水溶性大分子修饰~(125)I-尿激酶在小白鼠体内的分布及代谢

本文用放射性同位素~(125)Ⅰ示踪方法对比研究了水溶性大分子修饰酶与天然酶在小白鼠体内的滞留率;通过对标记物在各脏器中的分布及代谢的研究,对修饰酶的性质及临床应用前景做出了判断。 实验结果表明;右旋糖酐及右旋糖酐磺酸酯修饰了的尿激酶明显地延长了它们在血液中的停留时间;尿激酶进入体内后,主要分布于肝及肾脏中,脾、肺及心脏中分布很少;修饰酶与天然酶在肝及肾中的变化很不一致,天然酶在其主要排泄器官肾中分布较高,而修饰酶在肝中的分布则略高于天然酶。     

尿激酶化学修饰的研究(Ⅱ)——肝素对尿激酶的共价修饰

本文报导了肝素对尿激酶侧链氨基的化学修饰作用,並对修饰酶与天然尿激酶的某些性质进行了对比研究。结果清楚地表明,酶的化学修饰作用增强了抗酸、碱能力和抵抗稀释溶液中酶变性失活的能力;提高了酶的抗胃蛋白酶水解的能力。因此,我们认为修饰尿激酶比天然酶具有更广泛的临床应用价值。     

天然与修饰超氧化物歧化酶某些物化性质的比较

本文对天然与月桂酸修饰的超氧化物歧化酶的某些物化性质进行了比较，结果表明，修饰酶较天然酶的稳定性显著增加，且保留了天然酶的大部分活性，具有广泛的应用前景。     

化学修饰弹性蛋白酶稳定性的研究

本文用高碘酸活化右旋糖酐对弹性蛋白酶进行共价修饰。结果表明,修饰酶不仅完全保留了天然酶的活性和抗胰蛋白酶水解能力,而且修饰酶在耐热性、耐酸性和抗胃蛋白酶水解能力上都明显地优于天然酶。本文还对修饰酶进行了某些光谱学特性的研究。     

用微机作修饰尿激酶在小鼠体内分布代谢的统计

药物研究经常要作药代动力学实验,实验所得的大量数据需进行统计学处理,这是一件繁重的工作。本文以高碘酸活化肝素修饰的尿激酶和天然尿激酶在小鼠血液、肝、肾中的分布代谢为例,设计了计算机程序,用IBM—PC微机对实验数据作统计处理,不仅提高了工作效率、节省了时间,而且保证了准确性。     

右旋糖酐对胰岛素共价修饰的研究

本文报导了用高碘酸活化右旋糖酐对胰岛素的化学修饰作用,对比研究了修饰胰岛素与天然胰岛素的某些性质,及其在小鼠体内的分布与代谢。实验结果表明,修饰胰岛素较天然胰岛素的降血糖活性明显提高,增强了热稳定性和抗蛋白水解酶降解能力,修饰胰岛素在其靶器官肝脏中分布显著提高,而在其排泄器官肾脏中的分布低于天然胰岛素,并且明显延长了在体内的作用时间。     

猪血超氧化物歧化酶的研究(Ⅱ)——右旋糖苷对猪血超氧化物歧化酶的共价修饰

用高碘酸钠活化右旋糖苷,对猪血超氧化物歧化酶进行共价修饰,修饰酶完全保留了天然酶的酶学特性和抗胰蛋白酶水解的能力,而且修饰酶的热稳定性明显提高。     

福建部分海藻凝集素的检测

用天然和经酶修饰的绵羊、兔、鸡，以及人的Ａ型、Ｂ型、ＡＢ型和Ｏ型７种红细胞，对产于福建的１６种海藻（绿藻１种、红藻８种、褐藻７种）进行了凝集素的检测．实验结果表明，每种海藻提取液至少能凝集２种以上天然或经酶修饰的红细胞。在检测的１６种海藻中，褐藻门的铁钉菜、厚网藻和绿藻门的浒苔产生的阳性凝血结果最广泛，能凝集供试的７种天然或经酶修饰的红细胞．红藻门的粗枝软骨藻、褐藻门的扁铁钉、鼠尾藻的凝血能力最差，只能凝集２或３种天然或经酶修饰的红细胞。在７种红细胞中，绵羊血红细胞对海藻凝集素最敏感。各种类型的红细胞经酶（胰蛋白酶）修饰后，对凝集素的敏感性普遍增加（鸡红细胞对几种海藻例外）。     

壳聚糖及其衍生物的修饰对pH敏感型PLGA微粒性质及其在巨噬细胞内分布的影响

研究了壳聚糖及其衍生物的修饰对pH敏感型聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)微粒性质及其在巨噬细胞中分布的影响.通过微孔膜乳化技术与复乳溶剂挥发法相结合制备了壳聚糖及其衍生物修饰的pH敏感型PLGA微粒,用单因素法对pH敏感型PLGA微粒的制备工艺进行了优化,以Bradford protein assay法测定微粒的蛋白含量,用扫描电子显微镜观察了微粒的形态结构,用马尔文粒径仪测定了微粒的粒径和zeta电位,用台盼蓝染色法测定了微粒的细胞毒性,并利用荧光标记法确定了微粒在巨噬细胞内的分布.结果发现,4种微粒粒径为1 000～1 200 nm;壳聚糖及其衍生物修饰后的微粒包封率明显上升,zeta电位显著升高,壳聚糖修饰的微粒主要分布在细胞质,而未被修饰的微粒主要分布在溶酶体内.     

