咪唑类物质KK-42对日本沼虾表皮矿化的影响

甲壳动物为了生长必须周期性地褪去旧表皮,新表皮的形成及矿化与蜕皮周期密切相关.前期研究发现,KK-42能够缩短日本沼虾蜕皮周期、加速表皮的形成.为了进一步探究KK-42对表皮矿化的影响,以矿化相对稳定的蜕皮间期(C期)头胸甲表皮为参照,选择蜕皮后3,6,12 h的头胸甲,采用扫描电镜/能谱仪法(SEM/EDX),在超微水平初步研究了表皮的矿化进程及KK-42处理对表皮矿化的影响.结果显示,对照组头胸甲表皮中钙、镁、磷信号在蜕皮后3 h开始出现,6 h钙、磷信号在上/外表皮的边缘处密集分布,此后逐渐向表皮内侧延伸.镁信号一直呈弥散状分布.半定量数据分析显示,与蜕皮后3 h相比,6,12 h及C期表皮中,钙原子比例分别提高了67.86%(P<0.01),402.78%(P<0.01),2 191.67%(P<0.01);镁原子比例分别提高了95.92%(P<0.05),122.45%(P<0.05),165.31(P<0.05);磷原子比例分别提高了82.46%(P<0.05),205.26%(P<0.01),591.23(P<0.01...     

KK-42对日本沼虾蜕皮激素及其受体表达的影响

用1.95×10-4 mol.L-1的KK-42处理日本沼虾1min,不同时刻抽取血淋巴、解剖肝胰腺.HPLC测定血淋巴中20E滴度,RT-PCR测定EcR和RXR mRNA水平.结果:KK-42处理后3h,6h,20E滴度分别比对照组增加了121.71%(P<0.05)、268.96%(P<0.01);EcR mRNA水平在处理后6h,12h,分别比对照组提高了233.56%(P<0.01)、110.73%(P<0.05);RXR mRNA水平在处理后3h、12h,分别比对照组提高了195.53%(P<0.01)、80.83%(P<0.05).表明KK-42可显著提高血淋巴中20E的滴度,并诱导肝胰腺中EcR和RXR的基因转录.     

KK-42对日本沼虾蜕皮前期外骨骼结构及NAGase活力的影响

近期研究发现,适宜浓度的KK-42处理能显著缩短日本沼虾幼虾蜕皮周期.新旧表皮的更替是蜕皮的重要事件,蜕皮前期是表皮外骨骼结构变化最剧烈的时期.据此,从组织学水平观察了幼虾头胸甲外骨骼结构以及KK-42的影响,定量分析了肝胰腺N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)在KK-42处理后不同时间的活力.将处于蜕皮前期(D1-4)、体长(3.3±0.5)cm的日本沼虾随机分为两组,分别用1.95×10-4 mol·L-1的KK-42溶液(实验组)或不含KK-42的溶液(对照组)浸泡处理1min,处理后不同时间,组织学方法观察头胸甲外骨骼结构,分光光度法测定肝胰腺NAGase活力.结果显示,KK-42处理后第3d,D3期和D4期幼虾头胸甲表皮厚度与对照组相比分别提高29.76%和35.23%(P0.01);KK-42处理后12h,D3期和D4期肝胰腺NAGase活力显著高于对照组.结果表明,KK-42处理可显著增加蜕皮前期日本沼虾头胸甲表皮外骨骼的厚度,并对肝胰腺NAGase活力具有诱导作用.     

日本沼虾表皮蛋白基因的克隆及表皮组织差异性表达分析

为探究日本沼虾表皮蛋白(Macrobrachium nipponense cuticle proteins,MnCPs)表达模式与表皮组织差异的关系,根据日本沼虾表皮组织转录组测序结果,从头胸甲中克隆到1个含几丁质结合-4(chitin_bind_4)结构域的表皮蛋白(cuticle proteins,CPs)基因,命名为MnCP-2,经BLAST检索,MnCP-2与远海梭子蟹(Portunus pelagicus,ABM54465.1)有50%的相似性.以健康幼虾(体长3.0~4.0cm)的头胸甲、尾扇、游泳足和步足4种厚度存在差异的表皮组织为材料,分别提取C期、D_(0-2)期、D_(3-4)期和A期的RNA,采用Real-time PCR技术,分析了MnCP-2在蜕皮周期不同阶段的相对表达量.结果显示,MnCP-2在头胸甲、尾扇和游泳足中表达水平的峰值出现在D_(3-4)期,而在步足中则出现在D_(0-2)期.提示MnCP-2编码的蛋白可能在新外表皮的形成中发挥重要作用,它在表皮组织不同部位的差异性表达可能是导致表皮结构差异的原因之一.     

