中国番茄黄化曲叶病毒（TYLCV—CHI）外壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达及抗血

经PCR获得了中国番茄黄化曲叶病毒（TYLCV－CHI）外壳蛋白（CP）基因，并克隆到pGEM-7Zf( ) 载体上，序列分析表明，TYLCV－CHI感染番茄或烟草时，CP基因的核苷酸序列发生变化，并且在烟草上随感染时间的延长，突变频率增高。连接到含有编码tRNAarg4基因argU的表达载体pSBET后，TYLCV－CHI CP基因在大肠杆菌中以包含体形式得到大量表达（约33ku)。以表达的蛋白作抗原免疫家兔，制备了抗TYLCV－CHI CP的抗血清。ELISA实验表明，该血清与抗原特异反应，血清效价为TYLCV－CHI CP的抗血清。ELISA实验表明，该血清与抗原特异反应，血清效价为1：3000。Western印迹实验还表明，该血清除了与感染TYLCV－CHI的番茄、烟草有特异免疫反应外，还与感染南瓜曲叶病、烟草曲叶病的叶片有免疫反应，表明这些病毒之间有明显的 血清学关系。     

中国番茄黄化曲叶病毒(TYLCV-CHI)外壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达及抗血清的制备

经PCR获得了中国番茄黄化曲叶病毒(TYLCV-CHI)外壳蛋白(CP)基因,并克隆到pGEM-7Zf(+)载体上.序列分析表明,TYLCV-CHI感染番茄或烟草时,CP基因的核苷酸序列发生变化,并且在烟草上随感染时间的延长,突变频率增高.连接到含有编码tRNAarg4基因argU的表达载体pSBET后,TYLCV-CHI CP基因在大肠杆菌中以包含体形式得到大量表达(约33 ku).以表达的蛋白作抗原免疫家兔,制备了抗TYLCV-CHI CP的抗血清.ELISA实验表明,该血清与抗原特异反应,血清效价为1:3000.Western印迹实验还表明,该血清除了与感染TYLCV-CHI的番茄、烟草有特异免疫反应外,还与感染南瓜曲叶病、烟草曲叶病的叶片有免疫反应,表明这些病毒之间有明显的血清学关系.     

转乙肝病毒表面抗原基因烟草发根的获得

构建了乙肝病毒表面抗原基因（HBsAg）植物表达载体,通过冻融法将HBsAg 基因转入到发根农杆菌LBA1314中,采用叶盘法将HBsAg基因导入到烟草中,获得了转基因烟草发根.对转基因烟草发根的GUS检测结果表明：转HBsAg基因烟草发根可以染成蓝色,而非转基因烟草的根没有染色反应.这说明gus基因在转HBsAg基因烟草发根获得了表达.     

甜椒CaHSP22.5基因的克隆及序列分析

为深入研究小分子量热激蛋白对植物胁迫条件下的保护机理,利用RT-PCR结合RACE的方法,克隆甜椒内质网小分子量热激蛋白基因(CaHSP22.5)基因并进行序列分析和转基因烟草分析.获得了包括全长开放读码框(ORF)的CaHSP22.5基因的cDNA序列,与目前已克隆的ERsHSP类基因的同源性分析表明,甜椒CaHSP22.5基因编码的蛋白与马铃薯和番茄的ERsHSP类蛋白的同源性最高.通过叶盘法利用农杆菌介导转化烟草,成功获得了正反义转基因烟草,为进一步研究该基因的功能和作用机制奠定了基础.     

泛素和PR1a信号肽融合基因植物表达载体的构建

泛素（Ubiquitin）融合蛋白策略在近年来已被应用于在植物中提高外源蛋白的产量。信号肽（Signal Peptide）使外源蛋白定向运输到细胞内的特定部位。本研究是在植物高效表达载体pBin438的基础上，采用三引物PCR法（TP-PCR）技术，将拟南芥（Ambidopsis）泛素基因与烟草病程相关蛋白PR1a基因的信号肽序列体外重组；并将重组的融合基因定向克隆到植物表达载体pBLG中，获得了含有泛素和PR1a信号肽序列的植物表达载体pBLG-UP。这为进一步验证外源基因在植物体内的高效表达奠定了基础。     

