产甘油酵母菌株的分离与鉴定

针对西部极端微生物资源开发,从川西北高寒草地野生花粉中分离耐高渗的酵母菌株,通过采用形态和生理生化试验对分离出的3株编号为SCU-1、SCU-2、SCU-3的酵母菌株进行鉴定,初步鉴定3个菌株为：粉状毕赤酵母(Pichia farinosa)、克鲁丝假丝酵母(Candida kru-sei)、酿酒酵母(Saccharomyces cereuisiae),通过对3株酵母菌株的产甘油鉴定结果显示,耐高渗粉状毕赤酵母可通过产生甘油适应外界渗透压变化。     

高通量测序技术分析酱香型白酒酒醅的微生物多样性

通过提取酱香型白酒福矛窖酒生产发酵的第2轮窖内发酵末期、第3轮堆积发酵、第3轮窖内发酵中期的酒醅微生物基因组DNA,采用高通量测序技术对各个发酵时期的酒醅的微生物多样性进行测序分析,实验结果显示:福矛窖酒的堆积发酵和窖内发酵的酒醅的微生物菌群结构具有多样性.不同发酵时期的优势菌群,堆积发酵酒醅的优势微生物为乳球菌属、醋酸杆菌属、芽孢杆菌属、梭形杆菌属、假丝酵母属、曲霉属.窖内发酵酒醅的优势微生物为乳杆菌属、醋酸杆菌属、青霉菌属、毕赤酵母属、曲霉属、嗜热子囊菌属、假丝酵母属.从实验结果分析初步揭示不同发酵时期的酿造微生物功能以及在酱香型白酒的酿造过程的作用,酱香型白酒的丰富香味物质的产生与酿造微生物菌群具有相关性.     

基于FSVM的马克斯克鲁维酵母菌发酵过程的软测量

针对马克斯克鲁维酵母菌发酵过程存在高度的复杂性和非线性问题,提出采用模糊支持向量机建立马克斯克鲁维酵母菌的发酵预测模型,通过预测在不同温度、时间、PH值、培养基中葡萄糖含量等因素的影响下细胞生物量的含量,从而寻找该酵母菌最佳的生长发酵条件。Matlab仿真实验结果表明,该方法有效地缩短了训练时间,提高了预测精度和模型的抗噪性,其性能优于一般支持向景机预测模型。     

高温酿酒融合株AY023酒精发酵条件研究（Ⅰ）

酿酒酵母Ａ００１与克鲁维酵母Ｙ０３４进行属间原生质体融合，得到融合株ＡＹ０２３，该株具双亲优良性状，在４５℃条件下，通过优化发酵基质成分，以１５％的葡萄糖浓度进行厌氧发酵产酒率７％，为理论产率的９１．５％。     

草莓酒自然发酵过程中的真菌群落分析

利用高通量测序技术对发酵初、中、末期草莓酒中的真菌群落进行了分析。结果显示,草莓酒中的真菌隶属于7个菌门,29个纲,70个目,127个科,195个属。在门水平,子囊菌门、担子菌门、接合菌门始终是绝对优势菌群。在属水平,Pilidium、子囊菌门未确定属、葡萄孢霉属是草莓酒自然发酵过程中的主要优势菌群。假丝酵母属、隐球酵母属、毕赤酵母属、掷孢酵母属、亚罗酵母属是主要的非酿酒酵母。菌群动态及差异分析显示,葡萄孢霉属、假丝酵母属、毕赤酵母属与草莓酒的理化及感官品质可能存在较为密切的关系。研究初步阐明了草莓酒自然发酵过程中的真菌群落结构,对草莓酒的发酵管理及品质改良具有一定的指导意义。     

浓香型大曲中一株酵母菌的分离鉴定及其挥发性产物分析

大曲是酒醅中酵母菌的重要来源,酵母菌对产酒、产酯、生香等都有相应的影响。研究大曲中的酵母菌对指导大曲生产、稳定大曲质量、提升白酒品质具有重要意义和价值。试验采用传统平板分离法从浓香型大曲中分离得到一株酵母菌,先通过形态特征观察并利用Biolog微生物鉴定系统进行鉴定,然后对其固态发酵代谢的挥发性产物进行GC-MS分析。结果表明,该菌株为休哈塔假丝酵母(Candida shehatae),其挥发性产物主要为乙醇、异戊醇和苯乙醇等醇类,并含有多种其他香味物质如异戊酸、苯乙醛、辛酸乙酯等。揭示了浓香型大曲中存在休哈塔假丝酵母,其主要作用为发酵产酒和产香味物质。     

