病原芽胞杆菌几丁质酶产生菌的筛选与活性鉴定

通过特异引物PCR方法和水解圈活性法对62株苏云金芽胞杆菌菌株、26株蜡状芽胞杆菌菌株及18株球形芽胞杆菌菌株进行了几丁质酶产生菌的筛选.所测苏云金芽胞杆菌中除4株野生型菌株外均为阳性结果,蜡状芽胞杆菌仅1株为阴性结果,球形芽胞杆菌全为阴性结果,且水解圈法观察结果与PCR检测结果一致.在此基础上,通过DNS比色法对几丁质酶产生菌株的几丁质酶比活力也进行了测定.对这些具有致病性的病原芽胞杆菌几丁质酶的研究对于研究其致病机理及对其进行遗传改良具有重要的理论和实际应用价值.     

一株产脂肪酶蜡状芽孢杆菌的分离鉴定

从三角湖生活用水排污口取样,利用橄榄油培养基筛选产脂肪酶菌株。革兰染色结果为革兰氏阳性杆状菌;16SrDNA序列显示,该菌为蜡状芽孢杆菌;并从生理生化特征上进一步证实了是蜡状芽孢杆菌;对其生长曲线进行了测定;其生长规律与模式菌株大肠杆菌基本相同。对蜡状芽孢杆菌脂肪酶分解不同类型油脂的能力进行了评估,该菌脂肪酶对猪油分解能力强,橄榄油及花生油次之,对牛油分解能力差。     

凝结芽胞杆菌产碱性脂肪酶的条件研究

本文对分离获得的产碱性脂肪酶的5株菌进行复筛,对产酶量大的一株菌F12进行鉴定,确定该菌株为凝结芽胞杆菌(BacillusCoagulans)。此菌产碱性脂肪酶的最适条件是:黄豆饼粉2.5,玉米浆1.5,可溶性淀粉0.5,K2HP40.5,NaNO30.5,起始pH9.0,培养温度28～30℃,培养周期22～26h。     

枯草芽胞杆菌B6-1产拮抗物质性质的研究

对枯草芽胞杆菌B6-1所产拮抗物质的一些性质进行了研究.该拮抗物质能被HCl沉淀,经高温一定时间,和在pH 3～11范围12小时以及紫外线照射30分钟活性无明显损失,且发酵液表现出溶血、油取代活性.在第一次超滤时,拮抗物质存在于截留液中,用甲醇稀释后的第二次超滤中却转入滤过液里.说明该拮抗物质可形成凝聚,但在甲醇中凝聚可被打散成单分子.结果表明,枯草芽胞杆菌B6-1所产拮抗物质中存在磨肽类抗生素.     

枯草芽胞杆菌B6—1产拮抗物质性质的研究

对枯草芽胞杆菌B6—1所产拮抗物质的一些性质进行了研究。该拮抗物质能被HCI沉淀,经高温一定时闻,和在pH3～11范围12小时以及紫外线照射30分钟活性无明显损失,且发酵液表现出溶血、油取代活性。在第一次超滤时,拮抗物质存在于截留液中,用甲酵稀释后的第二次超滤中却转入滤过液里。说明该拮抗物质可形成凝聚,但在甲酵中凝聚可被打散成单分子。结果表明,枯草芽胞杆菌B6—1所产拈抗物质中存在脂肽类抗生素。     

苏云金芽胞杆菌的研究进展

围绕国内外对苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)研究的新进展,分别从转苏云金芽胞杆菌作物的安全性、苏云金芽胞杆菌的酶学研究、苏云金芽胞杆菌的基因学研究、苏云金芽胞杆菌的蛋白质学研究四个方面进行论述,为进一步预防昆虫对苏云金芽胞杆菌植物产生抗性、防止苏云金芽胞杆菌基因飘逸、构建新型苏云金芽胞杆菌载体及生产出杀虫毒性更高、专一性更强的苏云金芽胞杆菌植物提供了新的思路.     

1株产细菌素乳杆菌的鉴定及其所产抑菌物质的特性

从分离自内蒙古传统乳制品的67株乳杆菌中筛选得到1株产细菌素的乳杆菌KLDS 1.0355。通过API 50生化反应实验和16S rDNA序列同源性分析,鉴定该菌株为短乳杆菌。应用琼脂扩散法研究了KLDS 1.0355无细胞发酵上清液的部分特性,KLDS 1.0355的无细胞发酵上清液对热（121℃,30min）和pH值（pH 2.0～10.0）稳定,可被多种蛋白酶如胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、α-糜蛋白酶和蛋白酶K失活,不能被过氧化氢酶失活,说明该抑菌物质为1种蛋白质。进一步证明了该抑菌物质的作用方式是杀菌,且抑菌谱广,可抑制多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。     

