2013 ～ 2015 年实验动物质量检测机构实验室能力验证结果分析

摘要: 目的通过整理2013 ～ 2015 年实验动物质量检测机构能力验证活动的结果,发现实验室存在的问题,促进实验室检测水平的提升。方法按照ISO/IEC17043 实施能力验证,统计定性实验的结果,对实验室的能力进行评价。结果全国各实验室累计174 次参加了2013 ～ 2015 年的9 个能力验证项目,提交了171 个结果,其中满意结果为151 个,整体满意率为88. 3%。9 个项目的满意率分别为94. 1%、80. 0%、88. 9%、85. 0%、78. 6%、90. 0%、100. 0%、93. 3%和80. 0%。结论通过参加2013 ～ 2015 年的能力验证活动,实验室提升了实验动物质量检测能力,加强了实验动物质量评价体系的建设。     

屏障环境设施指标动态变化的研究

摘要: 目的探讨屏障设施动态运行状况。方法对第三军医大学实验动物中心等单位的屏障设施内环境,按照国家《实验动物环境与设施GB 14925 － 2010》标准,对温湿度、噪声、照度、空气洁净度、最小静压差、空气菌落数、氨浓度等指标进行了静态和不同时段的动态检测。结果有些指标静态和动态情况下无显著变化,有些指标如空气洁净度、空气菌落数等变化较大。结论通过动物设施的环境检测,掌握了影响其变化的因素,可通过加强管理来保障动物环境设施的有效运行。     

表面等离子谐振传感器检测磺胺二甲嘧啶残留

为了建立利用表面等离子谐振光学生物传感器和金膜芯片表面固定抗原定量检测磺胺二甲嘧啶的检测方法,用缓冲液将磺胺二甲嘧啶标准样品配制为浓度分别为0、5.0、7.0、10.0、16.5 ng/mL的溶液,与工作浓度的抗体混合,测量了传感信号的强度值,绘制得到抑制标准曲线。在无抗牛奶中添加磺胺二甲嘧啶标准样品,使终浓度分别为0、5、10、20、30、40 ng/mL,利用免疫竞争抑制检测方法构建标准曲线,并对磺胺二甲嘧啶浓度为20 ng/mL的牛奶样品进行检测,5次检测的相对标准偏差为6.3%,检测回收率为102.8%,7d内检测的偏差小于6 IU,表明该传感器在磺胺二甲嘧啶残留检测中具有较高的精确度和较好的稳定性。     

检测和校准实验室能力认可准则在实验动物检测领域应用说明的详解

摘要: 实验动物检测是中国合格评定国家认可委员会( CNAS) 对实验室的认可领域之一。在该领域,实验动物作为检测对象和实验对象,广泛应用于食品、医药、卫生防疫、生物安全、动物检疫、农业、化工、环境保护等学科。为了进一步规范该领域实验室认可活动的一致性、有效性,CNAS 特制定了检测和校准实验室能力认可准则在实验动物检测领域应用说明( CNAS-CL58) 。本文对该应用说明的相关要求进行了重点解读,包括组织、服务和供应品的采购、记录的控制、管理评审的管理要素和人员、设施和环境条件、方法、检测和校准物品( 样品) 的处置、检测和校准结果质量保证的技术要素。     

藻细胞浓度的虚拟采样检测方法

为实现快速准确定量水体的藻细胞浓度,提出一种藻细胞浓度的虚拟采样检测方法。该方法首先采用聚苯乙烯标准颗粒溶液标定配置有CCD(Charge Coupled Device)相机的倒置显微镜的虚拟采样容积,然后使用该倒置显微镜对藻细胞溶液进行成像,最后采用数字图像处理技术处理图像并得到藻细胞浓度结果。结果表明,同一藻细胞溶液进行连续2倍率稀释后获取6个样品,对样品的检测结果做一阶线性回归分析,一次项系数为1.030,相关系数为0.999 2。这表明虚拟采样容积在不同浓度的藻细胞溶液中数值稳定,藻细胞浓度的虚拟采样检测方法正确。     

多种沙门氏菌分离培养基效果比较及在实验动物和垫料检测中的应用

摘要: 目的改进实验动物沙门氏菌分离培养方法,建立垫料中沙门氏菌检测方法。方法参考国内外沙门氏菌检测方法,用不同分离培养基对沙门氏菌、大肠杆菌和变形杆菌进行培养。选用最佳筛选效果培养基对动物肠道和垫料样品进行检测。结果BPW 预增菌、MKTTn 选择性增菌转种XLT4 培养基分离沙门氏菌的效果优于其他培养基,在1015 份动物样品中检测出3 份沙门氏菌阳性,能够检测出垫料中1CFU/g 的沙门氏菌。结论改进的沙门氏菌分离培养方法检出率高于现有国标方法,结果准确,可用于实验动物沙门氏菌及垫料的检测。     

