58型人乳头瘤病毒E7蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

 为获得抗58型人乳头瘤病毒(HPV58)E7蛋白的单克隆抗体,乳糖诱导重组工程菌表达HPV58 E7融合蛋白,以纯化后的该重组蛋白为免疫原,经细胞融合和有限稀释后,得到6株分泌抗HPV58 E7单克隆抗体(McAb)的工程细胞株,并采用体内接种方法及亲和柱层析纯化技术制备6株抗体.酶联免疫吸附测定(ELISA)、Western-blot实验和细胞免疫荧光检测结果表明,所得抗体均为IgG2a类,κ型,抗体效价均可达10^-5,并且能够与原核及真核系统表达的HPV58 E7蛋白发生特异性抗原-抗体反应.该抗体的成功制备为后续HPV58 E7致癌生物学研究及相关肿瘤诊断试剂的开发奠定基础.     

新疆维吾尔族妇女宫颈癌中HPV16感染和p53蛋白表达的相关性研究

采用半巢式PCR法检测 80例新疆维吾尔族宫颈癌及 3 4例正常宫颈组织中HPV16DNA ,采用免疫组化法检测p5 3蛋白 ,分析其与宫颈癌发生的相关性 ,探讨HPV16感染和p5 3蛋白表达在新疆维吾尔族妇女宫颈癌发生中的作用。结果显示 :HPV16检出率在宫颈癌中为 80 .0 % ,与对照组 8.8%相比 ,存在显著性差异 ( χ2 =4 9.88,P <0 .0 0 5 ) ;宫颈癌组织中p5 3蛋白表达阳性率为 6 2 .5 % ,也明显高于对照组 ,P <0 .0 0 5 ;p5 3蛋白表达与HPV16感染在统计学上无相关 ( χ2 =0 .0 ,P >0 .0 5 )。表明 :HPV16感染与新疆维吾尔族妇女宫颈癌发生密切相关 ;HPV16感染的宫颈癌组织中p5 3蛋白表达有升高趋势     

HPV16、18型E6/E7融合基因痘苗病毒表达载体的构建

目的:构建一种含人乳头瘤病毒(HPV)16型、18型E6/E7融合基因痘苗病毒表达载体.方法:PCR扩增HPV16型、18型E6、E7基因,克隆到pSC-A载体中,通过定点突变方法,分别构建成含E6/E7融合基因的质粒,即pSC-A.HPV16 E6/E7和pSC-A-HPV18 mE6/E7,并将二者连接成载体pSC-A-HPV16 E6/E7-HPV18mE6/E(pSC-T,HPV16 E6/E7-HPV18mE6/E7:T),最后以痘苗病毒表达载体pJ38为转移载体,构建质粒pJ38-HPV16 E6/E7-HPV18mE6/E7(pJ38-T),对所有重组质粒进行酶切鉴定和测序分析.结果:E6/E7融合基因成功克隆到pJ38上.结论:成功构建表达HPV E6/E7融合基因重组痘苗病毒载体,为研制宫颈癌治疗性疫苗奠定基础.     

人乳头瘤病毒16和52型双荧光等温多自配引发扩增的

应用等温多自配引发扩增（IMSA）技术, 分别针对人乳头瘤病毒(HPV)16型的E7和52型的E6基因序列设计6条特异性引物, 并在检测体系中加入羟基萘酚蓝（HNB）和SYBR GreenⅠ的混合双荧光指示剂, 建立快速检测人乳头瘤病毒的双荧光IMSA方法. 结果表明： 340 μmol/L HNB与1∶10 000 SYBR GreenⅠ混合构建的双荧光指示剂在IMSA反应体系中具有明确的指示效果, 455 nm蓝光激发下阳性反应管双荧光显色为黄绿色, 阴性反应管双荧光显色为橘红色; 该方法对HPV16和HPV52型检测限分别达60,600拷贝/μL, 可特异性检出样品中HPV16和HPV52, 与临床检测结果比对无差异.     

