环介导等温扩增技术的研究进展

环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification method,LAMP)是一门新兴的基因扩增技术,作为一种分子生物学检测技术,具有高特异性、高敏感性、简单、便捷及成本低的特点,已广泛用于临床疾病的诊断、流行性细菌或病毒的定性定量检测、动物胚胎性别鉴定及基因芯片开发等领域...     

基于环介导等温扩增技术建立非洲猪瘟病毒的快速高灵敏度检测方法

非洲猪瘟是严重危害中国养猪业的传染病, 为了快速检测非洲猪瘟, 采用环介导等温扩增技术(LAMP), 根据非洲猪瘟病毒p72基因保守序列设计环介导的等温扩增引物, 然后进行引物筛选和反应条件优化。结果显示, 优化后的反应体系在45 min时可检测低至1 copy/μL的非洲猪瘟病毒, 不与其他病毒核酸样品产生交叉反应, 可以裸眼判断检测结果, 具有很好的灵敏性和特异性。     

环介导等温扩增技术检测乳粉中肺炎克雷伯菌

以荚膜脂多糖(capsular polysaccharide,CPS)合成调控子resA为靶基因片段,设计了肺炎克雷伯菌特异性引物,建立了环介导恒温扩增技术(Loop-Mediated lsothermal Amplification,LAMP)检测方法.结果表明,3对LAMP引物对肺炎克雷伯菌不仅有菌种专一性,而且,具有相当高的灵敏度(2 CFU/100 g).因此,该方法有利于更快更准确的鉴定食品中肺炎克雷伯氏菌.     

环介导等温基因扩增技术在林木病害检测中的应用展望

森林病害主要是由病毒、细菌、真菌和寄生性生物引起的,其中真菌所致病害种类最多,约占森林病害的80%以上。环介导等温基因扩增(LAMP)技术是一种快速高效的DNA扩增方法,具有简单、快捷、特异性强、准确性高等特点,笔者论述了LAMP技术的原理及其在病毒、细菌、真菌和寄生性生物等方面的应用及研究。该技术广泛应用于食品、临床、环境、农业、工业和畜牧业等领域。环介导等温扩增技术为快速分子检测提供了一条新的途径,在林木病害检测领域将会有广阔的应用前景。     

利用环介导恒温扩增法简易诊断松萎蔫病

诊断松萎蔫病的传统方法是从木质组织中分离松材线虫,然后用显微镜进行形态学鉴定.基于DNA分子检测的方法尽管很灵敏,不需要固定发育阶段的松材线虫,但是仍然需要用Baermann漏斗法分离线虫,并且需要昂贵的仪器.笔者研发了利用环介导恒温扩增法检测松材线虫的存在,该方法包括:(1)从木块中提取DNA;(2) DNA扩增;(3)通过反应溶液的颜色做出诊断.该方法仅使用培养箱且整个过程只需要90 min,比以往方法更加简便和快速.     

东方蜜蜂微孢子虫环介导恒温扩增检测方法的建立

以从重庆酉阳分离到的东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)为研究对象,以该物种16SrDNA作为靶标,设计引物并采用环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术检测东方蜜蜂微孢子虫。实验结果显示,LAMP检测的最佳条件为内引物浓度5μmol·L-1,聚合酶用量800U;以研究对象16SrDNA质粒为模板,LAMP检测的最低质量浓度为1.735×10-2ng·μL-1,PCR检测的最低质量浓度为1.735×10-1ng·μL-1;以研究对象基因组DNA为模板,LAMP检测的最低质量浓度为1.475×10-3ng·μL-1,PCR检测的最低质量浓度为1.475×10-1ng·μL-1;以研究对象基因组DNA、正常中蜂(Apis cerana)中肠基因组DNA、正常意蜂(Apis mellifera ligustica)中肠基因组DNA、正常家蚕(Bombyx mori)中肠基因组DNA、蜜蜂球囊菌(Ascosphaera a pis)孢子基因组DNA和中蜂囊状幼虫病毒cDNA作为模板进行检测,其中只有以研究对象基因组DNA为模板时,LAMP扩增才有条带。以上研究提示具有高灵敏度和高特异性的LAMP检测方法是东方蜜蜂微孢子虫检测的一个有效工具,可为后期在养蜂场建立快速有效的检测工具奠定基础。
     

可视化LAMP技术快速检测新冠病毒的方法

根据时代需要,利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplifcation,LAMP)对新冠病毒进行快速检测,以研发出新冠病毒检测试剂盒.通过NCBI公布的新冠基因组序列分析,获得新冠病毒特异性N蛋白基因的序列;根据该序列信息,在线设计的几对环介导等温扩增引物以供筛选,并利用新冠病毒全基因的反转录质粒,同时通过大量的实验尝试,得到较为稳定的环介导等温扩增体系,再加入具有逆转录活性的Bst 3.0 DNA聚合酶,使体系可扩增RNA模板,最后通过加入适量染料,完成反应结果的可视化.通过不断的实验优化,得到了较为稳定的扩增体系如下:2×Lamp Master Mix 12.5μL,Bst 3.0 DNA聚合酶0.5μL,内引物FIP、BIP(10μM)各2μL、外引物F3、B3(10μM)各0.5μL、模板1μL、ddH2 O 7μL,该体系在65℃下水浴加热1 h即可,同时在体系中加入MnCl2溶液(15 mM)1μL、钙黄绿素(500μM)3μL,使反应结果肉眼可断,加入模板的体系变为绿色,而未加模板的体系为棕黄色.结论:本实验研究的可视化LAMP检测新冠病毒的方法可用于对广大人民群众进行新冠病毒核酸检测.     

