丙酰辅酶A的体外酶法合成

丙酰辅酶A(丙酰-CoA)是一种重要的代谢中间物,可以用来生产丙烯酸、3-羟基丙酸、β-羟基戊酸和聚酮化合物。将天然的琥珀酰辅酶A合成酶、甲基丙二酰辅酶A变位酶、甲基丙二酰辅酶A脱羧酶在大肠杆菌中克隆并过表达,采用这3种纯化的酶体外催化合成丙酰-CoA,评价了琥珀酸生产丙酰-CoA代谢途径。琥珀酸可经琥珀酰辅酶A合成酶催化生成琥珀酰-CoA,琥珀酰-CoA再由甲基丙二酰辅酶A变位酶催化生成甲基丙二酰-CoA,最后甲基丙二酰-CoA经甲基丙二酰辅酶A脱羧酶催化生成丙酰-CoA。反应产物经高效液相色谱分析,检测到目标产物丙酰-CoA,结果证明了从琥珀酸体外合成丙酰-CoA的代谢途径的可行性。     

产丁醇重组大肠杆菌的构建及初步发酵

将丙酮丁醇梭菌ATCC 824丁醇合成途径中分别编码硫解酶(THL)、3-羟基丁酰-CoA脱氢酶(HBD)、巴豆酸酶(CRT)、丁酰-CoA脱氢酶(BCD)和醛/醇脱氢酶(BDH)的关键基因thil、hbd、crt、bcd-etfB-etfA、adhE在大肠杆菌中进行重组表达,构建出3株产丁醇的重组大肠杆菌JM109-99d、DL1346 99d和AFP111-99d。选取摇瓶发酵产丁醇最高(0.52 g/L)的重组大肠杆菌DL1346-99d进行上罐发酵,丁醇产量可达1.07g/L。     

铜绿假单胞菌长链脂酰辅酶A合成酶的克隆及活性鉴定

早期诊断对于II型糖尿病的预防和治疗尤为重要,游离脂肪酸是II型糖尿病的早期诊断的重要因素.铜绿假单胞菌的长链脂酰辅酶A合成酶(FadD1)是一种可以检测游离脂肪酸的酶.表达并纯化了FadD1,利用分光光度法对其活性进行了鉴定,鉴定结果显示FadD1对油酸钾有较好的生物学活性.为今后游离脂肪酸分析酶热传感器的研制奠定了基础.     

海洋微藻中脂质13C稳定同位素标记LC-MS

以13 C标记的小硅藻(Nitzschia closterium f.minutissima)为研究对象,运用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱联用分析系统(UPLC-Q-TOF-MS)对其总脂进行分析,直接观察总脂中各类脂标记情况。研究结果表明,小硅藻中共检测出7类脂分子,分别为甜菜碱脂(DGTS)、二酰甘油单半乳糖脂(MGDG)、二酰甘油双半乳糖脂(DGDG)、二酰甘油(DAG)、三酰甘油(TAG)、二酰甘油硫代糖脂(SQDG)和磷脂酰甘油(PG)。其中DGTS、MGDG、DGDG、TAG和SQDG都可以检测到标记的结果。该方法操作方便,前处理简单,测量结果直观准确,是海洋生态系统研究和脂类代谢研究的一种新手段。     

具有除草活性的AHAS抑制剂小分子的研究进展

乙酰羟酸合成酶(AHAS)抑制剂是上世纪80年代开发兴起的一种新型除草剂,具有广谱、高效、低毒等特点,现已被广泛应用于田间的杂草防治.近年来,基于乙酰羟酸合成酶为靶标的抑制剂被大量开发.现将从抑制剂分子结构与生物活性方面概述磺酰脲类、三唑并嘧啶类、嘧啶水杨酸类以及三唑啉酮类等AHAS抑制剂的发展过程与研究进展.     