长叶车前花叶病毒上海株(RMVsh)外壳蛋白基因的克隆、序列分析及原核表达

长叶车前花叶病毒上海分离株（RMVsh)是从上海郊区的青菜（Brassica chinensis)上分离鉴定的，以提纯的病毒为材料，SDS－酚法纯化的基因组RNA作为模板，通过RT－PCR方法克服了该病毒的外壳蛋白基因（CP），DNA序列测定结果表明，外壳蛋白基因全长474个碱基，编码157个氨基酸，将CP基因插入原核表达载体pBAD/His-C中，转化E.coli Top10后，诱导表达，经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析呈－特异性的蛋白条带，Western blot检测表明，表达产物与RMVsh抗血清呈阳性反应，RMVsh CP基因的核苷酸序列及氨基酸序列与烟草花叶病毒属中其他能侵染十字花科作物的成员相比，同源率分别为83．5％－98．9％和87．9％－99．4％，并讨论了RMVsh的分类地位为烟草花叶病毒属侵染十字花科植物2个亚组中的第一亚组的代表。     

用斑点免疫结合法检测转化的烟草植株中的TMV—CP和CMV—CP

1982年,Hawkes 等人仿照分子生物学中点杂交(dot hybridization)的方法发展了斑点免疫结合测试技术(DIBA)用于检测单克隆抗体。本实验就 DIBA 应用在检测转基因烟草。烟草用发根农杆菌 Ri 质粒介导,将烟草花叶病病毒外壳蛋白基因(TMV—CP)和黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因(CMV—CP)导入烟草的叶片外植体中,通过对外植体的培养,得到愈伤组织,从愈伤组织进而获得了再生植株,对再生植株进行检测导入的外壳蛋白基因的表达量。     

日本科学家让植物生产动物蛋白

日本北海道大学和北海道绿色生物研究所等把动物遗传基因植入植物中，使植物产生能干涉肝炎病毒蛋白质的动物蛋白，再把这种蛋白从植物中提取出来。日本首次研究成功这种技术。北海道大学等正在用烟草和马铃薯继续进行上述实验，看哪种植物更适合这项技术。北海道绿色生物...     

工程菌表达马铃薯钙调素(PCM 6)的抗体制备及鉴定

PCM6是马铃薯钙调素亚型中与其他植物钙调素在氨基酸序列上最为保守的一种，利用大肠杆菌表达系统，表达并纯化了这种蛋白，以纯化的重组马铃薯CaM(PCM6）蛋白为抗原，免疫新西兰兔，获得了高效价（1：16000）抗体，免疫印迹检测表明，制备的抗体与植物钙调素有特异性的免疫交叉反应。     

氮杂对环吩CP44与萘衍生物超分子体系研究

用紫外吸收光谱法、荧光光谱法和同步扫描荧光光谱法对主体分子CP44与α－萘酚、β－萘酚、2,6－二羟基萘和6,7－二羟基－2－萘磺酸客体分子形成超分子体系进行了研究,化学计量法表明：主体分子CP44与萘衍生物客体分子形成1：1的超分子体系;CP44与α－萘酚的包括配位反应是热焓驱动的包括配位反应,CP44与β－萘酚,2,6－二羟基萘或6,7－二羟基－2－萘磺酸是熵驱动包括配位反应,荧光探针表明：主体CP44能对α－萘酚、β－萘酚同分异构体进行分子识别。     

CP自由基与C6H6反应机理的理论研究

在B3LYP/6-311++G(d,p)水平下研究了CP自由基与C6H6反应体系的产物分布和反应机理.得到了详细标注反应物、产物、中间体和过渡态的势能面示意图.计算结果表明CP+C6H6体系的主要产物是C6H5CP+H,次要产物是HCP+C6H5.与深入研究的CN+C6H6反应体系相比,CP和CN反应体系的机理完全相似.本理论计算可以为将来实验室分离和研究一些含有不饱和CP基团的物种提供非常有价值的信息.     

