人脂肪来源干细胞在模拟微重力环境中的生长特性

种子细胞体外的规模化扩增和结构、功能的维护是组织工程化组织构建的关键环节．多项研究显示三维模拟微重力环境对细胞的培养、自我更新、形态功能等生物学特性的维护非常有利．文中利用旋转式细胞培养系统（RCCS）结合微载体培养技术对人脂肪组织来源干细胞（hADSCs）进行了规模化培养的初步探索．通过细胞增殖曲线、染色体核型、流式细胞仪分析和分化能力等检测表明FACT Ⅲ微载体与hADSCs具有理想的生物相容性，在模拟微重力环境条件下，细胞在其表面生长并分泌大量细胞外基质，使得培养的细胞更好地维持其增殖、分化等基本生物学特性．该实验研究为组织工程种子细胞的培养及该过程中细胞功能老化、凋亡等问题的解决提供一定的理论支持和技术思路．     

肝脏干细胞的来源与潜能

肝干细胞是肝脏内具有自我更新能力和多分化潜能的细胞,包括卵圆细胞、小型肝细胞和小肝细胞样前体细胞.其中,卵圆细胞可能来源于胚胎干细胞和/或骨髓干细胞.肝干细胞能分化为肝实质细胞和胆管上皮细胞,在一定条件下,还能分化为胰腺细胞、肠上皮细胞、肌细胞或转化为肝肿瘤细胞.     

人脂肪来源的干细胞体外培养特性及分化为肝细胞样细胞的研究

肝脏组织工程的兴起和不断发展使各种急慢性肝病得到彻底的治愈成为可能.而肝脏组织工程的发展很大程度上受制于种子细胞的来源不足.为了寻找理想的肝脏组织工程种子细胞，本实验从吸脂术所得的脂肪抽吸液中分离出干细胞，利用流式细胞仪、染色体核型分析等方法对其生长特性、表面标志及生长的稳定性作了分析；用含有肝细胞生长因子（HGF）和成纤维细胞生长因子（FGF-4）的条件培养基将其向肝细胞样细胞诱导分化，并利用RT-PCR及免疫荧光的方法检测了分化后细胞的标志物CK18，甲胎蛋白（AFP）和白蛋白以及分化后细胞的功能.结果显示，脂肪来源的干细胞不仅有良好的生物学稳定性，而且分化后的细胞表达了肝细胞的标志物且具有一定的肝细胞的功能.这为解决肝脏组织工程种子细胞来源的问题提供了可能.     

mTOR在人脂肪源间充质干细胞成脂中的作用

通过探讨mTOR对hADSCs成脂的影响,为脂肪分化异常所致疾病的预防和治疗提供参考.针对通过吸脂术所抽取的人腹部脂肪组织,利用Ⅰ型胶原酶消化分离培养hADSCs,三联诱导法使其向脂肪细胞分化,油红O染色鉴定.通过免疫细胞化学染色法检测mTOR在细胞内的分布变化;观察雷帕霉素抑制mTOR后hADSCs成脂能力的变化,即油红O染色及PPARγ的表达.结果表明,所分离细胞为平行排列、生长形态相对均一的梭形细胞.三联诱导法诱导7d后可见脂滴的出现,油红O染色着红色.mTOR的分布在分化过程中由核内转向胞浆.雷帕霉素处理细胞使细胞内脂滴的蓄积显著减少、PPARγ表达降低.雷帕霉素抑制mTOR表达可降低hADSCs的成脂能力.     

蒙古羊脂肪来源间充质干细胞的分离培养及体外分化诱导

建立蒙古羊脂肪间充质干细胞（Adipose-derived mesenchymal stem ceils,ADSCs）体外分离培养方法,并对其生物学特性和多向分化潜能进行鉴定。利用I型胶原酶将蒙古羊脂肪组织消化后,离心得到单核细胞,并进行传代培养,测定其倍增时间。采用甲苯胺蓝染色和PAS染色法以及RT-PCR法,分别从组织学水平和基因水平对第3代蒙古羊ADSCs向成神经和成心肌的诱导分化情况进行鉴定。结果显示,分离得到的脂肪间充质干细胞大小较为均匀,呈梭形或星形的成纤维细胞样;传代接种后第4天细胞进入指数生长期,第8天进入平台期,前10代ADSCs的倍增时间平均为34．1h;经成神经诱导后,细胞呈胶质细胞状,RT-PCR检测EN02和GFAP基因表达呈阳性;心肌诱导后,细胞体积增大,多呈长梭形,平行排列,诱导15d后部分细胞可见类肌管样结构,PAS染色可见明显的糖原沉积,RT-PCR检测NKX2．5和GATA-4基因表达呈阳性。表明获得的蒙古羊ADSCs具有多向分化潜能。     