园养反刍动物梭状芽细胞杆菌病的危害及防治

介绍了太原动物园园养反刍动物感染梭状芽胞杆菌的发病情况,依据该病的临床资料和病理学检查结果,给出了该病的治疗方案和预防措施。     

地衣芽胞杆菌麦芽糖α-淀粉酶产麦芽糖特性研究

为了开发新的生产麦芽糖浆的淀粉酶,在大肠杆菌中表达了一个地衣芽胞杆菌(Bacillus lichen form is)麦芽糖α-淀粉酶,并对该酶产麦芽糖的特性进行研究.结果显示,重组酶分子大小为65 kDa,以淀粉为底物的最适温度为45℃,最适pH值为6.5.以浓度为20％的可溶性淀粉为底物,加入106U/g淀粉的地衣芽胞杆菌麦芽糖α-淀粉酶,反应48h,采用HPLC检测产物,产物中只有葡萄糖和麦芽糖,其中麦芽糖含量为52.21％,还原糖得率为72.1％;当加入1U/g淀粉的普鲁兰酶协同作用进行反应时,产物中麦芽糖的含量增加到57.16％,还原糖得率增加到92.5％.该酶在麦芽糖浆的工业生产上有较大的潜在应用价值.     

一株具有广谱抑菌活性的兵马俑芽孢杆菌HS-15的筛选及其抑菌活性研究

采用高浓度土壤菌悬液涂平板法筛选出45株具有抑菌活性的菌株;以其中一株具有较强抑菌活性的菌株为研究对象,通过细胞形态特征、生理生化实验及16S rDNA序列分析等方法,将其鉴定为兵马俑芽孢杆菌,并命名为Bacillus bingmayongensis HS-15;分别用点植法和平板对峙法检测HS-15对细菌和真菌的抑菌活性,结果发现,该菌株对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌都有较强的抑制作用,是一株广谱微生物拮抗菌;发酵条件优化结果表明,28 ℃发酵20 h时,发酵液对金黄色葡萄球菌的抑菌活性最强;经透析袋处理,抑菌活性没有变化,而胰蛋白酶和蛋白酶K处理后,抑菌活性丧失,初步推测抑菌物质为蛋白质类.本研究丰富了产抑菌活性物质微生物菌种资源库,为天然防腐剂的开发提供理论基础.     

苏芸金芽孢杆菌与蜡状芽孢杆菌基因组DNA同源性及多态性的研究

用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ扩增到６１个标准株、生产用菌株及２４个蜡状芽孢杆菌参比菌株的全ＤＮＡ指纹图,通过计算多态性扩增片段的大小,利用ＮＴＳＹＳ软件进行聚类分析,蜡状芽孢杆菌菌株并未形成独立于苏芸金芽孢杆菌的聚群,这是此近缘种ＤＮＡ分子水平高度同源的新证据．６１个苏芸金芽孢杆菌的聚类结果表明：其ＤＮＡ指纹图与Ｈ－血清型有一定相关性．与引物０９５５－０３相比,引物０９４０－１２对苏芸金芽孢杆菌不同亚种及蜡状芽孢杆菌菌株具有更高的鉴别价值,大多数特异株ＤＮＡ全指纹图有菌株特异性,证实ＲＡＰＤ－ＰＣＲ技术是苏芸金芽孢杆菌及蜡状芽孢杆菌种下分类和鉴定的简便快速有效的方法     

饲料中蜡状芽孢杆菌的分离与鉴定

从西宁市某饲料厂随机采集饲料样品70份,进行蜡状芽孢杆菌的常规分离培养与鉴定。共检出阳性菌株31株,检出率44．29％（31／70）,31株分离株的生化试验结果与蜡状芽孢杆菌完全一致,且31株分离株都具有营养要求低、生长速度快的特点。     

地衣芽胞杆菌中过表达丙酮酸羧化酶提高杆菌肽产量

拟通过过表达丙酮酸羧化酶基因pyc A,获得杆菌肽高产菌株,提高杆菌肽产量.构建pyc A基因过表达工程菌株DW2/p HY-pyc A,以p HY300plk转化菌株DW2/300为对照.经过发酵研究验证,DW2/p HY-pyc A杆菌肽效价为767. 7U/m L,比DW2/300效价提高了14. 5%,另外在发酵过程中DW2/p HY-pyc A的生物量有所提高,且胞内草酰乙酸的含量提高了18. 6%.经过对DW2/p HY-pyc A的基因相对转录水平分析后发现,DW2/p HY-pyc A中TCA循环合成酶基因的转录水平均有所增加,该结果表明在pyc A基因过表达菌株中,TCA循环的代谢较对照菌株有所提高.因此,通过过表达pyc A,可以增强TCA回补反应,进而提高草酰乙酸的含量和强化TCA循环,最终提高了杆菌肽组成氨基酸的供给,可以实现杆菌肽的高产.     