成都地区人乳头瘤病毒型别分布研究

应用反向膜杂交技术对1668例标本进行型别鉴定和统计分析.在1668例标本中,共检出阳性标本673例,感染率为40.3%;其中单重感染512例,占阳性标本的76.1%,双重感染96例,占阳性标本的14.3%;单重感染中的高危型感染318例,占阳性标本的47.3%,低危型感染194例,占阳性标本的28.8%.结果表明成都地区HPV感染率较高,且以单一基因型感染为主,其中HPV-16感染率最高,其次是HPV-18,低危型HPV感染以HPV-6和HPV-11为主.     

58型HPV E6蛋白的原核表达与分离纯化

宫颈癌是一种在女性人群中的常见肿瘤,严重威胁着女性的生理和心理健康;而人类乳头瘤状病毒(HPV)的长期感染是宫颈癌发生的主要诱因.因此,HPV病毒的研究对于我们了解和防治宫颈癌有着十分积极的意义.目前,国外的研究比较多的针对于16型和18型的HPV病毒;但是对于我国比较常见的58型HPV病毒却研究甚少.所以,本试验依据实验室现有的表达纯化平台和噬菌体展示多肽筛选平台,设计并构建了HPV58 E6蛋白的原核表达体系,并对E6重组融合蛋白进行了诱导表达.通过对表达获得的包涵体蛋白进行反复的洗涤、亲和层析以及复性等纯化步骤,得到了纯度较高的E6融合蛋白.     

性激素是HPV16—DNA永生化人外宫颈上皮细胞的弱调节剂

研究激素对ＨＰＶ１６－ＤＮＡ永生化人外宫颈上皮细胞（ＨＣＥ１６／３细胞系）体外生长的影响。方法：使用［３Ｈ］－胸苷掺入试验,软琼脂糖集落试验和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法分析了性激素对ＨＣＥ１６／３细胞的生长调节和病毒基因的表达。结果：在无类固醇血清无酚红的培养条件下,雌二醇和孕酮对ＨＣＥ１６／３细胞的生长无明显影响,而胰岛素则是ＨＣＥ１６／３细胞的生长刺激素。胰岛素的刺激细胞生长作用不能被性激素所增强;雌二醇也不能诱导ＨＣＥ１６／３细胞停泊独立生长。但Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析显示性激素上调ＨＣＥ１６／３细胞病毒早期基因表达,该基因的表达可能与ＨＰＶＤＮＡ永生化细胞的生长有关。结论：ＨＣＥ１６／３细胞的生长仍然依赖于生长因子,性激素刺激病毒早期基因表达,要阐明性激素对人宫颈癌发生所起的作用,仍需做更多的工作     

胃上皮内瘤和胃癌组织中p53蛋白表达的意义

探讨胃上皮内瘤和胃癌组织中P53蛋白的表达及其临床意义;应用免疫组化SP法对10例慢性胃炎组、30例胃上皮内瘤组及20例胃癌组中P53的表达进行检测;慢性胃炎中无p53表达,随着异型增生程度的增加,p53阳性表达也在增加,胃癌的阳性率最高;p53蛋白在胃上皮内瘤中即显示异常表达,其突变发生于胃粘膜癌变的早期阶段,提示p53基因的缺失、突变与细胞的异型性密切相关。     

人乳头瘤病毒疫苗的研究进展

人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)广泛感染人类,能够导致宫颈癌等恶性肿瘤的发生,严重危害人类的健康.HPV疫苗能够有效阻止HPV感染及其导致的疾病,世界卫生组织正在实施全球消除宫颈癌的计划.本文结合厦门大学在HPV疫苗研发中取得的研究成果,综述了HPV及其疫苗研究领域的进展,包括HPV的生...     