小鼠孤雌生殖胚胎干细胞的分离及分化潜能研究

用免疫外科法从小鼠孤雌生殖胚胎分离胚胎干细胞,并研究了其在体内、体外的分化潜能．结果发现:从小鼠孤雌生殖的胚胎中可分离出胚胎干细胞(pES),可以传代培养25代,能表达很强的碱性磷酸酶,核型稳定呈40XX．培养至第18代的pES在体内可诱导肿瘤形成,并可分化为三个胚层的组织细胞．免疫组化结果显示:神经细胞特异性烯醇化酶（NSE）、肌肉特异性肌动蛋白?-actin均呈阳性,表明分离培养的pES在体内可至少分化为来自外胚层和中胚层的组织细胞．传至第20～24代的pES细胞,经体外定向诱导分化,可定向分化为节律性收缩的心肌细胞及神经细胞．免疫组化检测显示节律性收缩的心肌细胞表达?-actin,而神经细胞表达NSE．结果表明:利用免疫外科法可从孤雌生殖的小鼠胚胎建立pES,这些pES在体内、体外都具有分化为多种类型细胞的潜能．     

人生长激素基因转化的小鼠胚胎干细胞特性的研究

报道了携带人生长激素基因（ｈＧＨ）的逆转录病毒载体ｐＩＮＳ－ＧＨ导入小鼠胚胎干细胞（ＥＳ细胞）ＣＣＥ后，虽然用放射免疫法未检测到ｈＧＨ基因的表达，但是，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交的结果表明，ｈＧＨ基因的确已经整合到细胞基因组中。对转化的ＥＳ细胞克隆进行了体内外分化能力及嵌合能力的检验，结果表明，经过一系列体外操作的ＥＳ细胞，仍具有分化成多种细胞类型的能力。转化的ＥＳ细胞通过显微注射注入囊胚后，能参与受体     

脂肪来源干细胞分化潜能的现状研究

与骨髓间充质干细胞一样,来源于中胚层的脂肪,亦具有多向分化潜能,其内含有大量能自我更新和向多系分化潜能的细胞群称为脂肪来源干细胞。其取材方便,来源丰富,可在体外稳定增殖传代。并与骨髓间充质干细胞有相似的多向分化表面标志CD105、STRO-1以及CD166受体。研究发现它具有向多系分化潜能,除可以分化为间充质来源的脂肪、骨、软骨、脂肪以及骨骼肌、心肌等细胞,在特殊的环境条件诱导下,可向神经细胞分化,用以修复骨、软骨、心肌、骨骼肌、血管以及神经等组织。因而,脂肪来源干细胞有望成为组织工程、细胞治疗以及基因转染良好的种子细胞。     

长白猪骨髓和脂肪间充质干细胞复制性衰老过程中生物学特性和抗氧化损伤能力的比较

为研究对比长白猪骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)和脂肪间充质干细胞(adiposederivedmesenchymalstemcells,AMSCs)在体外衰老过程中的生物学特性和抗氧化损伤能力,分别利用贴壁筛选法、Ⅰ型胶原酶消化法分离获得BMSCs和AMSCs,利用流式细胞术鉴定细胞,EdU检测细胞增殖能力,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测基因表达,β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-gal)染色检测细胞衰老情况,油红O和茜素红染色检测细胞的成脂和成骨分化能力,TUNEL检测细胞的凋亡情况．分离的BMSCs和AMSCs均高表达CD44和CD90,不表达CD45和CD34．与AMSCs相比,P8代BMSCs增殖能力强,OCT4和Ki67表达高,β-gal阳性细胞数少,成骨分化能力高．但在成脂分化能力方面,AMSCs强于BMSCs．进一步发现H2O2处理P8代细胞时,AMSCs比BMSCs对氧化损伤更敏感,细胞凋亡率显著增加,究其原因可能与抗氧化损伤基因表达的显著降低有关．     

