运用HSV－tk／ACV系统进行肿瘤基因治疗研究

构建了含ｐｇｋ启动子驱动的ＨＳＶ－ｔｋ基因的反转录病毒载体ｐＬＮＴＫ，将ＨＳＶ－ｔｋ基因转移至人脑胶质瘤ＳＨＧ４４细胞（命名为ＳＨＧＬＮＴＫ）及小鼠黑色素瘤细胞Ｂ１６（命名为Ｂ１６ＬＮＴＫ）．体外实验证实核着类似物ＡＣＶ对ＳＨＧＬＮＴＫ细胞和Ｂ１６ＬＮＴＫ细胞的杀伤敏感性分别高于亲本细胞１０００和４００倍．转ＨＳＶ－ｔｋ基因细胞与亲本细胞按不同比例共培养时，亲本细胞对ＡＣＶ的敏感性明显增高，存在旁观者效应．首次应用人脑胶质瘤细胞株进行裸鼠体内实验，结果表明：ＡＣＶ能完全抑制ＳＨＧＬＮＴＫ细胞在裸小鼠体内肿瘤的形成，对裸小鼠体内已形成的ＳＨＧＬＮＴＫ肿瘤的治疗效果与对照ＳＨＧ４４肿瘤相比，肿瘤体积缩小８０％；用Ｂ１６ＬＮＴＫ细胞接种同系Ｃ５７／ＢＬ小鼠，经ＡＣＶ治疗后，Ｂ１６ＬＮＴＫ组小鼠的肿瘤较对照组Ｂ１６肿瘤小９５％．ＨＳＶ－ＴＫ／ＡＣＶ系统原位基因转移治疗ＳＨＧ荷瘤裸小鼠、Ｂ１６荷瘤小鼠，原位注射病毒悬液／ＡＣＶ治疗组的ＳＨＧ肿瘤、Ｂ１６肿瘤分别较对照组肿瘤小５０％，４３％，原位注射ＰＡ３１７／ＬＮＴＫ细胞，ＡＣＶ治疗的ＳＨＧ肿瘤较对照组肿瘤小９０％，以上实验结果，统计学上差异极显著，Ｐ＜０．０１．实验     

血清白蛋白在裸银电极上的直接电化学行为

本文研究了牛血清白蛋白在裸银电极上的直接电化学行为，在ＰＨ＝７．０的ＫＨ２ＰＯ４－Ｋ２ＨＰＯ４缓冲 溶液中，ＢＳＡ在裸银电极上有一对淮可逆的氧化还原峰，当扫描速度为２０ｍＶ／ｓ．ＢＳＡ浓度为１．２＊１０＾＆－７ｍｏｌ／Ｌ时，峰电位分别为＋０．２０Ｖ和＋０．０５Ｖｖｓ．ＳＣＥ。     

脱落酸受体及其基因的分子免疫学研究(英文)

发展了研究脱落酸（ＡＢＡ）结合蛋白的两类免疫探针。其一,用ＡＢＡ－Ｃ１－ＢＳＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析柱纯化出ＡＢＡ结合蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示该蛋白分子量为５６ＫＤ的一条带,它具有特异结合ＡＢＡ的能力（Ｋｄ＝２．０×１０－９ｍｏｌ／Ｌ）。当用蛋白水解酶Ｋ水解该蛋白,并用１％琼脂糖凝胶电泳时,发现其中存在约３００个核苷酸的ｒＲＮＡ分子。用识别ＡＢＡ结合蛋白的抗体筛选ｃＤＮＡ表达文库,从２００,０００个独立噬斑中获得１２０个编码玉米１７ｓＲＮＡ的ｃＤＮＡ克隆和１个ｃＤＮＡ编码结合蛋白的ｃＤＮＡ克隆（２４ｃＤＮＡ）。２４ｃＤＮＡ有１０７５个碱基对,含编码２５４个氨基酸的开放阅读框架。其二,制备了识别抗ＡＢＡ单克隆抗体的独特型抗体（ａｎｔｉ－Ｉｄ）,它具有模拟并竞争ＡＢＡ的能力。用上述两类免疫探针定位了植物细胞中的ＡＢＡ结合蛋白。发展了研究脱落酸（ＡＢＡ）结合蛋白的两类免疫探针。其一,用ＡＢＡ－Ｃ１－ＢＳＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析柱纯化出ＡＢＡ结合蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示该蛋白分子量为５６ＫＤ的一条带,它具有特异结合ＡＢＡ的能力（Ｋｄ＝２．０×１０－９ｍｏｌ／Ｌ）。当用蛋白水解酶Ｋ水解该蛋?     