一株产伴孢晶体的霉状芽孢杆菌的研究

自济南郊区菜园土中,分离到一株产伴孢晶体的霉状芽孢杆菌。对其进行了形态、培养特征、生理生化反应、血清学反应以及 DNA 的 G+C 含量和 DNA-DNA 杂交率的试验测定。该菌有芽孢,其 DNA 中 G+C 含量为33. 9摩尔%(Tm)。由于该菌产典型的伴孢晶体,初步分析可将其归于苏芸金杆菌类(Baci-llus thuringiensis),并作为一种新亚种,命名为苏芸金杆菌霉状亚种(Baci-llus thuringiensis subsp.mycoides)。     

环状芽胞杆菌基因启动子的分离与鉴定

环状芽胞杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｉｒｃｕｌａｎｓ）总ＤＮＡ经Ｓａｕ３ＡＩ酶切后插入到启动子探针型载体ｐＳＵＰＶ１的ＢａｍＨＩ位点，转化大肠杆菌后，在卡那霉素的平板上筛选到５０个抗性菌落。从随机挑取的２９个抗住菌落所分离到的质粒ＤＮＡ经限制酶切和琼脂糖凝胶电泳后表明，各质粒均有ＤＮＡ插入片段，对２９个样品进行卡那霉素抗性试验显示，抗性最高的可超过１０００μｇ／ｍＬ这表明来自环状芽胞杆菌的某些基因启动子能在大肠杆菌中十分有效地启动基因表达，选取两个最大的克隆ＤＮＡ片段ＢＣ３和ＢＣ６作为探针与Ｂ．ｃｉｒｃｕｌａｎｓｃ－２．总ＤＮＡ作Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，均获得杂交带。斑点杂交结果表明，这两个ＤＮＡ片段来自不同的基因启动子。对ＢＣ６和ＢＣ３分别进行了限制酶谱分析，并绘制了限制酶图。     

温度和氮源对耐冷蜡状芽孢杆菌产冷适蛋白酶的影响

对影响耐冷蜡状芽孢杆菌SYP-A2-3合成冷适蛋白酶的主要因素进行了研究，主要包括培养温度对产酶水平和产酶周期的的影响、不同相对分子质量分布的酪蛋白水解物对菌体细胞诱导产酶的差异以及菌体芽孢形成过程与产酶过程的关系等．结果表明通过采取前高后低的变温培养策略可以使菌体在发酵初期快速增殖，从而提高冷适蛋白酶的产量，粗料氮源预水解可增加相对分子质量较低的氮源水平，能提高前期的菌体产量．研究认为，在产酶期间应保持低分子量氮源的低速释放，使诱导作用得到持续加强并减缓代谢阻遏作用，避免芽孢的快速形成，实现产酶期的延长．     

蜡状芽孢杆菌SY对镉的吸附机制

 从沈阳张士开发区附近的受镉污染土壤中筛选出1株高耐镉性菌株SY,经形态学观察和生理生化鉴定及16SrDNA序列分析,鉴定SY为蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）。SY在吸附镉的过程中,伴随着K+、Ca2+、Na+、Mg2+等阳离子的大量释放,同时解吸率也随pH值的改变而改变。利用扫描电镜、能谱及红外光谱分析SY吸附镉前后的细胞微观形貌、元素含量变化和官能团的改变,结果表明,吸附后SY的表面基团本身没有改变,只是基团的特征吸收带位置、强度和宽度都发生了一定的变化。静电吸附、离子交换作用、表面配合作用是SY对镉的吸附过程中最主要的途径。对吸附机制的研究为生物吸附法处理重金属并在实际生产中加以利用提供了理论基础。     

一株贝莱斯芽孢杆菌的生长特性及抑菌活性研究

从自然发酵海洋鱼酱油中分离得到了一株具有多种蛋白酶活性与糖酶活性的贝莱斯芽孢杆菌SW5菌株,为探究贝莱斯芽孢杆菌SW5的抑菌特性,研究了SW5菌株的生长及生理生化特性,验证了SW5菌株发酵上清液对食品中多种常见病原菌的抑制能力;并利用液相色谱-质谱联用技术鉴定了其中的抑菌物质。结果表明:菌株SW5在35℃、pH值5时生长最快,对于亚胺培南、头孢曲松等β-内酰胺类抗生素敏感。菌株SW5的发酵上清液具有明显的抑菌活性,上清液经过浓缩后抑菌效果显著增强。TOF-MS分析表明,发酵上清液中含有的抑菌物质为表面活性素、山茱萸苷A、氨基糖苷类抗生素庆大霉素与异帕米星、链霉菌素类抗生素达福普丁。研究结果以期为菌株SW5的进一步开发利用提供一定的理论基础。