大鼠骨髓间充质干细胞的分离及分化潜能鉴定

用全骨髓贴壁法从SD大鼠骨髓中分离骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BM-MSCs)。为鉴定其成骨分化潜能,将大鼠BM-MSCs进行成骨诱导培养,第7天用碱性磷酸酶染色显示有碱性磷酸酶阳性细胞,第21天进行茜素红染色有矿化骨节形成。为鉴定其成脂分化潜能,将大鼠BM-MSCs先在成脂诱导培养基中培养,再换为在成脂肪维持培养基中培养,第10天进行油红O染色有脂滴形成。表明从SD大鼠骨髓中成功分离得到具有多向分化潜能的大鼠BM-MSCs,为其作为种子细胞应用于临床或研究奠定基础。     

脂肪来源的间充质干细胞分离方法的改进

目的:从供体年龄、取材部位、提取方法3方面来研究稳定的脂肪间充质干细胞(ADMSCs)分离提取方法.方法: 从兔颈背部皮下、肌间以及腹股沟皮下的脂肪组织取材,分别采用一次消化收集法和多次消化收集法分离提取ADMSCs,单层传代培养.分别比较不同提取方法,老年兔、壮年兔与幼年兔,同一供体不同部位的脂肪组织,所分离的ADMSCs产量和生物学特性.结果: 运用多次消化收集法能从脂肪组织中稳定分离出生长旺盛的ADMSCs,与一次消化收集法相比能显著提高所获取的的细胞产量.从老年兔、壮年兔、幼年兔以及同一供体的不同部位脂肪组织中所提取的ADMSCs生长增殖活性无明显差异,但从单位体积脂肪组织提取得到的ADMSCs产量显著不同.结论: 多次消化收集法能显著提高分离获得的ADMSCs产量,是对传统的一次消化收集法的改进.选择不同供体年龄和取材部位提取ADMSCs,对细胞的生物学活性影响不大,但对细胞产量有明显影响.     

In vitro differentiation of human adipose-derived mesenchymal stem cells into endothelial-like cells

The neovascularization of ischemic tissue is a crucial initial step for the functional rehabilitation and wound healing. However, there is lack of a potential source of cells for the foundation of a vascular network. The re- cent studies indicate that hum…     

原儿茶酸促进人脂肪干细胞体外迁移研究

研究了益智仁中提取的原儿茶酸对人脂肪干细胞(hADSCs)体外迁移的影响.实验采用明胶包被的Transwell细胞培养池,观察到适宜浓度的原儿茶酸可显著促进人脂肪干细胞体外迁移,其作用呈现明显剂量依赖性.同时,1.5 mmol/L原儿茶酸促进hADSCs迁移的作用最强且呈现时间依赖性.RT-PCR和荧光定量PCR结果显示,经原儿茶酸处理后,人脂肪干细胞膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)的表达明显升高.酶谱分析发现,经原儿茶酸处理后,干细胞的活性型基质金属蛋白酶-2(MMP-2)增加.抗体阻断实验显示,细胞迁移能力的增强与MT1-MMP的表达升高和MMP-2的活化增强有关.最后,人脂肪干细胞鉴定结果表明,经原儿茶酸处理后的人脂肪干细胞仍保持间充质干细胞多分化潜能的特性.因此,原儿茶酸有可能在脂肪干细胞移植的治疗中发挥作用.     

RhoGTPases in stem cells

RhoGTPases are small molecules that control a wide variety of signal transduction pathways. Their profound function in regulating the actin cytoskeleton is well recognized. Stem cells are unique in their ability to self-renew and produce progenitor cells that can differentiate into specialized cells. RhoGTPases influence stem cell morphology and cell migration as well as stem cell self-renewal, proliferation, transplantation, homing and differentiation. In this review, the multiple roles of the RhoGTPases in stem cells are discussed.     