新型效应细胞（A－LAK）抑瘤和抗转移作用的研究

本文研究了Ａ－ＬＡＫ细胞的抑瘤和抗转移作用，并与ＬＡＫ细胞进行了对比。结果表明，Ａ－ＬＡＫ对高转移人肺腺癌细胞在裸小鼠体内的肺转移抑制率达８２．７％，而ＬＡＫ的肺转移抑制率４６％，二者相比（ｐ＜０．０１）有显著差异，对人结肠癌裸鼠皮下移植瘤也有显著的抑瘤作用，并有明显的延长动物生存期的作用。总之，Ａ－ＬＡＫ细胞具有较高的抗肿瘤和抗转移作用，是一种较理想的新型效应细胞。     

t-PA在昆虫细胞中的表达

将含完整阅读框架的人ｔ－ＰＡ（ｔｉｓｓｕｅ－ｙｔｐｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ,ｔ－ＰＡ）ｃＤＮＡ克隆至昆虫细胞表达转移载体ｐＢａｃＰＡＫ８中,获得重组质粒ｐＢａｃ－ｔＰＡ。应用脂质体共转染法,将ｐＢａｃ－ｔＰＡ和线性化杆状病毒ＢａｃＰＡＫ６ ＤＮＡ共转染Ｔｎ－５Ｂ－１昆虫细胞。经空斑筛选获得１１株重组病毒。经ＰＣＲ鉴定与生物活性测定,获得一株高效表达ｔ－ＰＡ的重且病毒ＢａｃｔＰ     

血栓素A2在抗原引起气道嗜酸性粒细胞浸润中的作用

为观察血栓素Ａ２（ＴＸＡ２）合成酶抑制剂ＯＫＹ－０４６及ＴＸＡ２受体拮抗剂Ｓ－１４５２对嗜酸性粒细胞（ＥＯＳ）浸润气道的影响,探讨ＴＸＡ２在ＥＯＳ浸润过程的作用,应用鸡卵白蛋白（ＯＶＡ）致敏和反复雾化吸入刺激小鼠以复制过敏性气道炎症模型。除对照组外,各实验组小鼠于每天ＯＶＡ刺激前分别给予不同剂量ＯＫＹ－０４６或Ｓ－１４５２腹腔注射,计数支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中ＥＯＳ数量并测定ＢＡＬＦ中ＴＸＢ２和６－酮－前列腺素Ｆ１α（６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α）水平。结果,致敏小鼠给予ＯＶＡ刺激后ＢＡＬＦ中ＥＯＳ数,ＴＸＢ２和６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α水平均显著升高,当以ＯＫＹ－０４６或Ｓ－１４５２处理后,ＢＡＬＦ中的ＥＯＳ明显减小,并呈剂量相关性,而且ＯＫＹ－０４６尚能引起ＴＸＢ２水平呈剂量相关性降低。表明,ＴＸＡ２对于ＥＯＳ浸润到呼吸道具有明显的趋化作用,其合成酶抑制剂或受体拮抗剂对于临床治疗哮喘者可能会具有重要的价值。     

