-BA分别与NAA及2,4-D配合,研究影响黄瓜组织培养的诸多因素,建立了黄瓜离体子叶高频不定芽再生系统。主要结果如下:黄瓜5-6日苗龄无菌苗子叶作外植体,愈伤组织生长旺盛,芽诱导率高;7-8天的外植体则生长势弱,不利再生芽的分化。6-BA(1.2～1.6)mg/l IAA0.2mg/l,芽分化频率较高,其中6-BA1.2mg/l的芽分化率可达51%;待再生芽长至2-3cm时移入生根培养基(1/2MS 0.1mg/LIAA),生根率达90%,40-60d可得到完整再生植株。     

小白菜离体培养植株再生方式的组织学研究

对2个小白菜品种的离体培养植株再生方式进行组织学观察，结果表明：在含有AgNO36mg/L及ABA0.5mg/L的培养基（MS BA2mg/L NAA0.5mg/L)中，鸡毛菜在培养6d左右，矮脚黄在培养8d左右出现明显的芽原基，10-12d左右产生肉眼可见的不定芽。不定芽的产生属直接出芽方式，不经过愈伤组织阶段。     

雄性二倍体毛白杨再生体系的构建和遗传转化的研究

【目的】建立雄性二倍体毛白杨再生体系,构建稳定的遗传转化方法,为进一步研究毛白杨基因功能提供试验平台。【方法】以雄性二倍体毛白杨的幼嫩茎段和叶片为外植体,1/2 MS为基本培养基,通过调整6-BA、IAA和TDZ激素浓度进行再生体系筛选;采用农杆菌EHA105介导叶盘法,控制预培养时间、菌液浓度、侵染时间、共培养时间和卡那霉素筛选浓度,进行遗传转化;以幼嫩叶片原生质体为受体细胞,PEG介导转化荧光标记基因EGFP,进行瞬时表达。【结果】雄性二倍体毛白杨再生过程包括继代、芽伸长和生根3个阶段,其培养基组分分别为1/2 MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.005 mg/L TDZ、1/2 MS+0.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA和1/2 MS+0.3 mg/L NAA+0.5 mg/L IBA,该条件下生根率为96.7%,增殖系数为4.47。遗传转化过程包括预培养、农杆菌侵染、共培养、抗性筛选和生根5个阶段,其中预培养为12 h、农杆菌浓度OD₆₀₀为0.4、侵染时间为20 min、共培养时间为24 h、卡那霉素(30 mg/L)筛选45 d和抗性苗生根20 d。试验共获得86株抗性植株,其中14株分子鉴定结果为阳性。在40% PEG4000的介导下,EGFP基因瞬间转化效率为50%。【结论】雄性二倍体毛白杨再生周期短、遗传转化稳定,是杨树基础研究的理想材料。本研究拓宽了杨树遗传转化体系,为杨树分子辅助育种提供了新途径。