牛冠状病毒的增殖与提纯

以犊牛肺继代细胞增殖牛冠状病毒(BCV),用聚乙二醇(PEG6000)浓缩、超速离心和蔗糖梯度离心纯化病毒,并以小鼠红细胞测定提纯过程中每一步骤离心上清液及沉淀悬浮液中BCV的血凝(HA)滴度。发现浓缩条件不同(浓缩过程中加入NaCl和PEG6000的浓度不同),对病毒的回收率有影响,而以用2.10％NaCl的沉淀效果最好,可使上清液中残留HA滴度降至0;PEG6000的浓度对BCV沉淀效果也有影响,7.0％的PEG6000(在NaCl为2.1％时)可使离心后上清液中的HA滴度降至0。PEG6000浓度低于6.0％或离子7.5％时,沉淀效果都不佳。     

树鼩小肠上皮细胞的体外分离培养与鉴定

目的从树鼩小肠分离小肠上皮细胞,探索分离培养方法和条件,为药物开发和病原感染机制研究提供体外细胞模型,并且为建立树鼩小肠上皮细胞系奠定基础。方法采用胶原酶Ⅺ和中性蛋白酶Ⅰ及DTT联合消化树鼩小肠组织块,得到的细胞经完全培养液培养,用相差显微镜观察细胞形态,通过MTT法测定细胞生长曲线,并采用细胞角蛋白荧光染色等方法鉴定细胞。结果经优化分离法得到的肠上皮隐窝细胞团在24 h后贴壁,6 d汇合成片,在显微镜下观察发现细胞团延辐射状向外长出铺路石样和多角状的细胞;第二代后,每隔2~3 d可传代1次;细胞接种3~6 d为对数生长期;细胞角蛋白18进行免疫荧光鉴定后确定为小肠上皮细胞。结论本实验成功地从树鼩小肠分离到了小肠上皮细胞,并且建立了树鼩小肠上皮细胞体外培养的方法。     

树鼩规模化繁殖及繁殖群的建立

目的对野生来源树鼩的繁殖性能及仔树鼩的哺育方法进行了研究,探索出一套经济实用、规模化的繁殖方法,取代以往依靠人工喂养的方式。方法提供适合的饲养管理环境和条件,完全由母树鼩主动自然哺育新生树鼩,观察统计怀孕率、产仔数、成活率、仔树鼩生长情况。结果 2010年通过120对繁殖群,成功离乳354只F1代仔树鼩,自然繁殖成活率为90.76%。目前已建立野生来源树鼩繁殖群150对,F1代繁殖群40对,为建立达到标准要求的树鼩种群奠定了基础。结论该方法的树鼩繁殖率和成活率较高,成本低且操作简单,为树鼩实验动物化应提倡的一种方法。     

电子芯片在树鼩管理中的应用

摘要: 目的树鼩具有灵活、多动的行为特性,建立一种适合树鼩个体标记简单易行的方法,对于树鼩种群的科学 化管理十分必要。方法随机挑选自繁F1 代的幼龄树鼩和成年树鼩各40 只,采用2. 12 mm × 12 mm,质量为 0. 09 g的电子芯片,通过注射植入树鼩颈背部皮下; 观察芯片植入部位情况并定期复查。结果在注射芯片10 个 月之后,对动物复检结果显示,对大笼内群养树鼩标记有效率为90% ; 单笼饲养树鼩的有效率达到95% 。结论对 树鼩个体采用电子芯片标记技术是一种简单、有效和持久的方法。     

树鼩IL-2Rα(CD25)基因的分离、鉴定及表达分析

CD25是CD4+CD25+调节性T细胞的重要标记分子.树鼩是一种重要的人类疾病动物模型,但是,树鼩的CD25基因还是未知.我们以树鼩脾脏RNA为模板,对树鼩白介素-2受体基因alpha链(tsCD25)进行了RT-PCR(逆转录-聚合酶链式反应),获得了一个816bp的开放阅读框.TsCD25 cDNA编码一个由271个氨基酸组成的分子量为30.9 ku的蛋白多肽.预测的tsCD25包含2个Sushi结构域、2个N-糖基化位点和多个O-糖基化位点.tsCD25和灵长类CD25在氨基酸水平上的同源性为65.3%～66.4%.RT-PCR检测发现,tsCD25 mRNA分布于树鼩的外周血、脾脏和肺,并受PMA 和 ionomycin 刺激的调节.我们的结果为下一步制备tsCD25单克隆抗体,抑制CD4+CD25+Tregs功能以及开展有关的研究工作奠定了基础.     