重度联合免疫缺陷（SCID）小鼠的繁育及其应用研究初报

应用带过滤罩的透明鼠笼在层流架内繁育先天性Ｔ和Ｂ淋巴细胞免疫缺陷的重度联合疫缺陷（ｓｅｖｅｒｅＣｏｍｂｉｎｅｄＩｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ，ＳＣＩＤ）小鼠获得成功。１９９３年５月自中国医学科学院实验动物研究所引进了３对ｓｃｉｄ小鼠种鼠以来，现已近交繁育至第十代共繁育ｓｃｉｄ小鼠７Ｚ０只，其寿命均超过１２个月。平均产仔数为５．５只，不育率为１４．９％，离乳率为８８．２％。ｓｃｉｄ小鼠４－１０周龄的体重与ＢＡＬＢ／ｃ小鼠相比无明显差异，微生物学检测符合ＳＰＦ级小鼠标准。解剖发现其胸腺极小，胸腺的相对重量仅为同龄ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的６％左右；脾脏相对重量为２７－３７％；外周血淋巴细胞仅占白细胞总数的１１－２６％。应用酶联免疫酶标法测定３－４周龄和大于１０周龄的ｓｃｉｄ小鼠血清ＩｇＧ的含量均小于１×１０￣（－３）ｍｇ／ｍｌ，没有发现ｓｃｉｄ小鼠的“渗漏”现象。人癌移植于ｓｃｉｄ小鼠后获得３种人癌移植瘤：肺腺癌（ＬＡＸ－８３）、肝细胞肝癌（ＬＣ－４１２）、结肠粘液腺癌（ｃｏｌｏｎ），其平均瘤重均显著大于ＢＡＬＢ／ｃ裸小鼠。     

生长调节剂对香石竹茎尖诱导形成芽的影响

将香石竹的茎尖作为外植体，分别接种于添加不同量细胞分裂素（６－ＢＡ或ＫＴ）及生长素（ＮＡＡ）的ＭＳ琼脂培养基上，结果表明，培养基中如果只添加６－ＢＡ或ＫＴ，当两者浓度分别在（０．０１－０．５）ｍｇ／Ｌ和（０．０１－１）ｍｇ／Ｌ时，对芽的产生起促进作用；在大于０．５ｍｇ／Ｌ和１ｍｇ／Ｌ时，则抑制芽的产生，培养基中同时加入ＮＡＡ和６－ＢＡ或ＫＴ，在ＮＡＡＲ 最小于６－ＢＡ或ＮＡＡ和ＫＴ时，利于芽的形成     

Bc1-2 基因加强表达对 OA 诱发的细胞编程死亡的效应

ＯＡ能诱发人神经母细胞瘤ＳＫ细胞进行编程死亡．死亡细胞缩小变圆，细胞质凝聚，ＤＮＡ有控降解成约２００ｂｐ左右的片段，且这一过程可由蛋白质合成抑制剂亚胺环己酮（ＣＨＸ）抑制．将编码Ｂｃ１－２全长蛋白质的ｃＤＮＡ植入ｐＸＪ４１ｎｅｏ载体中，使其表达由ＨＣＭＶ病毒启动子控制．形成的顺义（ｐＢｃｌ－２－Ｓ）及反义（ｐＢｃｌ－２－ＡＳ）表达质粒经转染导入ＳＫ细胞中获得稳定转染子，Ｗｅｓｔ－ｅｒｎ印迹表明顺义转染子表达较大量的２６ｋｄＢｃ１－２蛋白，而反义转染子则不表达．增强表达的Ｂｃ１－２基因产物对ＯＡ引ＳＫ细胞编程死亡无抑制效应．     

人胃癌裸小鼠体内原位移植浸润转移特征的研究

观察人胃癌原位移植至裸小鼠体内后的浸润转移特征,并探讨其发生机制,ＢＡＬＢ／Ｃ－ｎｕ／ｎｕ裸小鼠１２只,以ＳＧＣ－７９０１人胃癌细胞株裸鼠皮下移植瘤为材料,通过手术将瘤组织块移植到裸小鼠胃壁,待动物濒临死亡时进行系统解剖,观察其浸润转移的部位及特征,原位移植瘤全部成功,且所有动物均出现局部浸润及淋巴结转移,肝脏转移率为６６．７％,癌性腹水的发生率为５０％,移植肿瘤晚期还可向脾脏,胰腺及肾脏等处浸润     