小鼠微小病毒( MVM) 荧光定量PCR 检测方法的建立及初步应用

摘要: 目的建立小鼠微小病毒( MVM) 荧光定量PCR 方法,并初步应用于实验小鼠中。方法根据NCBI 上发表的MVM( NC_001510) 基因组序列,设计引物和探针,建立MVM 荧光定量PCR 方法。考察引物探针的最佳线形范围,特异性及灵敏度,并使用该方法对178 份清洁级小鼠粪便DNA 样本进行检测。结果MVM 荧光定量PCR 方法最佳线性范围为109 ～ 104 拷贝/μL,标准曲线的线性关系良好,R2 值可达0. 99,灵敏度为101 拷贝/μL,特异性强,与大鼠细小病毒H-1 株和KRV 株、猪细小病毒均无交叉反应。应用荧光定量PCR 方法对178 份小鼠粪便DNA进行检测,结果均为阴性。结论建立的MVM 荧光定量PCR 方法具有特异、灵敏的特点,为MVM 的流行病学调查、检测提供了有效的技术支持。     

酚试剂分光光度法测定甲醛含量的不确定度分析

在酚试剂法中将采集后的甲醛样品溶液转入具塞比色管的步骤简化为吸取甲醛样品溶液至具塞比色管中,并定容至5m l刻度线处,然后再测定样品的吸光度,分析样品溶液的吸光度、稀释倍数、取样量、标准曲线对样品溶液中甲醛含量不确定度的贡献。结果表明,标准曲线(即回归方程)引入的不确定度对检测结果影响最大。     

火焰原子吸收测定柿饼中锌的不确定度分析

目的分析火焰原子吸收测定柿饼中锌的不确定度。方法用原子吸收仪测定柿饼样品中的锌含量,根据公式模型从样品称量、标准储备液配制、定容、重复测量和标准曲线回归方程等方面进行不确定度分析。结果当样品中锌的含量为23.96时,火焰原子吸收测定柿饼中锌的不确定度2.01mg/kg,在全部主要测试过程中的不确定度为2.01mg/kg。结论通过检测模型的建立,样品中锌浓度测定的不确定度包括样品重复测定、标准溶液配置、标准曲线制作、天平称量和样品定容体积等;分析以上影响因素,对火焰原子吸的测定柿饼中锌的不确定度可以进行较为科学的评定。     

实验动物能力验证计划肽酶-3检测

目的 通过组织实施能力验证计划，评价实验室的实验动物质量检测能力，提高实验室质量控制水平。方法依据CNAS-CL03能力验证提供者认可准则组织实施能力验证计划，样品通过均匀性和稳定性检验。参加单位在规定时限内提交检测结果和相关原始记录，将实验室结果与标准结果进行对比分析。结果 共有8家实验室参加本次能力验证计划，其中6家实验室提交了满意结果，本次能力验证计划的满意率为75%。结论 实验动物质量控制实验室肽酶-3的整体检测水平较高，少数实验室存在可提升空间。     

野生东方田鼠的实验动物化及标准的建立

摘要: 东方田鼠是重要的实验动物资源之一,本文总结了本实验室过去十几年来对东方田鼠进行的实验动物化工作,包括生物学性状、建群者与群体的有效大小、驯养、驯化( 实验动物化) 及进化动力等方面的研究以及实验动物化结果的评估和地方标准的制定。展望了以新一代基因组测序技术为基础进行的抗性基因的寻找与新品系的精细培育新方法的摸索。     

小肠结肠炎耶尔森氏菌、假结核耶尔森氏菌、志贺氏菌和空肠弯曲菌多重PCＲ 方法的建立

摘要: 目的为实验动物微生物检测提供一种简便、灵敏、快速,并且特异性强的小肠结肠炎耶尔森氏菌、假结核耶尔森氏菌、志贺氏菌和空肠弯曲菌多重PCＲ 检测方法。方法根据小肠结肠炎耶尔森氏菌fox 基因、假结核耶尔森氏菌inv 基因、志贺氏菌ipaH 基因及空肠弯曲菌gyrA 基因设计并筛选出特异性引物; 优化退火温度等条件,分析多重PCＲ 的特异性、敏感性,使用该多重PCＲ 方法检测小鼠和豚鼠样品。结果多重PCＲ 扩增出了预计的PCＲ产物,即小肠结肠炎耶尔森氏菌( 511 bp) 、假结核耶尔森氏菌( 779 bp) 、志贺氏菌( 290 bp) 和空肠弯曲菌( 156 bp) 。该方法的灵敏度为1 × 10 － 3 ng /μL( 小肠结肠炎耶尔森氏菌、假结核耶尔森氏菌、志贺氏菌) 和1 × 10 － 2 ng /μL( 空肠弯曲菌) 。特异性检测未从其他菌中检测出阳性条带。使用该方法从样品中检测出不等的阳性样品数。结论该多重PCＲ 方法对实验动物微生物检测具有很好的应用和开发前景。     