野生滇西亚种树鼩体内外寄生虫感染及其致病性的分析

目的调查分析野生滇西亚种树鼩体内外寄生虫感染种类及特征,分析其可能对动物的致病性,为人工饲养树鼩的质量控制和保护树鼩群体提供科学依据。方法随机选取200只野生滇西亚种树鼩,分别用活体漂浮法和直接拔毛法制片,置于体视镜和显微镜下鉴定体外寄生虫种类;体内寄生虫分别采用粪便漂浮法和粪便沉淀法进行检测,并在显微镜下鉴定。结果野生滇西亚种树鼩体外寄生虫感染率分别为虱20.5%、蚤5.5%、螨3.0%、颗粒硬蜱1.0%、黄蛛甲1%、圆胸皮蠹1%、水蛭1%、蛛甲0.5%;体内寄生虫感染率分别为线虫14%、线虫卵33%、绦虫9%、绦虫卵20%、变形虫2%。结论野生滇西亚种树鼩体内外寄生虫的自然感染种类繁多,对树鼩群体的影响不可低估,应该引起重视。     

不同诱导条件对树鼩骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的影响

目的 探讨不同诱导条件对树鼩骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）体外向成骨细胞分化的影响。方法 取 P3代树鼩骨髓间充质干细胞分成7组进行诱导。A组：高糖DMEM+1μmol/L地塞米松+100μmol/L维生素C+10 mmol/Lβ-磷酸甘油钠;B组：高糖 DMEM+50 ng/mL BMP-2;C组：高糖 DMEM+80 ng/mL BMP-2;D组：高糖DMEM+50μmol/L维生素C+10 mmol/Lβ-磷酸甘油钠+20ng/m L BMP-2;E组：高糖 DMEM+1μmol/L地塞米松 +100μmol/L维生素C+20 mmol/Lβ-磷酸甘油钠;F组：高糖DMEM+100μmol/L地塞米松+100μmol/L维生素 C+10 mmol/Lβ-磷酸甘油钠;G组：DMEM/F12+0.1μmol/L地塞米松 +50μmol/L维生素C+10 mmol/Lβ-磷酸甘油钠。诱导18 d后进行碱性磷酸酶和茜素红染色鉴定其诱导分化情况。结果 每一组碱性磷酸酶染色呈不同程度的阳性,茜素红染色可在A、B、C、D和E组观察到明显矿化结节。结论 A组、B组、C组、D组和 E组可以诱导树鼩BM-MSCs向成骨细胞分化,其中以A组和B组效果最为突出。     

六种核酸提取试剂盒对粪样中小鼠肝炎病毒核酸 提取效率的比较

目的 比较六种商品化试剂盒在小鼠粪便中提取小鼠肝炎病毒(MHV)RNA的效率,筛选出效率高、耗时短的核酸提取方法。方法 采集感染MHV小鼠的新鲜粪便样本,分别用液氮研磨法、磁珠匀浆法以及PBS溶解离心法进行处理,通过同一核酸提取试剂盒比较病毒核酸提取效率,明确最佳样本前处理方法;之后,用6种试剂盒进行RNA提取,经反转录后进行TaqMan实时定量PCR检测,以Ct值评价6种试剂盒的提取效率,结合产物测序和血清抗体ELISA结果,筛选MHV的最佳核酸提取方法。结果 对于粪便样本的前处理,液氮研磨法的RNA提取效率显著高于磁珠匀浆法。对于6种试剂盒的提取效果,TIANGEN DP422[总RNA浓度：(549.70±52.38) ng/μL,Ct值：(24.51±0.10)]核酸提取效率最高;TIANGEN SD101[总RNA浓度：(274.13±6.87) ng/μL,Ct值：(2.39±0.017)]和QIAGEN 52904[总RNA浓度：(288.13±15.11) ng/μL,Ct值：(2.40±0.012)]用时最短;XS VRL[总RNA浓度：(348.80±15.85) ng/μL,Ct值：(24.70±0.13)]操作最为方便。结论 粪便样本前处理建议采用液氮研磨法。针对粪便中MHV RNA的提取,TIANGEN DP422提取效率最高,推荐用于小鼠肝炎病毒的分子生物学检测。     

化学通讯介导对中缅树鼩个体识别的影响

为了探究尿液、粪便及胸腺分泌物对中缅树鼩个体识别的影响,通过Y-迷宫对中缅树鼩尿液、粪便和胸腺分泌物三种气味源的选择频次进行了统计分析。结果表明:用三种气味源与对照作为刺激源时,中缅树鼩均显著选择尿液和胸腺分泌物(P0.05);在习惯性实验中中缅树鼩对同性尿液和胸腺分泌物的选择频次持续下降,对陌生个体尿液和胸腺分泌物的选择频次显著增加(P0.05);尿液、胸腺分泌物在雌雄中缅树鼩个体识别的影响表现出明显差异,中缅树鼩对尿液和胸腺分泌物的选择频次均显著多于对照组(P0.01),而且雄性胸腺分泌物较雌性更受关注(P0.05),但雌性尿液比雄性更受关注(P0.05)。以上所有结果说明,中缅树鼩的尿液和胸腺分泌物中包含个体信息并用以识别个体,这两种气味源中所包含的化学信号对中缅树鼩个体间的交流极为重要,而粪便可能仅为单纯的排泄生理。     