人小细胞肺癌NCI-H446细胞裸鼠异种移植瘤模型的建立

目的　建立成瘤稳定、潜伏期短的人小细胞肺癌NCI_H4 4 6细胞裸鼠移植瘤模型。方法　初代移植后 ,通过皮下埋块法进行裸鼠体内连续传代移植 ,并对移植瘤的生长、组织形态和超微结构、染色体核型进行观察和检测。结果　通过连续传代移植建立了成瘤稳定、潜伏期短的人小细胞肺癌NCI_H4 4 6细胞裸鼠移植瘤模型。移植瘤的组织形态和超微结构特点符合NCI_H4 4 6细胞特点 ,染色体核型属人类染色体     

肿瘤组织块接种法建立人脑肿瘤裸小鼠移植模型的研究

以脑肿瘤患者肿瘤组织块接种法建立三种人脑脑肿瘤裸小鼠移植模型，成功率为４２．８％。移植瘤在质地、血供、间质结构、生长特征等方面良好保持了原肿瘤特性，其直接、快速、稳定地建立模型的方法优于肿瘤细胞系接种法。较高的建模型成功率有赖于快速接种、较大接种量、长期观察、良好的净化条件等因素。     

细小病毒H-1NS1基因在荷人肝癌裸小鼠几种组织及移植瘤中的转录和表达

为了解细小病毒H－1 NS1基因在移植瘤与荷瘤裸小鼠部分正常组织中转录和表达的差异性，采用RT－PCR和免疫组织化学的方法，对细小病毒H－1的NS1基因在NB－324K和QGY－7703细胞以及荷人肝癌裸小鼠的移植瘤及部分正常组织中的转录和表达进行了检测，NS1选择性地在人肝癌移植瘤中的高表达结果与细小病毒H－1的复制情况一致，这为细小病毒在活体内抑瘤作用提供了证据。     

人肿瘤细胞悬液裸鼠皮下接种及影响移植成功的因素

根据文献报道及作者实验中的体会 ,对人肿瘤细胞悬液裸鼠皮下接种方法及影响移植成功的因素从瘤细胞、裸鼠和操作者等三方面进行综述。较好地认知人肿瘤细胞悬液裸鼠皮下接种的具体操作程序和影响移植是否成功的多方面因素 ,为人肿瘤裸鼠皮下移植模型成功建立提供参考     

人小肠癌腹水转移细胞系HIC的建立及其生物学特征

建立了从人小肠癌腹水中分离培养的细胞系ＨＩＣ，目前已传３００余代，存活４２个月，并冻存３ａ余，单层培养细胞最短倍增时间１４ｈ，细胞具有未分化癌细胞特征，在裸鼠体内成瘤并具有非定点转移能力，该细胞系的染色体组型为亚三倍体，众数５３条。     

Specific targeted killing of ErbB2 positive breast cancer by retro virus-mediated Immunocaspase-3 secreting T cells

In this study, lmmunocaspase-3 gene was transfected into Jurkat T lymphocytes and the targeted proapoptotic protein Immunocaspase-3 was stably secreted.Its entry to ErbB2 positive SKBr3 breast carcinoma cell line was observed by indirect immunofluorescence staining.Growth of SKBr3 cells was significantly inhibited when they were cultured with medium containing Immunocaspase-3.Next, lmmunocaspase-3 gene was cloned into retrovirus vector pLNCX, which was then transfected into PA317 cells to package. Packaged cells producing high titer pseudoviruses were acquired and the pseudoviruses were harvested to infect PBMCs, which had been stimulated to division. The latter were selected and administered to nude mice bearing SKBr3 tumors through tail vein. The results showed that the treatment contributed to an inhibition of tumor growth and prolonged the lifetime of nude mice bearing SKBr3 tumor.The efficiency of inhibition of tumor reached 73.25%, and the average lifetime of treated nude mice was 80.95% longerthan that of control group. Immunohistochemical examination revealed the exclusive distribution of Immunocaspase-3 proteins only in the tumor tissue samples; and TUNEL assay confirmed the occurrence of apoptosis in tumor calls. Thepresent study suggests that Immunocaspase-3 secreted by T lymphocytes can selectively bind and enter into ErbB2 positive breast cancer cells, where it exhibits a proapoptotic activity and causes tumor suppression in an in vivo tumor model.     