鼠痘病毒TaqMan MGB 探针实时荧光定量PCＲ 快速检测方法的建立与应用研究

摘要: 目的建立快速、敏感、特异检测鼠痘病毒的TaqMan MGB 探针实时荧光定量PCＲ 方法。方法针对鼠痘病毒血凝素HA 基因设计特异性引物和探针,构建含有HA 基因的标准质粒进行定量分析,建立TaqMan MGB 探针实时荧光定量PCＲ 检测方法,评价其敏感性、特异性和稳定性。对临床标本中的鼠痘病毒进行检测。结果研究结果显示,建立的鼠痘病毒TaqMan MGB 探针实时荧光定量PCＲ 检测方法特异性为100%,与其他正痘病毒属病毒、非正痘病毒属病毒、细菌、真菌、寄生虫和细胞均无交叉反应。该技术灵敏度高,能精确定量检测鼠痘病毒DAN 线性范围达10 个数量级( 100—109 拷贝) ,最低检测限度为4 拷贝。该方法重复性非常好,组内变异系数和组间变异系数均小于3%。测试中相关系数、斜率和效率测量线性没有显著变化,表明该方法准确度高、精密度好。将其成功应用于临床标本中鼠痘病毒载量的定量检测,用普通PCＲ 和测序进行确证。整个检测过程可在2 h 内完成,可以用作快速诊断方法。结论本研究新建立的鼠痘病毒TaqMan MGB 探针实时荧光定量PCＲ 方法,具有快速简便、特异性强、灵敏度高的特性,适用于动物源性产品中鼠痘病毒检测、食品和药品安全检查、环境监测、流行病毒调查,为临床标本中鼠痘病毒的快速定量检测提供了一种特异有效的评价工具,值得推广应用。     

实验动物从业人员培训考核系统的应用与推广

摘要: 实验动物从业人员培训考核系统的7 个子系统已经全部建立起来,并在推广中不断完善。其中,实验动物从业人员上岗证考试系统于2014 年4 月份正式在北京地区推广使用,到2015 年6 月底,北京举行99 场考试,参考7 439人,合格人数为6 709 人,合格率95. 35%; 同时,黑龙江、内蒙、天津、辽宁、陕西和四川等地也已组织考试或正在准备采用该系统考试。实验动物从业人员培训考核管理系统的推广和应用,规范了不同省市间实验动物人员培训内容,统一了考核标准,达到了全国实验动物从业人员素质评价的一致性。     

病理学监测在实验动物质量评价中的地位

摘要: 目的从病理学角度评价啮齿类实验动物的健康情况,为实验动物质量评价提供依据。方法采集不同等级啮齿类实验动物的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大肠和小肠,经10% 中性福尔马林固定液固定,通过石蜡切片、HE 染色、PAS 染色、冰冻切片、油红O 染色后于显微镜下观察。结果虽然被检测动物的微生物学、寄生虫学和遗传学等指标都能达到或符合国家质量标准,但是病理学监测中都能观察到不同程度的组织病理学损伤,主要出现在肝脏、肺脏和肾脏,有时也发生在心脏、消化道和淋巴器官等。结论该结果说明,虽然啮齿类实验动物符合国家微生物学等标准,但仍有部分实验动物处于亚健康状态。病理学监测在实验动物质量评价中有着不可替代的重要作用。相关监管部门应该尽快制定实验动物病理学诊断的国家及地方标准,完善实验动物质量监测体系。     

实验动物突发重大疫病应急处置演习

摘要: 实验动物的生物安全是实验动物学科发展的重要前提,更是实验动物科学管理工作的底线。经过数十年的发展,我国实验动物行业已取得明显进步,但针对实验动物的生物安全处置体系尚不健全,面对突发重大实验动物疫病更是缺少长效的应急管理机制。为加强我国突发重大实验动物疫病应急处置体系建设,检验实验动物突发重大疫病应急预案,北京市实验动物管理办公室于2015 年11 月6 日组织了实验动物突发重大疫病应急处置演习。实践证明,本次实战演练有效地检验了预案,表明本预案方案严谨、内容科学、流程顺畅,但同时也反应出我国实验动物疫病应急处置体系中亟待解决的问题。     

小鼠巨细胞病毒PCR 诊断方法的建立及其应用

摘要: 目的建立小鼠巨细胞病毒( MCMV) PCR 检测方法,并进行初步应用。方法根据NCBI 公布的巨细胞病毒设计引物,进行PCR 体系优化、敏感性、特异性测试; 运用优化后的方法,对87 份小鼠血清进行检测,对阳性样本进行测序分析。结果建立的小鼠巨细胞病毒PCR 方法灵敏度高,特异性好,初步检测4 个屏障设施的87 份小鼠血清, 13 份为阳性,通过测序证实为小鼠巨细胞病毒,验证了此方法的可行性。结论为小鼠巨细胞病毒的快速检测提供了方法。     

动物实验室蒸汽高压灭菌器的安全操作与管理

摘要: 蒸汽高压灭菌器是动物实验室中常用且极具危险性的设备。其承担着动物房及实验室中大多数物品的灭菌工作。近年来压力容器事故时有发生,压力容器安全问题应引起高度重视。人员方面应具备特种设备作业人员资质,同时培养良好的行业素质。仪器方面要注重规范操作步骤,做好日常仪器维护工作,仪器在设计使用年限内按照周期接受检验,根据要求,高压蒸汽灭菌器所配套的压力表与蒸汽发生器的压力表均为每半年检验一次。高压蒸汽灭菌器配套的安全阀与蒸汽发生器的安全阀均为每一年检验一次。