树鼩PD-1基因的分离、鉴定及表达分析

PD-1(Programmed cell death 1)是一种抑制性的受体,是免疫球蛋白超家族的成员.大量研究证明PD-1能被诱导而在活化的T淋巴细胞、B淋巴细胞、NKT 细胞和单核细胞上表达,从而在慢性感染的病因学中起着重要作用.树鼩(Tupaia belangeri)做为一个理想的模型可被应用于许多人类感染性疾病如乙型病毒性肝炎.为了充分利用树鼩对于感染性疾病的宿主免疫应答模型,我们分离出树鼩PD-1基因.利用迅速扩增cDNA末端PCR(RACE-PCR)技术,从树鼩脾组织中克隆了PD-1基因的全长cDNA序列.序列分析显示树鼩PD-1 cDNA 的开放阅读框编码一个由242个氨基酸组成的跨膜蛋白,并且和人类、灵长类和啮齿类中的同源基因有高度相似性.组织分布分析表明在所检测的几种组织中PD-1基因只在脾中表达.此外,淋巴细胞刺激实验显示,利用PMA和ionomycin刺激新鲜分离的树鼩外周血单核细胞(PBMCs)能够诱导PD-1 mRNA水平上的表达.我们的结果为将来进一步探讨树鼩的免疫功能提供了良好的基础.     

Performance evaluation for selectivity of the flocculant on hematite in selective flocculation

Increased demand for iron ore necessitates the utilization of low-grade iron ore fines, slimes, and existing tailings. Selective flocculation can be an alternative physico-chemical process for utilizing these low-grade fines, slimes, and tailings. In selective flocculation, the most critical objective is the selection of proper reagents that will make floc of desired minerals. In present study, selective flocculation was applied to ultra-fine synthetic mixtures of hematite and kaolinite, and the Fe value was upgraded up to 65.78% with the reduction of Al₂O₃ and SiO₂ values to 2.65% and 3.66%, respectively. Here, degraded wheat starch was used as a flocculant.In this process, separation occurs on the basis of the selectivity of the flocculant. The selectivity of the flocculant can be quantified in terms of separation efficiency. Here, an attempt was also made to develop a correlation between separation efficiency and major operating parameters such as flocculent dose, pH value, and solid concentration to predict the separation performance.     

超声法从剩余污泥中提取微生物絮凝剂的研究

通过超声系列试验,对超声法从剩余污泥中提取微生物絮凝剂(MBF)进行了系统研究.从剩余污泥中提取的MBF在偏酸性条件下和35～40℃范围内表现出较高的絮凝活性.超声时间以1～3 min为宜,超声功率以210～270W为宜.污泥浓度越高,所提取的MBF浓度越高;对于从高浓度污泥提取的MBF,投加剂量可随污泥浓度升高而减小,以获得较好的絮凝效果.MBF主要成分包括蛋白质、多糖和核酸.研究结果表明,超声法可用于从剩余污泥中直接提取MBF,在降低MBF生产成本的同时实现污泥的资源化利用.     

药剂真空预压法处理宁波废弃泥浆试验研究

针对浙江宁波某场地的工程废弃泥浆进行了系列药剂真空预压室内试验研究,基于沉降柱试验确定不同絮凝剂的最佳添加量;按照絮凝剂最佳添加量,进行阴离子聚丙烯酰胺药剂真空预压法的模型试验,探讨药剂真空预压法固液分离的效果;最后,对模型箱中不同位置处的泥样做压汞试验,研究泥样微观孔隙沿径向的分布规律.研究表明:加入适量絮凝剂后,初始上清液浊度较为接近,且浊度随时间变化曲线斜率较大,絮体尚未稳定;24h后浊度曲线斜率较小,絮体达到较为稳定的状态,此时上清液浊度最低对应的絮凝剂添加量为最佳添加量.加入絮凝剂后泥浆颗粒粒径明显增加,大于0.075mm的颗粒由原来的11.78%增加到了79.69%.废弃泥浆絮凝后静置24h后排出上清液含水率从278%降至157%,真空预压136h后从157%降低到了约47.2%,固液分离的效率较高.经过药剂真空预压后,泥浆中孔隙被大大压缩,孔径峰值区域从絮凝后真空前的1 000~120 000nm减小到100~20 000nm,且距离中心越近孔径越小.     