Study on interleukin-18 gene transfer into human breast cancer cells to prevent tumorigenicity

To study the effect of interleukin-18 gene transfection on the tumorigenesis of breast cancer cell line Bacp37, human breast cancer cell line Bcap37 were transfected with Lipofectamine and selected by G418. The biological expression of rhIL-18 was tested by RT-PCR and ELISA method; nude mice were injected with Bcap37 cell with or without the hIL-18 gene. The hIL-18 cDNA was successfully integrated into Bcap37 cell; 126.3+/-4.5 pg hIL-18 secreted by one million transduced cells in 24 hours. Nude mice injected with IL-18 gene engineered Bcap37 cell had no tumor growth. These findings indicated that human breast cancer cells were successfully modified by the gene of IL-18 cytokine; the IL-18 gene engineered Bcap37 cells secreted hIL-18 and lost their tumorigenicity. The Bcap37 cells transduced with IL-18 gene may be used as breast cancer vaccine.     

三种癌裸鼠移植瘤肝脾转移的比较研究

摘要: 目的利用人卵巢癌、胃癌、结肠癌裸鼠移植瘤动物模型观察比较肝脾转移情况。方法分别将人卵巢癌、 胃癌、结肠癌实体瘤移植到裸鼠皮下,在建立人卵巢癌、胃癌、结肠癌裸鼠实体瘤模型的基础上,观察裸鼠实体瘤生 长速度、存活时间及肝脾转移病理形态学变化。结果人卵巢癌、胃癌、结肠癌实体瘤移植到裸鼠皮下,移植成瘤 率、肝转移率皆为100% ; 卵巢癌脾转移100% ; 胃癌脾转移62. 5% ; 结肠癌脾转移75% 。人卵巢癌裸鼠实体瘤生 长速度高于胃癌、结肠癌裸鼠实体瘤,且肝脾转移快,存活时间短; 三种癌裸鼠移植瘤肝脾转移病理形态均有差异。 结论建立的人卵巢癌、胃癌、结肠癌裸鼠移植瘤肝脾转移完整地再现了人卵巢癌、胃癌、结肠癌患者肝脾转移的 临床过程,为探讨人卵巢癌、胃癌、结肠癌肝脾转移生物学机制和抗转移提供参考,三种癌裸鼠移植瘤肝脾转移癌 均有差异。     

Reversal Efficacy of SDZ-PSC833 and Verapamil on Drug-Resistant Human Cervical Carcinoma Cells Line

This article discusses the characteristics of the drugresistant human cervical carcinoma cell line HeLa/MMC and investigates reversal effect of SDZ-PSC833（PSC833） and Verapamil （Ver） upon HeLa/MMC. Relative content of cell DNA detection, H3-TdR incorporation test and drug-resistance have been experimented, meanwhile a tumor transplant model in the nude mice for Hela/MMC has been established. Then the volume of cancer, tumor weight, curve line of growing up in tumor -bearing nude mouse and its morphological variation of carcinoma organism are observed to evaluate the reversal effect of PSC833 and VER. It has been found that： （1） Compared with HeLa cells,subline HeLaJ MMC Cells＇ drug-resistant capability against Mitomycin（MMC） or cisplatin（DDP） is as 5.02 folds or 2 folds as that of the former, respectively. The Hela/MMC cell line has characteristics of multi- drug resistance and stronger multiplication; （2） PSC833 and VER can reverse resistance of HeLa/MMC to Mitomycin in vivo.PSC833 will be a better candidate for reversing multidrug resistant than verapamil in clinic application.