青霉素酰化酶研究——Ⅱ.酶的修饰和修饰酶的性质

本文介绍用β-硫酸酯乙砜基苯胺(SESA)活化右旋糖酐T2000以修饰大肠杆菌5852青霉素酰化酶。活化时500mg右旋糖酐需SESA 20mg。制备对氨基苯磺酰乙基葡聚糖(ABSE)-右旋糖酐的反应温度为80℃,与500mg活化右旋糖酐偶联的酰化酶酶量为100u,修饰率达88.3%。用琼脂糖(Sepharose 4B)或交联葡聚糖(Sephadex G150)柱层析分离得高分子量的修饰酶。修饰酶对热和pH的稳定性均优于自由酶,最适温度提高,但最适pH和高浓度青霉素G底物抑制现象没有改变。     

僧帽牡蛎碱性磷酸酶功能基团的研究

采用化学修饰法研究僧帽牡蛎碱性磷酸酶活性功能基团性质.酶经0.4mmol·L-1PCMB修饰30min后活力仍然保持不变,提示巯基与酶的活力无关;用二巯基苏糖醇(DTT)对酶进行修饰,当DTT浓度达到2.5mmol·L-1时,酶活力丧失98%,表明硫 硫键与酶活力有密切的关系;以N 溴代琥珀酰亚胺(NBS)修饰酶的色氨酸残基,酶的修饰失活呈一级反应,当NBS浓度达到0.65mmol·L-1时,酶活力丧失100%,并辅以紫外吸收光谱的变化分析,表明色氨酸残基是酶催化活力所必需的;醋酸酐、马来酸酐、甲醛等氨基试剂对酶的修饰作用显示氨基是酶的必需基团.     

基于铁蛋白的溶栓蛋白纳米粒子的构建及活性分析

将凝血酶激活的低分子量单链尿激酶型纤溶酶原激活剂(T-uPA)修饰铁蛋白重链亚基(FTH1),构建基于铁蛋白的溶栓蛋白纳米粒子。通过基因工程、体外混合复性等技术,将T-uPA分别修饰FTH1的N和C端并进行对比,表明仅C端融合蛋白才可复性折叠并组装成FTH1/FTH1-T-uPA。通过实验分析,表明FTH1/FTH1-T-uPA基本为中空笼状且分散均匀,粒径为13.41 nm,水合粒径为24.2 nm,T-uPA可成功被凝血酶激活,具有优良的纤维蛋白溶解活性(约1 200 IU/mg);在体外达到与商品化尿激酶相似的溶栓效果,且具有更好的安全性。本研究成功解决了T-uPA修饰铁蛋白的关键问题,为构建靶向型的铁蛋白纳米粒子载药系统提供了基础。     

硅胶柱层析粗提尿激酶的方法与分析

采用40—60目氧化硅胶作吸附剂,通过色谱层析和硫酸铵盐析分离提取了尿激酶(UK),并对粗品中酶的活力进行了测定,为45IU/ml,同时对蛋白质组分进行了SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析。电泳结果显示11条区带,其中1～2条着色较深的区带与标准尿激酶(比活13万/mg蛋白)的区带的迁移率基本相同。表明选用40—60目硅胶粗提尿激酶具有较好的吸附和分离效果。     

金纳米颗粒修饰酶生物电极检测亚硝酸盐

制备了一种新型的金纳米颗粒修饰的酶生物电极,用于电化学定量分析检测亚硝酸盐。将碳纸(CP)作为基底,以金纳米颗粒(Au NPs)作为基底修饰材料,通过聚多巴胺(PDA)的媒介作用将细胞色素C还原酶(CcR)固定在Au NPs修饰的CP电极表面来制备酶生物电极。通过扫描电子显微镜(SEM)、X射线能谱仪(EDS)、电化学阻抗谱(EIS)对电极的表面形貌、元素组成和电化学性能进行了表征分析。通过CcR对亚硝酸盐的特异性识别及催化作用实现了亚硝酸盐的电化学检测。实验结果表明:CcR/PDA/Au NPs/CP酶生物电极被成功制备,Au NPs的修饰和PDA的媒介作用可以保持CcR的高反应活性并提高电极的稳定性。制备的酶生物电极具有良好的催化活性,电极的还原峰电流密度与较宽浓度范围内的亚硝酸盐(10 mM～100 mM)有着良好的线性关系,线性相关系数为0.998,检测限为2.006 mM(S/N=3),成功实现对亚硝酸盐的检测。     

不同组蛋白修饰以及修饰与修饰酶之间的关系

核小体是染色质的基本结构单位,核小体组蛋白尾部可以发生甲基化、乙酰化等多种共价修饰.以含有组蛋白修饰酶的修饰数据库为基础,借助网络研究了一些修饰之间以及与修饰酶之间的关联关系,同时从相关修饰酶及其复合物的角度分析了这些关联.结果显示部分修饰之间或与相关修饰酶之间存在直接的关联关系.包含修饰酶的酶复合物可以通过自身的蛋白结构域与甲基化或者乙酰化修饰结合,进一步利用自身的修饰酶亚基催化其它组蛋白修饰,从而使得两种组蛋白修饰之间建立关联.     

