苏云金杆菌4.0718菌株InhA的鉴定和不同生长时期的表达分析

免疫抑制因子A (Immune Inhibitor A, InhA)是苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis, Bt)分泌的一种锌金属蛋白酶,具有水解昆虫抗菌肽的活性.为了研究InhA在Bt 4.0718菌株中的重要功能,利用SDS-PAGE分离了Bt 4.0718菌株营养生长中期、芽胞早期和芽胞晚期的细胞总蛋白质,通过MALDI-TOF/TOF MS分析以及数据库搜索,鉴定到了相对分子质量为86.5kD、pI为5.37的InhA蛋白质.然后采用双向电泳(2-DE)技术检测该蛋白质在不同时期表达量的差异,发现分离和鉴定到的InhA及相对分子质量为75kD、pI为5.13的InhA precursor蛋白质在营养生长中期的表达量比较高,说明InhA在营养生长中期前已开始形成,直到芽胞早期达最大表达量,但芽胞晚期的图谱分析和质谱鉴定均未发现InhA. InhA在营养期的高效表达说明:Bt进入昆虫体内后,InhA在Bt细胞生长繁殖初期表达,并抑制昆虫体内的抗菌肽对Bt细胞的裂解作用,从而有助于Bt在昆虫宿主中的生存,为芽胞期晶体和芽胞的形成以及菌株毒力的发挥奠定了基础.     

不动杆菌的耐药性分析

调查2010～2011年临床分离不动杆菌分布及耐药情况.按常规方法培养分离细菌,用VITEK32进行细菌鉴定和药敏,用纸片扩散法做补充药敏实验.结果显示临床不动杆菌分离率高,分离率〉11%.分离标本主要为痰和咽拭子,构成比〉80%.以鲍曼不动杆菌为主,构成比〉75%.不动杆菌耐药广泛,对临床常见药物大多表现较高的耐药率,耐药率〉50%.头孢哌酮/舒巴坦耐药率较低,耐药率〈5%.治疗的推荐方案多用替加环素、碳青酶烯类联合舒巴坦、多粘菌素联合利福平或阿米卡星等.     

一株枯草芽胞杆菌的分离鉴定及其杀虫活性的研究

以从土壤中自行分离的219株芽胞杆菌中筛选的一株枯草芽胞杆菌菌株HX08为研究对象,通过菌落形态观察、扫描电镜、激光共聚焦显微镜等进行菌体形态观察以及16S rRNA基因同源性分析等一系列方法鉴定,该株细菌属枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis,命名为HX08,并将其16S rRNA基因序列提交上Genebank数据库,获得登陆号KF774302.通过生测发现,HX08菌株在60 h发酵时间段对棉铃虫的致死效果最好.对该菌株发酵液提取的活性蛋白进行初步研究,建立了HPLC技术分离体系,使用H2O做流动相,以0.5 mL/min流速洗脱,检测波长分别为215、254和280 nm,收集第15 mL收集管处即保留时间为31 min的2号峰粗分离物活性较高.切取SDS-PAGE胶上相对应活性峰目的蛋白质条带酶解,利用质谱(LTQ-MS)技术进行了分子特性分析,鉴定发现杀虫活性蛋白成分为草酸脱羧酶.     

某中医院消化科323株病原菌的分布及耐药分析

调查中医院消化科临床常见病原菌的分布及耐药性。回顾分析消化科分离病原菌,病原菌鉴定和药敏实验采用VITEK2分析仪。结果表明:消化科共分离323株病原菌,构成比69.35%为革兰氏阴性菌、26.32%为革兰氏阳性菌、4.33%为真菌。标本以痰液及血液为主,位于前5位的病原菌依次为大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、表皮葡萄球菌。耐甲氧西林表皮葡萄球菌分离率为76.0%,未检测出耐万古霉素和耐利奈唑胺的葡萄球菌及肠球菌株。肠杆菌科细菌除青霉素、一代头孢耐药率较高外,对其他常用药物耐药率较低。铜绿假单胞菌对氨基糖苷类、碳青酶烯类、喹诺酮类抗菌药及哌拉西林/他唑巴坦的耐药率低于15%。鲍曼不动杆菌表现多重耐药,耐药率高于80%,只有替甲环素、多粘菌素不耐药。消化科细菌耐药情况尚不严重,但需高度重视鲍曼不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、耐甲氧西林葡萄球菌的情况,减少耐药菌株的传播。     

免疫共沉淀结合质谱分析筛选HMGB4相互作用蛋白

为揭示HMGB4在精子发生过程中所起的作用,采用免疫共沉淀技术富集NTera-2细胞中的HMGB4 结合蛋白.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对免疫沉淀复合物进行分离,从胶中切取HMGB4结合蛋白条带,胶内酶解后进行电喷雾串联质谱(LC-ESI-MS/MS)分析,得到相应的肽序列标签(peptide sequence tags,PST).通过搜索数据库在NTera-2细胞系中鉴定到5个HMGB4相互作用蛋白,分别是Pdhal、Keratin 6B、Keratin 5、Actb Actin cytoplasmic 1、RPL18.为进一步研究HMGB4在精子发生机制中的生理功能提供了基础.     