一株马克斯克鲁维酵母菌株的分离鉴定与形态观察

通过分离培养,从一株来自民间的“藏灵菇”（kefir粒）中成功分离出一株生长好、耐热、遗传稳定的酵母菌株;通过形态特性观察、DNA序列分析、生化特性试验对其作出了菌种鉴定,证明其为一株马克斯克鲁维酵母菌;在实验室特定的培养基、pH、温度条件下,应用常规技术对该菌进行了培养生长周期的观察,描述了其不同生长周期的形态。     

克鲁维酵母中外切菊粉酶基因在毕赤酵母中的表达研究

用PCR的方法从克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)ATCC12424中克隆出外切菊粉酶基因.将该基因克隆到毕赤酵母表达载体pHBM905C、pHBM906上,构建了外切菊粉酶毕赤酵母表达载体pHBM1200、pHBM1201.将两者转化毕赤酵母GS115,得到重组菌株GS115(pHBM1200)、GS115(pHBM1201),将这两种重组菌株进行摇瓶发酵,测得带α-信号肽的菌株GS115(pHBM1200)表达的外切菊粉酶最高酶活为89.43 U/mL,带自身信号肽的菌株GS115(pHBM1201)表达的外切菊粉酶最高酶活为14.828 U/mL.SDS-PAGE电泳表明,外切菊粉酶的表观分子量为90 kD.将外切菊粉酶用去糖基化酶endoH处理后,SDS-PAGE电泳表明,分子量为60 kD,和预计的分子量一致.     

耐酸酵母的分离鉴定及在丢糟发酵中的应用

从白酒丢糟及酒醅中分离得到2株酵母菌YP2、YZ13,两株菌均能在pH 3.0条件下正常生长,经鉴定YP2为Candida属,与Candida pseudolambica(KM384061.1)相似度98%;YZ13为Pichia属,与Pichia kudriavzevii(LC014798.1)相似度100%.2株酵母(种子液体积比1∶1)应用于丢糟发酵中,接种量100 mL/kg,在鲜丢糟870 g/kg、麸皮100 g/kg、硫酸铵15 g/kg、生石灰15 g/kg,28 ℃混合固态发酵60 h,丢糟(干样)的真蛋白含量达172.30 g/kg,比发酵前丢糟(干样)提高了28.29%,丰富了丢糟饲料蛋白,为丢糟发酵和高效饲料提供了依据.     

发酵木糖高产乙醇树干毕赤酵母菌株的Co60诱变选育

【目的】选育能够利用木糖高产乙醇的酵母菌株。【方法】采用Co60诱变树干毕赤酵母(Pichia stipitis),筛选乙醇产量高的突变菌株,并对原始菌株、突变菌株的生长发酵特性和两个菌株对高浓度木糖、乙醇的耐受性进行比较。【结果】在YPX培养基上筛选获得1株能够高效发酵木糖的突变菌株1K-9。该菌株在50mL 15%FM发酵84h,发酵液乙醇含量最高达(51.034±0.112)g/L,比原始菌株提高10.05%;在500mL 15%FM发酵96h,乙醇含量最高达(51.390±0.119)g/L;在500mL 20%FM发酵156h,乙醇含量最高达(52.496±0.513)g/L。菌株1K-9在HSM培养基或含4%~5%乙醇的YPX培养基中生长良好,在含6%~7%乙醇的YPX培养基中生长缓慢。【结论】Co60诱变对于树干毕赤酵母(Pichia stipitis)菌株是有效的,能选育出木糖高产乙醇酵母菌株1K-9。     

