红芪组织培养中次生代谢产物的研究：Ⅲ.黄芪甲甙和游离？…

利用ＨＰＬＣ和高速氨基酸分析仪测定红芪各种愈伤组织中黄芪甲甙和游离氨基酸的含量。结果表明，黄氏甲甙含量以分化愈伤组织为最高，是未分化愈伤组织的１２．５倍。而游离氨基酸含量化愈伤组织与未分化愈伤相比较表明：脯氨酸、胱氨酸、精氨酸和谷氨酸都有一定程度的降低，其中尤以脯氨酸，胱氨酸的降低幅度较大。     

红芪组织培养中次生代谢产物的研究 Ⅲ.黄芪甲甙和游离氨基酸在红芪愈伤组织中含量变化的相关性

利用ＨＰＬＣ和高速氨基酸分析仪测定红芪各种愈伤组织中黄芪甲甙和游离氨基酸的含量．结果表明,黄芪甲甙含量以分化愈伤组织为最高,是未分化愈伤组织的１２ ．５ 倍,而游离氨基酸含量分化愈伤组织与未分化愈伤组织相比较表明：脯氨酸、胱氨酸、精氨酸和谷氨酸都有一定程度的降低,其中尤以脯氨酸、胱氨酸的降低幅度较大．由此推测这４ 种氨基酸可能是次生代谢产生黄芪的前体物质．     

蒙古黄芪的组织培养研究

对蒙古黄芪无菌苗的不同外植体(叶片、子叶、下胚轴)进行组织培养研究.结果表明:该三种外植体分别在MS BA2.0mg/L NAA2.0mg/L、LS BA2.0mg/L NAA0.1mg/L、MS BA2.0mg/L NAA2.0mg/L 培养基上的愈伤组织诱导率很高;在这三种外植体中,子叶和下胚轴所诱导的愈伤组织在继代培养基上能分化出芽;试管苗在1/2MS NAA5.0mg/L培养基上生根效果好.     

黄芪愈伤组织的培养及其蛋白质含量的测定

使用不同激素浓度组合的MS培养基对黄芪无菌苗的子叶进行愈伤组织的诱导,并对愈伤组织的可溶性和非可溶性蛋白含量进行测定。结果表明：该外植体在MS＋6-BA0．5mg／l＋NAA1．0mg／l培养基上的愈伤组织诱导率很高。两种蛋白质在前三十天的生长阶段都不断积累,之后开始下降。其中可溶性蛋白质含量在后期有所回升,而非可溶性蛋白质含量下降趋势则更加明显。     

高压静电场对蒙古黄芪愈伤组织增殖和分化的影响

蒙古黄芪愈伤组织经场强为±1.0 kV/cm的高压静电场处理后生长速率明显提高,超氧化物酶(SOD)活性,过氧化氢酶(CAT) 活性和蛋白含量明显高于对照,过氧化物酶(POD)、吲哚乙酸(IAA)氧化酶活性和丙二醛(MDA)含量明显降低.正负高压静电场处理的结果存在着明显差异,正高压静电场能够有效地促进蒙古黄芪愈伤组织芽的分化,而负高压静电场能够有效地促进根的分化.     

蒙古黄芪愈伤组织诱导及褐化抑制

分别以蒙古黄芪(Astragalus mongholicus Bunge)的子叶、下胚轴和胚根为外植体,在附加不同浓度的生长素NAA和细胞分裂素6-BA组合的MS培养基上进行愈伤组织初代培养,并对其继代培养中出现的褐化现象进行了抑制.实验结果表明,下胚轴为最佳外植体,在各个激素组合中的诱导率均达到最高,其中在添加了0.5 mg*L-1 6-BA和0.15 mg*L-1 NAA的培养基中诱导率可达到100%.在继代培养中,向培养基中添加0.1 mg*L-1 VC时,能有效降低愈伤组织的褐化.     

植物生长调节物质对华黄芪愈伤组织诱导、增殖及芽分化的效应

以华黄芪叶片为外植体,在附加不同浓度和比例的２,４－Ｄ与６－ＢＡ的ＭＳ培养基上,探讨植物生长调节物质对华黄芪愈伤组织诱导、增殖及芽分化的效应,并在愈伤组织增殖过程中,初步对愈伤指数与愈伤组织生长量的关系进行了比较,结果表明：在ＭＳ＋２,４－Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ０．３ｍｇ／Ｌ培养基上诱导率最高,且形成愈伤组织时间最短;在ＭＳ＋２,４－Ｄ０ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ０．３ｍｇ／Ｌ培养基上,芽的分化率最高;愈伤指数与“称重法”测定愈伤组织生长所得结果一致．     

茉莉酸甲酯,蔗糖和氮源对蒙古黄芪愈伤组织生长和黄酮含量的影响

采用单因素和正交试验研究了氮源、蔗糖浓度和诱导子茉莉酸甲酯对蒙古黄芪愈伤组织生长和黄酮类物质积累的影响.结果表明:各因子影响黄酮积累量依次为:茉莉酸甲酯＞蔗糖＞水解酪蛋白＞氮源;蒙古黄芪愈伤组织生长和黄酮含量积累的最佳培养基组合为:MS+NAA 1.0 mg/L+ 6-BA 2.0 mg/L+2,4-D1.0 mg/L+蔗糖50.0 g/L+水解酪蛋白1.0g/L+ MeJA0.02 μmol/L,NH4+∶ NO3-为1∶1.在这种条件下,黄酮产量达到最高为9.78mg/L.     