pgpA和tdcG基因的敲除对大肠杆菌磷脂酰丝氨酸合成的影响

磷脂酰丝氨酸具有改善大脑的认知和记忆的功能,是医药和食品行业重要的原料.为进一步提高大肠杆菌(Escherichia coli)中磷脂酰丝氨酸含量,利用Red重组系统,以可积累磷脂酰丝氨酸的E.coli K12(△sda A△sda B△pgp B)为出发菌株,敲除pgp A和tdc G基因,切断与磷脂酰丝氨酸合成相关的L-丝氨酸和磷脂酰甘油磷酸的分解代谢途径.摇瓶发酵后的检测结果表明,重组菌株E.coli K12(△sda A△sda B△pgp A△pgp B△tdc G)中磷脂酰丝氨酸占菌体总磷脂的比例为2.5%,较出发菌株(1%)提高了1.5倍.     

烟酰水杨酸对鹌鹑实验性脂肪肝的预防作用及机理初探

应用高脂饲料诱发的脂肪肝模型,观察烟酰水杨酸对鹌鹑实验性脂肪肝的预防作用并对其主要机理进行初步探讨。用NSA150mg·kg-1·d-1、NSA300mg·kg-1·d-1、NSA600mg·kg-1·d-1灌胃8周,可明显降低肝脏TG、TC和肝系数,并可使肝组织脂变程度明显减轻,烟酰水杨酸可显著激活脂蛋白脂酶(P<0.01)、抑制肝脂酶(P<0.05)。烟酰水杨酸对鹌鹑实验性脂肪肝有明显的预防作用,这一作用与激活脂蛋白脂酶、抑制肝脂酶有密切关系。     

FAE1启动子的克隆和转γ-TMT基因大豆的获得

脂肪酸链延长酶组分1(FAE1)是广泛存在于植物中催化脂肪酸碳链延长的酮脂酰CoA合成酶,该反应是脂肪酸碳链延长的限速步骤,在油料种子胚中特异性表达.以拟南芥基因组DNA为模板,设计引物,扩增到该基因的启动子片段.序列分析表明,该片段长度为943 bp,与GenBank注册序列AF355982达99.5%同源,并含有与之完全相同的种子特异性表达元件,据此认定它具有种子特异性启动活性.将其与甘蓝型油菜γ-生育酚甲基转移酶(γ-TMT)基因连接,构建成表达载体pFAE1-TMT,通过农杆菌介导的方法转化大豆胚尖,获得28株卡那霉素抗性筛选植株,进一步PCR检测获得2株转γ-TMT基因植株.     

小链霉菌HCCB10043敲除硫酯酶基因的工程菌株构建及其代谢产物的研究

小链霉菌(Streptomyces parvus)HCCB10043的主要代谢产物为脂肽类化合物A21978C,其基因组序列中包括了非核糖体肽合成酶(NRPS non ribosomal peptide synthetase)、聚酮合酶(PKS polyketide synthases)以及NRPS-PKS混合的多酶体系基因簇,它们的共同特点是在代谢产物生物合成簇中连接有一个硫酯酶域,即TE(thioesterase)domain.硫酯酶可以使已经合成的化合物链的合成过程终止,并且具有水解释放成熟脂肽以及环化线性脂肽链的功能.通过对联二吡啶类代谢产物合成簇中TE基因的敲除构得工程菌株,工程菌发酵结果表明联二吡啶类代谢产物产量减少.     

代谢工程改造Bacillus amyloliquefaciens提高Surfactin产量

Surfactin是芽孢杆菌属菌株通过多酶复合体合成的1种环状脂肽,属于次级代谢产物,具有异常优越的表面活性和抗菌、抗病毒、抗肿瘤等生物活性,但天然产量比较低.采用基因无痕操作方法,在Bacillus amyloliquefaciens NK-△LP菌株中敲除了2种结构类似物伊枯草菌素(Iturin)和丰原素(Fengycin)合成酶基因簇,构建了单敲菌株和双敲菌株;并分别过表达了与Swarming相关的SwrC蛋白、可能的跨膜转运蛋白YbfB和4'-磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶Sfp,surfactin最高产量达50.17 mg/L,相对单位产量达38.59 mg/L;探究了相关代谢过程改造对菌株蜂群运动(Swarming)能力的影响,为surfactin工程菌株构建提供了参考.