家禽胚胎干细胞的研究进展

阐述了干细胞及胚胎干细胞的概念，它的发展历程，着重讨论了家禽胚胎发育的特点以及家禽胚胎干细胞的分离与体外培养方法及应用前景，将来的发展方向。     

壳聚糖-胶原基可注射水凝胶制备及生物相容性检测

制备了可注射的新型温敏性壳聚糖-甘油磷酸钠-胶原（chitosan-glycerophosphate-collagen,C-GP-Co）水凝胶并检测了其与脂肪间充质干细胞（adipose tissue-derived stem cells,ADSCs）的生物相容性．首先将体积分数2．2％的壳聚糖溶液与质量分数50％的B．甘油磷酸钠溶液按一定比例混合后,将2mg／mL胶原溶液加入上述溶液中混合得到壳聚糖-甘油磷酸钠-胶原水凝胶;随后用扫描电镜观察其微观结构,测定了37℃时的成胶时间并测量水凝胶中提取培养基的渗透压;最后将分离、培养和免疫表型鉴定后的ADSCs接种在C-GP—Co水凝胶中培养,倒置显微镜下观察细胞的生长形态,并用Live／Dead Viability-Cytotoxieity试剂盒染色观察细胞凋亡状况,CCK-8试剂盒测定细胞增殖情况．结果表明C—GP—Co水凝胶37℃的成胶时间为12min,水凝胶内部呈海绵状多孔结构,水凝胶中提取培养基的渗透压为310-330mmol／kg．培养7d后,C-GP-Co水凝胶表面的ADSCs贴壁生长,并显示出良好的细胞活性．上述结果表明制备的C-GP-Co水凝胶具有良好的细胞相容性,可作为ADSCs生长增殖的良好支架．     

Induced pluripotent stem cell (iPS) technology: promises and challenges

In 2006, an article published in Cell by Shinya Yamanaka took by surprise the stem cell research community. By performing systematic retroviral transduction of factors enriched in embryonic stem (ES) cells, the authors demonstrated the reprogramming of mouse fibroblasts into an ES cell-like state. These cells, baptized iPS (induced pluripotent stem) cells, were immediately recognized as a ground-breaking discovery. Subsequently, the same authors and other groups reported a similar achievement with human fibroblasts. Two years later, the number of top quality papers on iPS is astonishing, and interest in the scientific community has risen to a fever pitch. But although iPS has the potential to revolutionize Regenerative Medicine, important questions still remain unanswered. Work from multiple laboratories worldwide including ours is focused on deciphering the molecular mechanisms of iPS, and trying to improve the technique to make it suitable for the clinic. In this review article we briefly discuss the past, present and future of iPS, with emphasis on urgent issues to be solved. Supported by the National Nature Science Foundation of China (Grant Nos. 30725012, 30630039 and 90813033), Knowledge Innovation Project of Chinese Academy of Sciences (Grant No. KSCX2-YW-R-48), National Key Basic Research and Development Program of China (Grant Nos. 2006CB701504, 2006CB943600, 2007CB948002, 2007CB947804. 2007CB947900) and Guangzhou Science and Technology Development Funds (Grant No. 2008A1-E4011)     

印楝茎尖组织培养的研究

印楝是世界公认的能提炼无公害生物农药的优良植物.对印楝茎尖组织培养与快速繁殖技术研究,可最大限度保持母株优良特性,为实现印楝优良无性系工厂化育苗打下坚实基础.     

精原干细胞体外培养的方法改进

探讨精原干细胞体外培养优化方法,为进一步探讨其生物特征、生殖干细胞移植及生殖损伤及药物保护等研究提供实验基础.制备骨髓基质饲养层,将生后5 d~7 d雄性小鼠生精细胞接种在饲养层上,并于IMDM培养基及37 ℃下共培养,在倒置显微镜下观察细胞生长行为,并对培养后的细胞进行组织学、细胞化学、免疫组化、遗传学鉴定.精原干细胞能在以骨髓基质细胞饲养层上进行增殖和生长,且增殖后的表现出呈簇、团状生长,细胞间可表现出明显的胞质间桥,细胞核大,核/质比高,碱性磷酸酶及C-KIT受体阳性,染色体核型为20对(40条)等精原干细胞的生物学行为特征.原代培养的骨髓基质细胞作饲养层具有取材及制作简便等优点,且能在不添加外源性生长因子的前提下能通过自分泌足够的细胞生长因子,满足精原干细胞体外增殖和抑制分化的需要,是精原干细胞培养的一种良好的饲养层.IMDM培养基、血清及适宜的环境温度是精原干细胞体外培养的重要条件.