大型变压器介质油放线菌的研究

用自制的ＪＯＡ液体培养基从报废的大型变压器介质油中分离得到枝动菌和罗思氏菌,并对其形态、细胞壁化学组分及一些生理生化特性进行实验分析,结果表明,这两种放线菌都能以变压器介质油为惟一碳源进行生长繁殖,前者为革兰氏染色阴性,培养早期断裂为杆状;后者为革兰氏染色阳性和有有明显的有分杆菌丝。     

大鲵细菌性感染综合症的病原分离与药敏试验分析

对细菌性感染综合症病鲵的体表、肝脏、肾脏、肠道、四肢、腹水等进行细菌分离培养与纯化,共得到12株细菌.经细菌的形态结构、生理生化特性鉴定和人工感染试验证实,布拉克枸橼酸杆菌(Citrobacter braakii),嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)和洛菲不动杆菌(Acinetobacter lwoffi)为主要致病菌.药敏试验结果表明,3种病原菌对很多抗生素均存在不同程度的耐药性,而对美洛培南(Meropenem)高度敏感,其可作为防治该病的首选药物.     

中华鳖“腐皮、疖疮”并发症致病菌的病原分离与药敏试验分析

为了鉴定中华鳖"腐皮、疖疮"并发症的病原菌种类,对已呈明显发病症状且频死的20个、体重在100～1 000 g之间的中华鳖病样进行了病原菌的分离鉴定,经细菌组织涂片、分离培养与纯化、生理生化特性鉴定和人工感染试验证实,主要致病菌为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)和洛菲不动杆菌(Acinetobacter lwoffi).药敏试验结果表明,两种病原菌对很多抗生素均存在不同程度的耐药性,而对美洛培南(Meropenem)、复方新诺明(Trimethoprim/Sulfa)等高度敏感,可作为防治该病的首选药物.     

沤麻系统中一株甘露聚糖酶产生菌产酶条件的优化

从实验室温水沤麻液中分离到了一株产甘露聚糖酶(mannanase)的芽孢杆菌HDYM-03菌株,经生理生化试验及16S rDNA序列分析鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis).研究了菌株72 h连续发酵过程中产酶及生长的动态变化,通过单因素及正交实验优化得到其实验室最优产酶条件为:碳源6%魔芋粉,氮源3%蛋白胨,初始pH值8.0,装液量100 mL/250 mL三角瓶,接种量2%,37℃振荡培养48 h.在研究条件下发酵液酶活力为5 122 U/mL,比优化前提高了2.1倍.     

一株聚藻菌株的分离、鉴定及除藻特性研究(英文)

从武汉某一湖泊中分离出一株具有聚藻作用的菌株,经过生理生化特性和16Sr DNA序列分析,该菌株被鉴定为根癌土壤杆菌。对该菌株去除铜绿微囊藻的效果和机理进行了进一步的研究,结果表明,本文分离出的根癌土壤杆菌对铜绿微囊藻具有很好的去除效果,加入体积比为1.5%的细菌培养液,在2天后,溶液主体的藻浓度去除率可达到92.5%。根癌土壤杆菌对铜绿微囊藻的去除作用主要是通过凝聚效应,而不是通过溶藻效应抑制藻类生长。进一步研究发现,只有当该聚藻菌株与藻细胞直接接触时,菌株才能够起到聚藻作用,而菌株生长液的过滤液并没有任何聚藻作用,表明聚藻活性物质结合在根癌土壤杆菌的细胞表面。聚藻菌株技术与过滤或者其他物理分离技术相结合除藻时,不会导致藻细胞的破裂,是一种具有应用前景的除藻方法。     