腺苷化酶的研究进展

腺苷化修饰(AMPylation)是一种由腺苷化酶(AMPylators)催化的翻译后修饰.腺苷化酶是一类催化底物蛋白的某些残基侧链共价结合(或去除)一磷酸腺苷(adenosine 5’-monophosphate,AMP)的酶.腺苷化酶主要属于Fido结构域超家族和类DNA聚合酶家族(DNA-polymerase-β-like family).致病菌表达腺苷化酶调控宿主细胞的信号机制,达到利于致病菌繁殖和生存的目的.真核生物中也存在一些腺苷化酶参与感知和调控细胞应激.从腺苷化酶的分类、催化机理、调控方式和去腺苷化修饰活性等方面综述了腺苷化酶的研究进展.     

文昌鱼酸性磷酸酯酶色氨酸残基的修饰

从厦门文昌鱼(Branchiostonia belcheri Gary)分离纯化获得聚丙烯酰胺胶电泳单一蛋白区带的酸性磷酸酯酶(EC3.1,3.2)应用化学修饰方法,荧光以及紫外-可见光谱的变化,探讨Trp残基与酶活力的关系,被NBS修饰的Trp基团仅有一个Trp残基被氧化时,酶活力丧失90％,该Trp残基为ACPase表现活力所必需,而且优先被氧化、从光谱扫描(230～600nm)结果表明,经NBS修饰以后的酶构象发生变化,文昌鱼ACPase的Trp残基和酶分子上的铁离子等基团均为酶活力的必需基团,推测两者可能以配位结合,共同维持酶活力中心的构象。     

SDS对焙烧沸石物化性质和除氨氮效果的影响

为了研究十二烷基硫酸钠(SDS)修饰对焙烧沸石物化性质和去除二级出水中氨氮效果的影响,对天然沸石进行了SDS修饰、焙烧改造处理.实验结果表明,SDS修饰可以大大提高焙烧沸石的脱氮效果.在SDS最佳修饰焙烧条件下,氨氮去除率可达98.79%,与不修饰相比,氨氮去除率提高近30%.通过对改性后沸石扫描电镜(SEM)和能谱图分析(EDS),X射线衍射分析(XRD)、比表面积与孔径分析、红外光谱图分析(IR)、离子交换容量(CEC)等表征手段分析发现,SDS的修饰使得焙烧沸石表面更加松散,出现了更多的孔道,沸石孔容积和孔径也有增加,Na离子含量增加,硅铝比减少,主衍射峰强度减弱,沸石内部化学基团发生变化,离子交换容量增加.     

PGA在含环氧活性基的多孔高聚物载体上的固定化及修饰

研究了青霉素G酰化酶(PGA)在含环氧活性基的多孔高聚物载体上的固定化及修饰,优化固定化条件为1 mol/L,pH 8.0的磷酸钾缓冲体系,每克载体(湿重)投酶量为500~550 U,30℃下150 r/min固定化36~48 h,得到的固定化酶表观酶活为每克载体(湿重)177 U,表观酶活回收率35%。固定化酶经巯基乙醇修饰后提高了热稳定性。固定化酶水解青霉素G的最适pH为9.0,最适温度为47℃,在pH 4~9,40℃以下稳定。固定化酶的各项性能均优于游离酶。     

超氧化物歧化酶经谷胱甘肽和Y型聚乙二醇共修饰后的性质研究

使用谷胱甘肽(GSH)和40ku-Y型聚乙二醇(PEG)作为修饰剂,对超氧化物歧化酶(SOD)进行2次修饰,获得了GSH和PEG共修饰的超氧化物歧化酶(PEG-GSOD).分别测定PEG-GSOD与普通SOD的热稳定性、抗胰酶稳定性、抗变性剂稳定性等,并进行比较研究,结果显示:PEG-GSOD比普通SOD(没有修饰的)在热、抗胰酶、抗变性剂等方面的稳定性均有明显提高;通过新西兰兔的体内实验,将PEG-GSOD和普通SOD分别对新西兰兔静脉注射,普通SOD注射0.5h后,SOD酶活性降低至0,而PEG及GSH联合修饰的PEG-GSOD,注射48h后,血浆SOD活性检测还保留约75%,注射72h后,酶活力保留约40%,测得PEG-GSOD在新西兰兔体内半衰期约为50h.此结果说明,PEG-GSOD,其在体内的半衰期显著延长,稳定更好,该研究为SOD药物的应用奠定了基础.