甘草根愈伤组织诱导与可溶性蛋白含量变化

利用胀果甘草无菌苗根作为外植体诱导愈伤组织,经过多次继代培养筛选出4种类型的愈伤组织,并以不同质量浓度的NaCl胁迫处理Ⅰ型愈伤组织.测定了在根愈伤组织诱导过程中,不同类型愈伤组织继代培养中和Ⅰ型愈伤组织在NaCl胁迫处理条件下的生长情况及可溶性蛋白含量的变化情况.结果显示,以苗龄10d的无菌苗根为外植体可以诱导产生愈伤组织,以MS培养基附加1.0mg/L 2,4-D和0.2mg/L6-BA时,根愈伤组织的诱导率最高,继代培养生长状况良好为Ⅰ型愈伤组织;根外植体两端开始形成愈伤组织时可溶性蛋白含量最高,为2.01mg/g;不同培养基上继代培养的根愈伤组织生长状态不同,可溶性蛋白含量也有不同,以Ⅰ型愈伤组织中可溶性蛋白含量最高;Ⅰ型愈伤组织在5g/L NaCl胁迫下,继代培养21d后,愈伤组织生长量明显提升,在14~21d愈伤组织可溶性蛋白含量明显提高.本研究表明甘草愈伤组织对低质量浓度的盐胁迫有一定的适应性,使其可溶性蛋白含量升高,在可溶性蛋白含量剧烈变化期间,愈伤组织生长量明显提高.     

北柴胡愈伤组织及不定根诱导研究

以从田间采集的北柴胡和用当年产种子所得的实生苗为实验材料,比较了外植体种类、大小和采样时期等因素对愈伤组织诱导的作用;以从大田栽培北柴胡的带侧芽茎段及根愈伤组织为材料,研究了不同培养基和激素对不定根诱导的影响.结果表明,诱导愈伤组织的适宜起始材料是幼嫩根段;长度1.0 cm左右的根外植体有利于愈伤组织的诱导和生长;4月上旬采样有利于愈伤组织的诱导和生长;在添加IBA 0.5 mg/L的1/2MS培养基中,带侧芽茎段不定根的诱导率可达97.3％,生根效果也最好;在B5培养基中加入二苯基脲双磺酸钙1.0mg/L后,不定根诱导率达到94.2％,根粗壮且生长快.     

正交试验法提取黄芪甲甙的工艺研究

目的 研究芪归花宁心冲剂的最佳提取工艺。方法 以黄芪甲甙质量分数为指标,采用正交试验法考查提取溶媒、溶媒浓度、剂量、提取时间等因素对黄芪甲甙提取效率的影响。结果 黄芪的最佳提取工艺条件为：用60％乙醇提取3次,每次提取液为中药生药的5,4,3倍,每次提取时间为2,1．5,1．5h最好。结论 用正交试验法能检测出黄芪的最佳提取工艺条件。     

高效液相色谱法测定蒙古黄芪中黄芪甲苷含量

确立了蒙古黄芪中黄芪甲苷含量的高效液相色谱测定方法(HPLC),色谱柱:C18(150×4.6mm,5μm)流动相为乙腈:水:磷酸=1:2:0.1,流速为1.20mL/min,检测器:紫外检测波长200nm,结果表明此方法测定蒙古黄芪中黄芪甲苷含量是可行的     

植物生长调节剂对黄芪愈伤组织中次生代谢物质含量的影响

以膜荚黄芪幼叶为外植体,运用正交设计研究2,4-D、6-BA和NAA等3种植物生长调节剂组合对愈伤组织生产黄芪黄酮和黄芪皂苷的影响．结果表明对黄芪黄酮合成的影响顺序是：NAA〉6-BA〉2,4-D;对黄芪皂苷合成的影响顺序是：2,4-D〉6-BA〉NAA．生产黄芪黄酮和黄芪皂苷的最佳培养基分别为;MS＋2,4-D（0．5mg·L^-1）＋6-BA（1．0mg·L^-1）＋NAA（2．0mg·L^-1和MS＋2,4-D（2．0mg·L^-1）＋6-BA（2．0mg·L^-1）＋NAA（1．0mg·L^-1）．细胞伸长有利于愈伤组织中次生代谢物质的合成．     

黄瓜组织培养与蛋白含量及抗氧化酶活性的变化

通过对黄瓜子叶组织培养,研究了黄瓜子叶外植体龄对愈伤组织诱导的影响及体内可溶性蛋白含量,CAT,POD,SOD几个生理指标的变化及其与愈伤组织诱导的关系.结果表明:接种在MS(MS+6-BA(1 mg/L)+AgNO3(2 mg/L))培养的3～5 d子叶外植体的愈伤组织诱导能力最强.子叶的抗氧化酶活性及蛋白含量与诱导愈伤组织能力之间存在明显相关性,CAT和SOD与愈伤组织诱导呈负相关,POD和蛋白含量与愈伤组织诱导呈正相关.     