日本沼虾基因片段PCR扩增的条件优化

以日本沼虾肌肉组织为材料,提取其基因组DNA,研究了该虾16S rRNA基因片段扩增的PCR反应条件.经对扩增反应体系中各因子和扩增程序的梯度实验,确定优化反应条件为: 在25μL反应体系中,10×Buffer 2.5 μL,DNA模板200～300 ng,4×dNTP 0.2 mmol/L,Mg²⁺1.5 mmol/L,引物0.4μmol/L,Taq DNA聚合酶1 U,95 ℃预变性5 min;接着35个循环包括95 ℃变性1 min,56 ℃复性50 s,72 ℃延伸1 min;最后72 ℃延伸10 min.应用此优化体系扩增日本沼虾18S rRNA,细胞色素氧化酶亚基I (cytochrome oxidase subunit I, COI),NADH脱氢酶亚基V (NADH dehydrogenase subunit 5, ND5)等基因片段均获得了稳定而理想的效果.研究结果为深入探讨日本沼虾种群的遗传和变异,以及开展其种质鉴定和分子标记等研究提供了参考.     

切除两侧眼柄对日本沼虾的影响

报道了切除日本沼虾两侧眼柄对其蜕壳、性腺成熟及体色等的影响⒚结果显示切除两侧眼柄可促使日本沼虾蜕壳和抱卵,并且在同样的温度下,未剪眼柄与剪眼柄的虾体色有较明显的不同⒚提高温度也可促使日本沼虾蜕壳,但不如剪眼柄处理那样显著     

罗氏沼虾原肌球蛋白基因的克隆表达及变应原性鉴定

通过NCBI查找到罗氏沼虾原肌球蛋白的mRNA,根据其CDS区域设计特异引物,通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)克隆出目的基因片段,测序后将该片段克隆到原核表达载体 pET-28a 上,转化到 E. coli BL21(DE3)和E. coli Rosatta后,经异丙基-B-D-硫代乳糖苷(IPTG)诱导表达,用Ni2+亲和层析柱对重组变应原进行纯化.采用免疫印迹检测其与对虾过敏患者血清的 IgE 结合活性.对罗氏沼虾变应原进行了表达、鉴定及纯化,成功地获得了具有变应原活性的重组罗氏沼虾原肌球蛋白,为罗氏沼虾过敏性疾病的诊断、治疗奠定了基础.     

饥饿对日本沼虾代谢及SOD活性的影响

在20℃条件下,对日本沼虾进行了不同时间的饥饿处理,研究饥饿对日本沼虾代谢及免疫水平的影响,探讨日本沼虾对饥饿的适应对策.结果表明,日本沼虾代谢率在饥饿处理的2~4 d和8~10 d分别出现2个相对的代谢稳定区,即饥饿适应代谢区和饥饿存活代谢区,SOD比活力在饥饿处理期间显著下降.     

Hg2+对日本沼虾的毒性作用

研究了Hg2+对日本沼虾的急性毒性,在24℃下,测定了Hg2+对日本沼虾(Macrbrachium nipponnensis)的24,48,72和96 h的LC50值分别为60.2,52.4,47.6和38.0μg/L.在几个Hg2+质量浓度梯度胁迫下,超氧化物歧化酶(SOD),Na+-K+ATPase,谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)活性均受到不同程度的抑制,随Hg2+质量浓度的升高,抑制作用越明显.     