人16型乳头瘤病毒"假病毒"的制备

利用杆状病毒表达体系,在sf9细胞中表达人16型乳头瘤病毒(Human Papillomavirus type 16, HPV16)的晚期表达蛋白L1,通过超速离心的方法得到HPV16病毒样颗粒(virus like particles, VLPs).VLPs经过DTT和EDTA处理解聚成L1蛋白,将构建好的真核表达载体E6E7-pcDNA3.1 与解聚的L1蛋白混合,透析除去DTT和EDTA并逐渐升高Ca2 的浓度,解聚的L1能够重新聚集成VLPs,其中一部分VLPs包裹了真核表达载体,和天然的人乳头瘤病毒的构成很相似,作者称之为"假病毒".     

宫颈癌组织差异表达基因的检测及分析

选取三例经分型明确为HPV16感染的宫颈癌病例,取癌组织(T)、癌旁组织(N)及远瘤正常宫颈组织(F)标本,用Roche NimbleGen芯片系统筛选出差异表达的基因并进行分析.三例标本中,癌组织与远瘤正常宫颈组织相比,差异表达基因共有673个,其中261个上调,412个下调;差异表达基因主要有原癌基因、抑癌基因、细胞信号转导、代谢、免疫应答、细胞受体、蛋白翻译合成有关基因等.     

人乳头瘤病毒11型E7 DNA疫苗质粒的构建和鉴定

目的 构建人乳头瘤病毒11型(HPV11)E7 DNA疫苗质粒．方法 从尖锐湿疣病变组织中提取DNA制备模板，采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增HPV11-E7基因，将E7基因经双酶切后定向克隆到pcDNA3．1( )中，测序鉴定．结果从病变组织中扩增出了全长HPV11-E7基因，并正向插入载体pcDNA3．1( )中，经酶切和测序鉴定无误．结论 HPV11-E7 DNA疫苗质粒构建成功，为今后进行防治尖锐湿疣的动物实验和临床实验奠定了基础．     

人野生型p53基因的克隆及原核表达

利用RT PCR方法由人外周静脉血淋巴细胞中获得人p53 cDNA片段, 并将其克隆入原核表达载体pQE40中, 构建重组质粒pQE40-p53; 转化于E.coli M15宿主菌, 经IPTG诱导, 表达了N端融合6His的p53融合蛋白. 利用6His与Ni²⁺高亲合力结合的性质, 经镍柱纯化、 透析袋分级透析复性、 Western Blot鉴定, 结果表明获得了纯化的6His-p53融合蛋白.
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人乳头瘤病毒疫苗的研究策略及最新进展

人乳头瘤病毒（HPV）的持续感染与多种皮肤粘膜肿瘤密切相关，研制有效的病毒疫苗成为研究者的共同目标。本文系统综述了人乳头瘤病毒疫苗在预防和治疗两方面的研究策略以及动物和临床试验的新进展，主要包括旨在预防高危型病毒感染的二价疫苗，临床试验，交叉中和表位的研究，增强治疗性疫苗免疫原性的新尝试以及树突状细胞在病毒感染局部免疫作用中的新发现。     

CD44v6和p16在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中的表达及意义

目的探讨CD44v6和p16表达产物在宫颈上皮瘤样病变及宫颈癌中表达的意义。方法对正常宫颈鳞状上皮、宫颈上皮内瘤变（CIN）和宫颈癌组织共95例,采用免疫组织化学SP法,对宫颈癌变过程中CD44v6和p16蛋白进行研究,将结果进行统计分析。结果CD44v6蛋白在CIN中的表述高于正常宫颈上皮（P〈0.01）,在宫颈癌中的表达也高于正常宫颈上皮（P〈0.01）,且高于CIN中的表达（P〈0.01）,p16蛋白在CIN中的表达高于正常宫颈上皮（P〈0.01）,在宫颈癌中的表达也高于正常宫颈上皮（P〈0.01）;CD44v6和p16两种蛋白在CIN和宫颈癌中的表达无明显差异。结论CD44v6和p16蛋白的表达与宫颈癌的发生有关,提示这两种蛋白有可能作为高危人群早期筛查的一种免疫组化指标。     