南方红豆杉愈伤组织诱导研究

文章研究了从南方红豆杉的幼叶及幼茎,在MS、B5、N6及SH4种培养基上的诱导愈伤组织的情况,并对愈伤组织的诱导条件进行优化,结果表明以幼叶及幼茎作为外植体在MS培养基上产生愈伤组织的速度较快,7d即有愈伤组织发生,但愈伤组织也容易褐化;而B5和N6培养基愈伤组织机构紧密,褐化少。不同部位外植体诱导愈伤组织有差异,茎、叶容易诱导愈伤组织,根的诱导率差。外植体大小对于愈伤组织影响显著,带有部分叶的茎段不能够形成愈伤组织,带有根的茎段则可以诱导愈伤组织。     

西红花愈伤组织的诱导与花柱愈伤组织的继代、悬浮培养

以西红花的球茎,叶片和花柱为外植体诱导愈伤组织,叶片诱导培养形成白色膨大组织,球茎培养得到松散型白色愈伤组织,诱导球茎愈伤的培养基为5mg/L 6-BA 8mg/L NAA,在球茎愈伤组织中的紫外部分没有检测到西红花甙,西红花醛和西红花苦甙,在花柱愈伤组织中检测到西红花醛,适合于继代和悬浮培养,经悬浮培养后,在培养液中可检测到西红花醛和西红花苦甙,悬浮培养有利于次和一代谢的积。     

细叶黄芪(Astragalus tenuis)单细胞培养高频率再生植株

本研究建立了一套适合于细叶黄芪单细胞悬浮培养的良好系统.在该培养系统中,细叶黄芪单细胞高频率地再生了完整植株.由细叶黄芪种子无菌苗茎段诱导产生的愈伤组织建立了细胞悬浮系.从悬浮系分离的单细胞悬浮培养2～3天开始分裂,35天形成大量的小愈伤组织.小愈伤组织继续悬浮培养即可不断地分化出大量幼芽.愈伤组织在固体分化培养基上的分化率为100％.目前已获得了大量的再生植株.本文还就2,4—D对细叶黄芪和细胞培养的影响进行了讨论.     

HPLC测定经不同益生菌发酵前后黄芪中黄芪甲苷和黄芪皂苷Ⅱ的含量

采用HPLC-ELSD法测定黄芪经不同益生菌株发酵前后的黄芪甲苷和黄芪皂苷Ⅱ的含量变化。色谱柱为Agilent C₁₈柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,采用乙腈-水为流动相,梯度洗脱,流速为：1 mL/min。结果表明,黄芪对照中黄芪甲苷和皂苷Ⅱ的含量分别为0.476 2 mg/g和0.050 3 mg/g。用混合菌种发酵后黄芪甲苷和皂苷Ⅱ的含量分别为0.257 8 mg/g和0.109 4 mg/g。黄芪经益生菌发酵后黄芪甲苷含量降低而皂苷Ⅱ的含量升高,且不同菌种发酵后的黄芪甲苷和皂苷Ⅱ的含量也有差异。     

大花萱草不同外植体初代培养的比较研究

选用大花萱草新品种"baltimore oriole”的叶片、根段、茎尖、花茎、花托、花瓣和子房7种外植体,对愈伤组织的诱导进行研究.结果表明:茎尖外植体诱导从生芽效果最好,不受时间限制,但是污染率很高,且损坏花苗;花茎、花托、花瓣和子房取材受时间限制,花茎的愈伤组织诱导率较高,花托、子房愈伤组织诱导率较低,花瓣难以诱导出愈伤组织;叶片和根段取材方便但是难以诱导出愈伤组织.从茎尖和花茎诱导出的丛生芽及愈伤组织,转入继代培养基后获得了新生芽,而花托和子房诱导的愈伤组织干枯死亡.因此,大花萱草较适宜的外植体材料为茎尖和花茎.     

黄芪甲甙对大鼠阿霉素心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨黄芪甲甙对大鼠阿霉素心肌病心肌细胞凋亡及其端粒酶活性表达的影响.方法 雄性SD大鼠,体重250 g左右.建立阿霉素心肌病模型,随机分为黄芪甲甙干预组、模型组（阿霉素组）、正常对照组、正常大鼠黄芪甲甙对照组.用原位末端标记法（TUNEL）标记凋亡的心肌细胞,用TRAP-PCR-ELISA 法检测端粒酶活性.结果 阿霉素组凋亡指数明显高于对照组（P<0.05）,黄芪甲甙干预组凋亡指数明显低于阿霉素组（P<0.05）,但仍高于对照组（P<0.05）;黄芪甲甙干预组与阿霉素组比较,端粒酶活性明显升高(P<0.05),但仍低于对照组(P<0.05).结论 心肌细胞凋亡是阿霉素心肌病的重要机制,黄芪甲甙干预治疗可减少阿霉素心肌病的心肌细胞凋亡,可能与黄芪甲甙能提高端粒酶活性有关.