肝片吸虫保护性抗原基因在卡介苗中的表达

用ECoR　I酶切合肝片吸虫保护性抗原基因FH3的重组质粒pUC18／FH3，回收FH3(约1．0kb)片段并测定其碱基序列．FH3片段以正确相位插入到E．coli—分枝杆菌穿梭表达质粒载体pMV261中，构建含有肝片吸虫保护性抗原基因的重组穿梭质粒．通过电转移法转化卡介苗，斑点杂交实验汪明，重组卡介苗中含有此抗原基因．热诱导FH3基因在卡介苗中的表达，并对基图表达产物进行别SDS—PAGE分析．结果显示，表达产物相对分子量为22kD．     

肝片吸虫抗原基因转基因苜蓿再生的研究

用直接转化法，将构建有肝片吸虫保护性抗原基因FH3的植物表达载体pBI121-FH3,导入感受态的根瘤农杆菌EHA105；以重组的根瘤农杆菌为介导，用叶盘法转化苜蓿外植体，筛选得到抗Kan转化外植体；抗性外植体通过诱导丛生芽和诱导生根，再生出完整植株，提出植株总DNA进行Southern blot，结果表明，FH3基因已经整合入苜蓿基因组中。     

肝片吸虫和巨片吸虫染色体和同工酶的研究

本文研究了来自国内数省份的片形吸虫的染色体和同工酶,发现肝片吸虫的染色体为三倍体型,巨片吸虫的染色体为二倍体型。根据二者核型相近、酯酶同工酶一致以及生活史各期虫体形态相似,作者认为肝片吸虫是巨片吸虫的同源三倍体的种类。     

日本血吸虫体壁抗原基因的筛选与克隆

为筛选并克隆新的日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)候选抗原基因,以日本血吸虫成虫总DNA为模板,通过生物信息学以及分子生物学手段从日本血吸虫全基因组中筛选目的基因.根据所筛选到的目的基因的核酸序列设计合成引物,用PCR法扩增目的基因,将其克隆入pBS-T载体后转入到大肠杆菌DH5a菌株,筛选阳性克隆.通过对阳性菌落质粒进行PcR予以证实.最终成功筛选并克隆到日本血吸虫体壁候选抗原基因.     

山羊血浆环核苷酸在感染肝片吸虫前后的变化

用放射免疫方法测定山羊血浆ｃＡＭＰ,ｃＧＭＰ和ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ正常水平值以及感染肝片吸虫后的动态变化。结果表明：山羊血浆ｃＡＭＰ,ｃＧＭＰ和ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ的正常值分别为（０．８０±０．０３）,（０．８３±０．０３） ｐｍ ｏｌ·ｍ Ｌ－ １,（０．６９±０．０４）,感染１ 组和２ 组山羊在感染后第１～６ 周,血液中ｃＡＭＰ水平显著低于或低于对照组,以后两组水平相当。感染１ 组的ｃＧＭＰ水平在感染后５～９ 周期间低于对照组,而感染２ 组山羊的ｃＧＭＰ水平在感染后１～４ 周高于对照组。感染１ 组和２ 组山羊的ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ比值分别在感染后１～４ 周和１～６ 周呈现低于对照组的趋势,但差异不明显。因而,肝片吸虫感染可导致宿主的ｃＡＭＰ,ｃＧＭＰ和ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ紊乱。     

肝片形吸虫成虫及虫卵的扫描电镜观察

本文应用扫描电镜系统观察了肝片形吸虫的体表结构和虫卵.1.在口腔内壁上密市有细绒毛,其间还有很多小孔.2.肝片形吸虫的体棘在头锥部份排列整齐而有规则,共有60圈,每圈60～70个.在腹吸盘以后的体棘则规律不明显.3.本文将观察到的不同形态的体棘,按其发育过程分为初生期,早期,中期及后期体棘四类,它们的末端都呈锯齿状.体棘窝较浅.因此体棘较易脱落.4.在张开的生殖腔中,同时观察到了雌雄生殖系统的2个开口,并对伸出体外的阴茎进行了描述.5.肝片形吸虫卵的表面光滑,但在其外膜脱落后则有散在性的小凹陷;卵盖与卵壳连接处虽不很整齐,但并不呈锯齿状.约60%的虫卵后端也具有小结节.     

牦牛肝片吸虫四种抗原交叉免疫印迹分析

用牦牛肝片吸虫四种抗原分别制备四种抗血清，其ＥＳＩＳＡ效价 １：８００，１：１６００，１：３２００和１：８００．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳区带组分分别为２５，２４，１８和９条带；免疫印迹结果，各种抗清与相庆抗原作用的主要抗原成份分别为５，１０，７和３；四种抗原中存在的共同抗原为１７．２ｋＤ；特征抗原ＨＡ为２９．９ｋＤ，ＳＡ为２７．２ｋＤ的２４．３ｋＤ；正常兔血清与各个抗原间均未出现免疫反应。     

肝片形吸虫种类鉴定PCR方法的建立

为了建立一种快速鉴定肝片吸虫种类的特异PCR方法,以肝片形吸虫基因组DNA为模板,以前后盘吸虫,胰阔盘吸虫,日本分体吸虫,牛弓首蛔虫、大片吸虫gDNA为对照,用肝片形吸虫特异性引物ITS-1、ITS-2进行PCR扩增,PCR产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳,紫外透射仪观察;用核酸蛋白测定仪测定肝片形吸虫gDNA的浓度,然后将gDNA原液进行不同倍数的稀释,筛选最佳条件,进行敏感性检测.结果显示只有肝片吸虫样品有特异性条带,对照样品均呈阴性;可以检测到的最低DNA浓度分别为1.17 ng/μL、0.59 ng/μL.     