人乳头状瘤病毒的生殖器官感染与癌症

人乳头状瘤病毒是重要的性传播疾病原体之一，且与宫颈癌的发病密切相关。目前看来，开发疫苗是预防ＨＰＶ感染的主要手段。     

维吾尔族妇女宫颈癌及HPV感染与多种基因表达上调的关系

 通过对维吾尔族妇女宫颈癌病变的高表达候选基因筛查分析,寻找族群特异的宫颈癌早期预警分子指标及其与HPV感染的相关性。收集维吾尔族妇女患者子宫颈新鲜组织标本85例,其中子宫颈鳞癌53例,慢性宫颈炎32例作为对照。提取组织DNA和RNA,利用HPV特异性PCR引物鉴定HPV感染阳性和型别,采用半定量RT-PCR方法对鉴定7种候选基因的转录表达水平变化。结果表明,宫颈炎或癌旁正常组织中的TK1、SPP1和ARPC2/3 mRNA检出率较低(25%—28%),在宫颈鳞癌中明显增高(62%—66%),其差异显著(P＜0.05);但是ANX8、HSPA1A、S100-A9和S100-P基因的转录表达水平变化不明显,其差异也无统计学意义(P＞0.05)。从HPV感染的角度分析,HPV阴性患者的TK1和SPP1 mRNA表达检出率较低(50.0%和44.2%);HPV阳性患者很高(82.9%和74.2%),有统计学意义(P＜0.05)。研究表明,SPP1、TK1和ARP2/3基因表达上调可能是维吾尔族宫颈癌发生的重要标志,其中TK1和SPP1基因表达水平变化可能对HPV感染有依赖关系。     

人乳头瘤病毒16L1抗血清的制备和鉴定

人乳头瘤病毒16型是导致宫颈癌发生的主要因素,其晚期蛋白L1在体内或体外可自组装形成VLP颗粒.作者构建了DNA疫苗载体pDRVI1.0-16L1,大提质粒后免疫BalB/C小鼠制备抗体,并对抗体进行了特异性鉴定,为HPV16L1预防性疫苗的进一步研究和应用奠定了基础.     

肿瘤转移相关基因CD44v6与p53在胃癌组织中的表达和预后

目的探讨肿瘤转移促进基因CD44v6和肿瘤转移抑制基因p53在胃癌组织中的表达与预后.方法45例浸润性胃癌组织来自哈尔滨医科大学附属第二医院病理科.采用sABC方法进行CD44v6和p53免疫组织化学检测.结果CD44v6在胃癌组织中表达率为53.3%(24/45).其中低分化腺癌伴印戒细胞癌的表达率高(16/24,66 7%).p53在胃癌组织中的表达率为75.6%(34/45),而在组织学的分型方面无明显差别.结论p53是最先参与肿癌侵袭和转移的抑癌基因.CD44v6具有在不同组织学类型的胃癌中表达率不同的特点,结果表示CD4v6的表达率可判断不同组织学类型胃癌的预后.     

HPV16 E6基因真核表达载体的构建

本研究目的是构建HPV16 E6真核表达载体,为细胞转染研究E6蛋白和p53Arg或p53Pro蛋白的相互作用以及作用后对细胞功能的影响奠定基础。应用PCR技术从质粒pSP64-HPV16 E6上扩增出HPV16 E6片断。根据Kozak序列对真核蛋白表达的影响,设计2条引物扩增出2个HPV16 E6目的片断均插入真核表达载体pcDNA3．1／myc-His（-）A中,构建pcDNA3．1／myc-His（-）A．HPV16 E6重组质粒。研究结果显示：经酶切和测序鉴定克隆的基因片段为HPV16 E6 cDNA;建立了pcDNA3．1／myc-His（-）A-HPV16 E6重组质粒。这表明,已成功构建HPV16 E6真核表达载体pcDNA3．1／myc-His（-）A-HPV16 E6。