不同波长光照对日本沼虾视觉的影响

被剪去触角的日本沼虾经过暗适应12h后，在不同波长的红光(750nm)，黄光(580nm)蓝光（400nm)，绿光(560nm)下，其平均摄食量差异极显著。在红光和绿光光照区域内的平均摄食量为65．71％和61．15％，远大于蓝光和黄光光照区域内的41．86％和33．08％。同样经过12h的暗适应后，在无饵料的情况下，日本沼虾的趋光行为为红光的频次最高。     

KK-42对南美白对虾甲基转移酶基因转录的影响

采用浸润法,用1.95×10-4mol/L的保幼激素拮抗物KK-42处理平均体长3～5cm南美白对虾,而后常规养殖,不同时间取样,解剖大颚器官.RNA的提取采用适当改进的TRIzol一步法,Real-timePCR测定法呢酸O-甲基转移酶mRNA水平.结果:采用改进的TRIzol一步法提高了大颚器官组织RNA的产率和质量;KK-42处理后5d、10d,南美白对虾大颚器官法呢酸O-甲基转移酶mRNA水平均比同期对照组低86%和82%,表明KK-42处理的早期即可显著抑制幼虾法呢酸O-甲基转移酶的基因转录.     

亚油酸对培养日本沼虾肝胰腺细胞的影响

对日本沼虾肝胰腺细胞进行培养,采用M199 (GIBCO BRL) 细胞培养基加质量分数为10%的胎牛血清,添加的补充成分有:NaCl,NaHCO3,MgCl2,CaCl2,葡萄糖,青霉素和链霉素.同时对pH和渗透压两因子进行了研究,结果表明pH 7.0～7.2、渗透压为600 μmol/g时,细胞长势最好.以此作为培养条件,在培养基中加入促细胞生长因子的亚油酸,发现其促生长作用明显,其中亚油酸浓度为16×10-5 mol/L时,促进作用最好.日本沼虾肝胰腺细胞共继代2次,存活时间约45 d.     

柠檬酸稀土对青虾卵子孵化的影响

研究了柠檬酸稀土对青虾Macrobrachiumnipponense卵子孵化的影响,结果表明:当柠檬酸稀土的浓度为0.1～0.6mg/L时,孵化率无显著差异;当柠檬酸稀土的浓度为1.2～4.8mg/L,孵化率比对照组高10.6%～26.2%,当柠檬酸稀土的浓度大于9.6mg/L后,孵化率显著降低.卵子对柠檬酸稀土的饱和吸收量为7.95μg/粒.     

莠去津对雌性日本沼虾的毒性作用

研究莠去津对雌性日本沼虾的生殖毒性,为其养殖水体水质管理提供依据.以概率作图法计算日本沼虾24,48,72和96 h的半致死质量浓度,并观察各暴露组卵巢组织结构的变化.通过胁迫实验,研究莠去津对暴露4 d和8 d的日本沼虾卵巢乳酸脱氢酶(LDH)比活力的影响.结果表明:22℃时,莠去津对雌性日本沼虾24,48,72和96 h的半致死质量浓度分别为134.23,90.24,52.57和46.36 mg/L,安全质量浓度为4.64 mg/L;卵巢急性毒性实验切片显示,随莠去津质量浓度的增大,卵母细胞间隙增大,胞体膨大、变形.胁迫实验表明,低质量浓度莠去津在短时间内对卵巢LDH活力有诱导作用,当质量浓度高于0.46 mg/L时,LDH活力明显受到抑制.本研究提示,莠去津对雌性日本沼虾具有生殖毒性作用.     

银、铜、锰对日本沼虾的急性致毒剂量

Ag(Ⅰ)对白洋淀日本沼虾的24h LC_(50)为0.024mg/L,48h LC_(50)为0.014mg/L,安全浓度为0.0014mg/L;Cu(Ⅱ)对这种虾的24h LC_(50)为0.600mg/L,48h LC_(50)为0.400mg/L,安全浓度为0.053mg/L;而Mn(Ⅱ)对该虾的24h LC_(50)》32mg/L。上述研究结果,为渔业水质标准的修订和补充以及水质的评价提供了科学依据。     

饲料中锰对日本沼虾抗氧化酶活性的影响

研究了日本沼虾(Macrobrachium nipponense)饲料中不同含量的Mn对虾体抗氧化酶活性的影响,以及在低氧胁迫下Mn对抗氧化酶的激活效果.结果表明,在投喂Mn的质量分数为150 ?g/g的饲料后,日本沼虾的超氧阴离子(O2·-)值降低,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性升高.Mn对虾体内SOD,CAT和GPX的激活作用表现出明显的剂量效应,饲料中Mn的缺乏或过量都使它们的活性受到影响.在低氧胁迫下,饲料中适量的Mn在一定程度上可提高虾体对低氧环境的耐受力.