肝片形吸虫精子发生的染色体动态研究

采用常规细胞染色空气干燥标本制片技术制片及直接涂片,观察100个虫体的200张滴片,20个虫体的40张涂片,发现肝片形吸虫精子发生的染色体动态是:1.精原细胞,分为A型和B型。A型胞核内染色质细粒状,着色较深。B型胞核内染色质颗粒多沿核膜分布,着色较浅。在精原细胞增殖的有丝分裂中,其染色体中期相2n=20。2.初级精母细胞,核内染色质呈颗粒团,随后细胞进入第一次成熟分裂(减数分裂),其过程分为前期、中期、后期和末期,各期细胞染色体形状、大小相异。3.次级精母细胞,核内有大小不等的染色质颗粒团或染色痕迹。4.精细胞,染色体为单倍体(n=10)胞核由圆形迎渐为椭圆形、钉子形、V形、S形、弯梭形,最后由弯梭形的细胞分化产生精于。5.精子,头颈部螺旋状锥形,尾细长。     

肝片吸虫DNA疫苗的构建及其免疫效应的初步研究

用ＥcorRI酶切含肝片吸虫保护性抗原基因ＦＨ３的重组质粒pUC18/FH3,回收ＦＨ３（－１．０Ｋb)片段克隆到真核表达载体pBlueCMV上,酶切筛选顺向插入重组子pBlueCMV-FH3,即得到一种肝片吸虫ＤＮＡ疫苗,制备纯化该疫苗并免疫小鼠,小鼠肌肉细胞中有一定的ＦＨ３抗原表达;用ＥＬＩＳＡ检测抗血清表明,注射疫苗的小鼠均伴随产生一定量的特异性抗体,用肝片吸早囊蚴攻击（２０囊蚴／鼠）小鼠,初步显示有一定的减虫率。     

人体肝片吸虫感染两例报告

本文报告一家二例人体肝片吸虫感染的临床表现及治疗,此种疾病在我国罕见,在临床诊断和治疗的报告尚属首例。本文并对本病的流行、临床表现及治疗作了简短的文献复习。     

rcan1-1l基因的克隆和表达

从小鼠脑组织中通过总mRNA的提取、RT-PCR方法,利用pEASY-T1载体克隆出了鼠源rcan1-1l基因,并构建出了重组有rcan1-1l基因的PET21a原核表达质粒,进行了表达条件的初步摸索,这为今后研究rcan1-1l基因以及蛋白的结构与功能打下了前期实验基础.     

小麦叶绿体psbA基因的克隆及表达

用ＰＣＲ直接从小麦叶绿体基因组扩增到完整的ｐｓｂＡ基因，并构建了ｐｓｂＡ基因的克隆ｐＴＤ１Ⅱ。为研究ｐｓｂＡ基因在Ｅ·ｃｏｌｉ中的表达，将完整的ｐｓｂＡ基因正向插入高表达载体ｐＫＫ２２３－３中构建表达克隆ｐＫＴＤ１。含有重组表达质粒的转化细胞经ＩＰＴＧ诱导后提取总蛋白，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，小麦叶绿体ｐｓｂＡ基因能在Ｅ·ｃｏｌｉ中表达３２ｋＤ的Ｄ１蛋白，表达的Ｄ１蛋白占细菌总蛋白的３％以上。     

Bti cryIVB基因的克隆及表达质粒的构建

采用ＰＣＲ方法,克隆得到３．５ｋｂ的开放阅读框架（ＯＲＦ）,其包括Ｂｔｉ的杀虫蛋白基因,ｃｒｙＩＶＢ结构基因各部分上游启动区。将结构基因亚克隆到高表达载体ｐＱＥ５２中,构建了高表达质粒ｐＱＥ５２Ｂ。在Ｅ．ｃｏｌｉ ＳＧ１３００９（ｐＲＥＰ）中,１３０ｋＤ的蛋白得到表达,其对韭菜迟眼蕈蚊（Ｂｒａｄｙｓｉａ ｏｄｏｒｉｐｈａｇａ）三龄幼虫具有较强的毒杀作用。     

青岛文昌鱼hedgehog及两个hedgehog-like片段的克隆

采用RT-PCR方法获得了青岛文昌鱼2497bp长的hedgehog基因片段,其所编码的氨基酸序列与多种生物hh基因家族成员的相应片段显示了较高的同源性.同时获得2个含有部分hedgehog基因片段的序列hedgehog-like-1和hedgehog-like-2,提示文昌鱼中发生hedgehog基因倍增过程和有多拷贝hh基因存在的可能性.为研究hh基因的分子进化提供了线索.     

大鼠20αHSD基因调控序列的克隆与检测

酶切包含20αHSD基因及其调控序列的X噬菌体13NA,获得4．0kb的DNA大片段,将此片段与载体质粒连接得到重组质粒,酶切重组质粒后电泳,再以地高辛标记的20αHSD基因的cDNA为探针进行Southern杂交,实验获得了大片段的重组质粒。     

水稻Sh2基因的分子克隆

实验通过构建以兰姆达噬菌体为载体的水稻基因组文库，用玉米的Ｓｈ２ｃＤＮＡ克隆作为探针，分离出水稻的Ｓｈ２ＤＮＡ克隆。经用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ氏印迹杂交分析，初步证明两个克隆是真实的水稻Ｓｈ２基因的克隆，命名为Ｓｈ２－６４和Ｓｈ２－１０１。