霞多丽葡萄自然发酵醪中酿酒酵母的分离及其酿造特性分析

以烟台地区霞多丽葡萄自然发酵醪为材料,筛选鉴定本土酿酒酵母并测定其发酵力和耐受性,选育优良酵母用于霞多丽干白和赤霞珠干红葡萄酒的酿造。用孟加拉红培养基筛选酵母菌,经WL显色鉴别培养基和5.8S ITS序列鉴定获得12株酿酒酵母。通过测定受试菌株发酵后残糖量、酒精度及耐受能力(酒精度、SO₂、酸、高糖),选育4株酵母用于酿造霞多丽干白葡萄酒,测定发酵参数指标和主要挥发物含量,并结合感官评定确定酵母YXF2、YXF5和YXF10适宜酿造干白葡萄酒。菌株YXF5和YXF10酿造生产的干红葡萄酒香气特征明显,不同于商品酵母,具备酿造地域特色葡萄酒的潜力。     

两株产人参皂苷糖苷酶酵母菌株的18S rDNA和ITS序列分析

对两株产人参皂苷糖苷酶的酵母菌株进行核糖体18S rDNA和ITS序列克隆测定,获得了长度分别为1 477和1 478 bp的18S rDNA序列和长度分别为791和727 bp的ITS序列,对获得的基因序列进行比对及同源性分析,结果显示,两株酵母菌的18S rDNA序列的相似性达100%,而ITS序列的相似性则为66%,均与NCBI数据库中登录的啤酒酵母的相应序列同源性最高.从GenBank中选取部分不同种属的酵母菌ITS序列,以ITS为对象构建系统发育树,从分子生物学角度确定了两株酵母菌为酵母菌属的不同种类.     

甘肃张掖地区葡萄天然酵母菌的筛选及其系统发育分析

目的：通过对张掖地区酵母菌的筛选,了解张掖地区酵母菌的生物多样性。方法：采用YPD培养基分离纯化菌株,通过26SrDNA基因D1／D2区序列分析确定菌种的系统进化地位。结果：分离筛选出6个属天然酵母菌。分别为：假丝酵母属Candida、Meyerozyma属、红酵母属Rhodotorula、孢汉逊属Hanseniaspora、酿酒酵母Saccharomycescerevisiae和毕赤酵母属Pichia,共10个种,其中包括6个疑似种。     

3株抗灰霉病放线菌的分离和鉴定

 从云南永胜、中甸采集的土壤样品中分离到3株放线菌菌株YIM31658,YIM31679,YIM31777.具有很强的抗灰霉病活性,防效均达到100%.通过对其进行形态特征、生理生化特性、细胞壁化学组分以及16SrDNA序列等多相分类研究,确定其分属链霉菌属和链孢囊菌属.     

可降解淀粉酿酒酵母基因工程菌的构建及其生产应用

将酿酒酵母的rDNA片段,黑曲霉葡萄糖淀粉酶基因表达盒及G418抗性基因表达盒重组进经过改造的质粒pSP72,构建酿酒酵母整合型质粒YIp4RGAn及YIp19RGAn,转化酿酒酵母实验室菌株GRF18、生产菌株JL108、SD和JM,获得能高效表达葡萄糖淀粉酶和分解淀粉的酿酒酵母基因工菌。Southern印迹分析证明,葡萄糖淀粉酶基因已整合进工程菌染色体。这些工程菌在含有20%淀粉的培养基中培养,产酒率都在11%以上。     

海绵Pseudoceratina sp.共栖细菌多样性及其抑制甘蔗鞭黑粉菌活性研究

【目的】探讨广西斜阳岛附近海域海绵共附生细菌的多样性,并筛选对甘蔗鞭黑粉菌有抑制作用的活性物质,为发现潜在的细菌新物种及开发农用生防菌肥奠定基础。【方法】采用稀释涂布法,通过6种复合营养分离培养基,从海绵Pseudoceratina sp.中分离可培养的共附生细菌。采取细菌形态学观察去除冗余,通过PCR扩增菌株的16SrRNA基因序列,并通过构建系统发育树分析物种多样性。采用牛津杯法进行抑制甘蔗鞭黑粉菌活性筛选实验。【结果】从海绵Pseudoceratina sp.中共分离到可培养细菌54株,经16SrRNA基因序列对比后,获得24株细菌,隶属于13科14属。其中,菌株BGMRC 2118与已发表有效菌株的16SrRNA基因序列的最高相似率为96.46%,可能为潜在新种。抑菌筛选实验结果显示,有8株细菌的发酵粗提物对甘蔗鞭黑粉菌具有很强的抑菌活性。【结论】广西斜阳岛附近海域中海绵共附生细菌具有较高的物种多样性,蕴藏着丰富的新物种资源,富含生物活性菌株。     