B介子三体衰变过程相空间中局域CP破缺的理论解释

研究了一种能使底介子三体衰变产生很大的局域CP破缺的机制.该机制通过不同自旋中间共振态振幅之间的干涉效应使底介子三体衰变相空间的局部区域产生很大的CP破缺.将此机制用于B^±→K^±π^＋π^-可以用于解释实验上观测到的CP破缺.     

粗蛋白、钙、磷的快速测定

为探索、规范并确证粗蛋白、钙、磷指标含量的快速测定方法,选用了15种典型猪鸡配合料和原料,分别测定了上述三项指标的含量,并与国标法测得结果进行了统计比较,t—检验差异不显著(P>0.05),说明快速法有国标法近似的准确性和稳定性,可以在一般实验室常规分析和大规模饲料质量普查中参考应用.     

B介子系统CP破坏研究

本文对B介子系统进行了全面系统的研究,计算了Bd与Bs到各种可能双重子未态衰变过程中的cp破坏效应。我们的结论是:Bs系统中存在大的混合效应,但cp破坏的不对称号参数较小,实验上难以探测到。Bd系统中,B_d~o(■_d~o)→P过程是观测cp破坏的最有希望的反应道,观察到cp破坏需b对数甘为10~8。     

The excitation energy transfer between β-Car and Chla molecules in PS Ⅱ core antenna complexes CP43 and CP47

The excitation energy transfer efficiency between β-Car and Chla molecules in purified CP43 and CP47 was calculated by comparing absorption and fluorescence excitation after normalization at 550 nm, CP43 had an energy transfer efficiency of 29.1% while the CP47 had an energy transfer efficiency of 62.8%, proving that excitation energy was transferred between β-Car and Chla molecules in CP43 and CP47 at normal conditions. The excitation energy transfer between β-Car and Chla molecules in CP43 and CP47 may occur through the “Dexter” mechanism and the distance between these two kinds of pigments should be less than 1 nm. In addition, the results were also used to discuss the conformational relationship between β-Car and Chla molecules in CP43 and CP47.     

CP破坏的物理根源

本文介绍了几个重要的CP破坏模型,讨论了它们的成功之处和所存在的问题,结合CP破坏研究的现状,提出几点展望。     

Sensitive detection of pathological prion protein by cyclic amplification of protein misfolding.

Prions are the infectious agents responsible for transmissible spongiform encephalopathies. The principal component of prions is the glycoprotein PrP(Sc), which is a conformationally modified isoform of a normal cell-surface protein called PrP(C) (ref. 1). During the time between infection and the appearance of the clinical symptoms, minute amounts of PrP(Sc) replicate by conversion of host PrP(C), generating large amounts of PrP(Sc) aggregates in the brains of diseased individuals. We aimed to reproduce this event in vitro. Here we report a procedure involving cyclic amplification of protein misfolding that allows a rapid conversion of large excess PrP(C) into a protease-resistant, PrP(Sc)-like form in the presence of minute quantities of PrP(Sc) template. In this procedure, conceptually analogous to polymerase chain reaction cycling, aggregates formed when PrP(Sc) is incubated with PrP(C) are disrupted by sonication to generate multiple smaller units for the continued formation of new PrP(Sc). After cyclic amplification more than 97% of the protease-resistant PrP present in the sample corresponds to newly converted protein. The method could be applied to diagnose the presence of currently undetectable prion infectious agent in tissues and biological fluids, and may provide a unique opportunity to determine whether PrP(Sc) replication results in the generation of infectivity in vitro.     

碳化硼颗粒表面化学镀镍

对非金属B4CP表面化学镀镍前的活化工艺进行了研究,提出了NaCl活化工艺,在B4CP表面制备了镀镍层.镀层能谱分析及扫描电镜图片表明:在B4CP表面上得到了均匀、致密的镍包覆层,镀覆层含镍和磷元素.     

高速铁路无砟轨道CPⅢ控制网测量技术探讨

从CPⅢ控制网建网条件、CPⅢ控制网测量仪器要求、控制点埋设要求、控制网的网型要求、测量方法等方面,介绍了高速铁路无砟轨道CPⅢ控制网测量技术的特点、技术要求、测量方法及工艺流程.