利用环介导恒温扩增法简易诊断松萎蔫病Takuya Aikawa,Natsumi Kanzak,Taisei Kikuch

诊断松萎蔫病的传统方法是从木质组织中分离松材线虫,然后用显微镜进行形态学鉴定。基于DNA分子检测的方法尽管很灵敏,不需要固定发育阶段的松材线虫,但是仍然需要用Baermann 漏斗法分离线虫,并且需要昂贵的仪器。笔者研发了利用环介导恒温扩增法检测松材线虫的存在,该方法包括：(1) 从木块中提取DNA;(2) DNA 扩增;(3) 通过反应溶液的颜色做出诊断。该方法仅使用培养箱且整个过程只需要90 min,比以往方法更加简便和快速。     

食品中沙门氏菌LAMP快速检测方法的建立

食品及其原料中沙门氏菌的快速、现场检测对食品安全控制具有重要意义.根据沙门氏菌invA基因核苷酸序列设计一组引物,应用环介导等温扩增技术（LAMP）,分别对7种不同血清型沙门氏菌和4种非沙门氏菌进行扩增,同时建立沙门氏菌人工污染的食品模型,比较了LAMP法与活菌计数检测的敏感性.结果表明,该方法仅对沙门氏菌产生特异性扩增,灵敏度高达336,mL-1,食品样品经细菌富集培养后,检测灵敏度高达8.25,g-1.所建立的检测沙门氏菌方法具有较高的特异性与灵敏性,操作简单、快速,可用于沙门氏菌污染食品的快速检测.     

对生产函数测度企业技术进步的改进

基于中国目前具体情况,对生产函数做出若干改进后用于测度企业技术进步,给出了通过实证研究所设计的测度指标,并对模型予以推导。实践证明,这个改进是行之有效的。     

湖南省技术进步贡献率及发展趋势预测研究

在探讨技术进步与经济增长的基本理论和测算模型的基础上,分别从宏观和微观的角度测算了湖南省技术进步对经济增长的贡献率和２４６家企业的技术进步状况,并对１９９６～２０１０年湖南省技术进步的发展趋势进行了预测,继而提出了加强湖南省技术进步工作的主要措施．     

我国上更新统—全新统千年尺度气候地层划分与研究进展

基于对最近20年来国际上更新统—全新统千年尺度气候地层划分认识的基础上,粗略解析了2012年编制的过去270ka以来区域年代地层对比表,并评述了我国上更新统—全新统千年尺度气候地层划分与研究进展．对于气候变化不稳定性的原因,列举了一些学者对其的驱动机制的看法,并倾向的认为千年尺度变化是在地球外部太阳活动强迫因子影响下与地球气候系统内部耦合发生的气候的震荡．     

煤气净化系统工艺的优化与改进

对焦化厂的煤气净化工艺提出了几点改进意见,并详细介绍了改进的方法。     

我国西部地区数字出版产业生产效率评价及提升路径研究

随着现代电子信息技术的飞速发展,全球出版业正经历由传统出版向数字出版的重大变革。由于竞争不充分,目前我国西部地区数字出版产品的创新水平还不高,多元化竞争态势还未形成,在迅速发展的同时始终伴随着高投入、低效率等不容忽视的问题,严重制约着数字出版业的可持续发展。文章运用DEA方法对我国西部地区数字出版产业的生产效率进行评价,结果表明西部地区数字出版产业存在效率损失,产业技术有效性偏低等问题。利用随机前沿生产函数模型将全要素生产率增长率分解为技术效率与技术进步率两部分,并对技术效率和技术进步率进行深入分析,结果表明技术效率的长期恶化是制约西部地区数字出版产业全要素生产率提升,进而导致生产效率低下的主要原因。在此基础上提出了提升我国西部地区数字出版产业生产效率的可行路径。     

钯催化烯丙基酯亲核取代反应的研究进展

钯催化不对称烯丙基取代反应是一种合成手性化合物的重要方法之一. 本文综述了近年来钯催化烯丙基酯衍生物亲核取代反应的研究进展,重点讨论了钯催化剂、烯丙基酯衍生物底物的结构、亲核试剂类型、溶剂及添加剂等因素对烯丙基亲核取代反应的影响. 并对可能的反应机理进行了讨论.     

含有时滞中性技术进步的资产投资模型解的性质

给出了含有时滞的中性技术进步的资产投资模型,并运用积分方程理论和泛函分析,证明了该投资系统模型的等价方程,同时得到等价积分方程的表达式．     

钻井液堵漏材料研究及应用现状与堵漏技术对策

井漏是目前钻井过程中常见且难以治理的井下复杂事故之一,是制约井下安全、影响钻井进度的主要因素之一.复杂地层钻井过程中,常用堵漏材料存在对漏失地层适应性差、抗温性能不佳、承压能力和驻留能力差等问题,缺乏科学的堵漏对策,导致一次堵漏成功率低、堵漏方法难以复制.阐述了桥接堵漏材料、高失水堵漏材料、吸水/吸油聚合物堵漏材料、聚...     

带有消费因素的生产函数P(L,K,C)

本文从理论上分析了柯布道格拉斯生产函数与投资加速理论及消费函数理论的关系,导出了生产函数P(L,K,C),分离了技术进步中的稳定因素,并使用中国34年的数据进行了统计验证。     

技术出版物质量评价机制的建立与应用

开展技术出版物质量评价并完善,能够保障产品可以顺利交付给客户,并满足适航标准和客户安全运营要求。这也是航空器制造商OEM应尽的义务和责任。该文通过对FCOM2的质量完善历程进行总结,提出了通用的飞机技术出版物质量评价机制,以便于改善技术出版物整体质量。