嗜热硫氧化硫化杆菌一新菌株的分离与鉴定

从云南腾冲酸性热泉富集物中分离到一株适度嗜热喜酸菌YN22.该菌革兰氏染色阳性,直杆状或微弯,长约1.6~2.8μm,直径0.4~0.7μm.该菌能在25~60℃下生长,最适生长温度为53℃;生长pH为1.0~5.0,最适pH为1.5;化能自养型,0.025%(w/V)的酵母提取物对其生长有明显的促进作用,在酵母提取物存在的情况下能快速氧化Fe2 ,但对S0和还原型硫化物的氧化能力较低.16s rDNA系统发育分析表明,该菌与嗜热硫氧化硫化杆菌(Sulfobacillus thermosulfidooxidans)的16s rDNA序列相似性达99%.YN22基因组DNA的G C含量为47.3 mol%,与嗜热硫氧化硫化杆菌模式菌株VKM B-1 269非常接近,后者基因组DNA的G C含量为47.5 mol%.基于形态特征、生理生化特性、系统发育学和G C含量的分析结果,YN22应归于硫化杆菌属(Sulfobacillus),为嗜热硫氧化硫化杆菌(Sb.thermosulfidooxidans)的一新菌株.这是国内首次分离,并经多种方法鉴定、确认的嗜热硫氧化硫化杆菌,从而为我国浸矿微生物的基础和应用研究提供了最典型的适度嗜热菌种.     

烃降解菌HL-6的分类鉴定、降解性能及应用研究

从新疆油田石油污染土壤中分离到一株烃降解细菌HL-6,经生理生化实验和分子生物学方法初步鉴定为红球菌(Rhodococcussp.).研究表明,利用乙醇无机盐培养基培养液体种子是适宜的,菌体浓度可达108CFU/mL.在以柴油为唯一碳源的无机盐培养基中,25℃振荡培养3d,烃降解率达到78.5%.该菌降解烷烃的范围很广泛,对C11~C36均有不同程度的降解.将乙醇制备的种子液与沸石按照2∶1的比例制备成固体菌剂加入以柴油为唯一碳源的无机盐培养基中进行25℃振荡培养7d,同时与以相同菌浓液体菌剂接种的降解情况进行对照,最终降解率液体菌剂达到82.8%,固体菌剂达到74.6%.固体菌剂和液体菌剂可分别用于海洋滩涂和土壤石油污染的生物修复研究.     

高温产生物表面活性剂菌种的筛选及性能评价

从胜利油田油井产出液及含油污水等样品中分离出16株能利用原油的菌株.通过原油平板涂布和液体发酵培养,筛选出1株能在高温(60℃)、高压(10 MPa)下以原油为唯一碳源生长且能有效产出生物表面活性剂的菌株CH2.原油作用实验结果表明其对胜利油田东辛原油降粘率可达48.5%,原油含蜡量降低12.6%,原油凝固点降低3.0℃;红外光谱分析显示该菌株产生的生物表面活性剂为糖脂类,经分子生物学初步鉴定菌株CH2为蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus).物理模拟驱油实验显示聚合物驱油后,注入CH2菌液60℃培养21 d时可提高原油采收率8.6%.     

HPLC ICP MS同时检测As和Se形态的方法研究

建立了高效液相色谱电感耦合等离子体质谱联用（HPLCICPMS）同时测定4种As形态和3种Se形态的方法采用Hamilton PRPX100分析柱分离,碰撞反应池技术检测各形态的检出限分别为：As（Ⅲ）02 μg/L,DMA 02 μg/L,MMA 02 μg/L,As（Ⅴ）03 μg/L,SeCys 05 μg/L,Se（Ⅳ）04 μg/L,SeMet 25 μg/L当各As形态浓度范围为10～200 μg/L、SeCys和Se （Ⅳ）浓度范围为10～200 μg/L,SeMet浓度范围为50～1 000 μg/L时,各形态均可得到良好的线性关系,线性相关系数均大于0 999 5蘑菇和鱼肉实际样品加标回收率在816%~1037%之间     

一株好氧反硝化菌的筛选鉴定及其系统发育分析

从稳定运行的序列间歇式活性污泥(SBR)反应器中分离纯化得到一株好氧反硝化菌(实验室命名为CFY1),对菌株CFY1进行了形态观察、生理生化鉴定及16S r DNA基因序列分析,并对其好氧条件下的反硝化能力进行了考察。结果表明,菌株CFY1的菌落呈圆形,乳黄色,半透明,表面光滑,边缘不整齐,菌体细胞为短杆状,无芽孢,革兰氏染色呈阴性;氧化酶反应呈阳性,具有分解葡萄糖和淀粉以及还原硝酸盐的能力;菌株CFY1的16S r DNA序列经BLAST分析,与Gen Bank中施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)具有98.9%同源性,结合该菌株的形态和生理生化特征,可基本确定菌株为施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri),NCBI Gen Bank登录号为KC253270;在摇床转速150 r·min-1、培养温度30℃及p H值7.2的培养条件下,24 h内能将113.6 mg·L-1的NO3--N降解为0 mg·L-1。