酵母降胆固醇药物筛选模型的建立与应用

根据酵母和人类在固醇代谢机制方面的高度保守性,通过构建不同的麦角固醇合成相关基凼缺失菌株建立了一种新的基于酵母菌的降胆固醇药物筛选模型,并以作用机理明确的药物洛伐他汀和吉非罗其作为对照标准,探索了本模型对降胆固醇药物的筛选条件．进而利用本模型对临床报道有降胆固醇作用的传统中药：丹参、山楂以及成分明确、疗效显著的复方亚油酸胶囊和月见草油胶丸进行了筛选试验．结果验证了利用本模型筛选药物的可行性,并初步分析了上述药物可能的作用机理．     

Conformational diversity in a yeast prion dictates its seeding specificity

A perplexing feature of prion-based inheritance is that prions composed of the same polypeptide can evoke different phenotypes (such as distribution of brain lesions), even when propagated in genetically identical hosts. The molecular basis of this strain diversity and the relationship between strains and barriers limiting transmission between species remain unclear. We have used the yeast prion phenomenon [PSI+]4 to investigate these issues and examine the role that conformational differences may have in prion strains. We have made a chimaeric fusion between the prion domains of two species (Saccharomyces cerevisae and Candida albicans) of Sup35, the protein responsible for [PSI+]. Here we report that this chimaera forms alternate prion strains in vivo when initiated by transient overexpression of different Sup35 species. Similarly, in vitro the purified chimaera, when seeded with different species of Sup35 fibres, establishes and propagates distinct amyloid conformations. These fibre conformations dictate amyloid seeding specificity: a chimaera seeded by S. cerevisiae fibres efficiently catalyses conversion of S. cerevisiae Sup35 but not of C. albicans Sup35, and vice versa. These and other considerations argue that heritable prion strains result from self-propagating conformational differences within the prion protein itself. Moreover, these conformational differences seem to act in concert with the primary structure to determine a prion's propensity for transmission across a species barrier.     

酿酒酵母SCH9基因缺失抑制其H2S代谢

H2S作为NO、CO之后的第三个气体信号分子,在心血管和神经系统方面的显著效果引起了人们的关注。酿酒酵母Sch9同源于人类S6K1,可以调节细胞周期和寿命。一定程度内增加细胞内H2S的浓度和SCH9缺失均可延长动物寿命,同样 H2S和Sch9也参与了热量限制延长寿命的机制。为了研究酿酒酵母SCH9缺失是否影响其H2S代谢,我们用GYY4137和NaHS作为H2S供体,用醋酸铅试纸检测反应体系中H2S含量,以酿酒酵母SCH9缺失型菌株RCD398、RCD399和TS120-2d为研究对象,探究SCH9基因缺失对其H2S代谢的影响。结果发现在SCH9缺失型菌株中,非热量限制和热量限制均下调其H2S的生成,也可下调其对外源H2S的代谢。由此推测酿酒酵母SCH9缺失既可以下调其H2S的生成,也可以下调其对外源H2S的代谢,这对酿酒酵母中H2S代谢的进一步研究奠定了理论基础。     

红树林土壤中假单胞菌群的重金属耐受活性

本研究从广西钦州茅尾海红树林保护区土壤中分离出的假单胞菌群着手，对其进行重金属耐受性能筛选，旨在获得可对重金属污染环境进行高效修复的菌株。选用传统稀释涂布法和16S rRNA基因序列的系统发育分析红树林土壤中的可培养假单胞菌；通过肉汤稀释法对菌株展开6种重金属耐受特性研究，对其进行耐受基因检测，并进一步测试重金属耐受活性显著菌株的重金属吸附性能。结果表明，从红树林土壤中共获得23株假单胞菌，18株菌对至少一种重金属表现出耐受活性，总阳性率为78.26%；10株菌的基因组DNA中检测出重金属耐受基因。其中，对铅和/或锌耐受活性显著的11株菌中，Y234、Y123、Y264、Y225和Y346具有显著的吸附性能，铅和/或锌的吸附率均大于50%。广西钦州茅尾海红树林保护区土壤中可培养假单胞菌群丰富，其重金属耐受活性显著，具有较大的挖掘潜力。