声场对胶体物系絮凝分离作用的研究

选用具有代表性的亲水胶体－果胶溶液和原糖溶液为研究对象,研究了声声对胶体物系絮凝分离的强化作用,研究结果表明,超声空化效应能使亲水胶体水化层减薄,双层层电位降低,在适宜的参数条件下,声场能显著地促进胶体絮凝分离。这为物理场絮凝分离胶体提供了一个新的途径。     

禽流感病毒通用型荧光定量PCR检测试剂盒比对结果分析

对6种禽流感病毒通用型荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction),PCR检测试剂盒进行比对与科学评价,为实验室采购提供依据。利用禽流感病毒H5、H7、H9亚型标准品,鸡新城疫活疫苗与传染性支气管炎活疫苗对市售的6种品牌(分别记为A、B、C、D、E、F)禽流感病毒通用型荧光定量PCR检测试剂盒灵敏性与特异性进行了比对,并对97份临床样品进行了检测,筛选出禽流感病毒通用型最佳检测试剂盒。结果表明:A厂家试剂盒最低可检出1:100倍稀释的H7亚型标准品浓度,B厂家试剂盒最低可检出1:1倍稀释的H7亚型标准品浓度,C厂家试剂盒最低可检出1:10倍稀释的H7亚型标准品浓度,D厂家试剂盒最低可检出1:10倍稀释的H7亚型标准品浓度,E厂家试剂盒最低可检出1:1 000倍稀释的H7亚型标准品浓度, F厂家试剂盒最低可检出1:10倍稀释的H7亚型标准品浓度,6种试剂盒特异性均良好。综上,E厂家试剂盒优于其他厂家试剂盒,可以作为动物疫病检测实验室在实施监测任务中的首要选择。     

Artificial neural network approach to assess selective flocculation on hematite and kaolinite

Because of the current depletion of high grade reserves, beneficiation of low grade ore, tailings produced and tailings stored in tailing ponds is needed to fulfill the market demand. Selective flocculation is one alternative process that could be used for the beneficiation of ultra-fine material. This process has not been extensively used commercially because of its complex dependency on process parameters. In this paper, a selective flocculation process, using synthetic mixtures of hematite and kaolinite in different ratios, was attempted, and the adsorption mechanism was investigated by Fourier transform infrared (FTIR) spectroscopy. A three-layer artificial neural network (ANN) model (4-4-3) was used to predict the separation performance of the process in terms of grade, Fe recovery, and separation efficiency. The model values were in good agreement with experimental values.     

H2O2-Fe2+氧化法处理棉浆泊黑液

先用酸析法对棉浆泊黑液进行预处理 ,然后用 H2 O2 -Fe2 + 法进行催化氧化。文章研究了 H2 O2 投加量及投加方式、F e2 + 投加量、反应时间和 p H对处理效果的影响。结果表明在适宜的条件下 ,废水的 COD和色度去除率分别可达 94.1%和88% ,出水用石灰乳中和后可直接排放     

硝基苯类制药废水催化氧化降解的研究

采用超声波/Fenton试剂降解硝基苯类制药废水,研究了有关的工艺条件和硝基苯降解率的关系,并对其降解动力学规律进行了初步探讨。结果表明,降解反应的最佳工艺条件为：在常温常压下,反应时间为40 min,pH值为3,H2O2浓度和Fe2＋浓度分别为200 mmol和20 mmol/L,超声功率为400 W,硝基苯降解效率可达94%。超声/Fenton对废水的处理符合一级动力学规律,超声/Fenton缩短了反应时间,提高了降解效率,体现了协同作用的优点。     

超声-Fenton试剂联合降解水中十二烷基苯磺酸钠的研究

采用功率超声与Fenton试剂联合的新方法降解水中十二烷基苯磺酸钠(SDBS)．实验研究了超声反应时间、硫酸亚铁用量、氧化剂H202用量和初始溶液pH值等因素对降解效果的影响．结果表明：在超声波频率59kHz、功率45W、反应时间45min、溶液起始pH值3、硫酸亚铁和双氧水质量浓度分别为0．65g／L和1．2g／L的最佳降解条件下,SDBS的降解率可达80％,说明超声-Fenton试剂联合法是一种有效降解SDBS的方法．     

磁性Fe3O4颗粒与亚铁盐协同处理印染废水

应用纳米Fe3O4颗粒与Fe^2＋离子协同处理高浓度印染废水。利用磁性纳米FFe3O4颗粒的超顺磁特性，在外加磁场的作用下将磁颗粒、亚铁盐及有机物形成的混凝体迅速沉降下来，使废水得到有效的处理。实验表明，加入了磁性颗粒的废水其CODCr去除率明显高于只投加亚铁盐的废水，提高率在15％以上。实验同时研究了药剂的投加量、pH值等因素对废水处理效果的影响，并对其作用机理进行了初步探讨。