蘑菇基肥中真菌多样性的研究

应用18S rDNA同源性分析和常规微生物培养方法,对蘑菇基肥中的真菌种群进行了研究.采用纯培养技术分离基肥中的真菌,机械破壁法提取分离真菌总DNA,真菌特异引物对EF4/EF3 扩增18S rDNA,并进行测序及序列相似性比较,结果表明:纯培养技术分离自基肥中的真菌种属较少,从11株分离菌中只鉴定获得2株不同真菌Chaetomium elatum和Penicillium expansum.18S rDNA部分片段2次聚合酶链反应(PCR)扩增及温度梯度凝胶电泳(TGGE)分析结果表明:不同时间取自同一地点的原始蘑菇基肥样本中的真菌种群结构要比纯培养技术的分析结果复杂得多.研究结果表明,TGGE分析与高效自动测序技术结合将为生物技术和应用微生物生态过程提供一分子研究方法.     

一株短小芽孢杆菌的16S rDNA基因序列分析

从黄颡鱼中分离得到一株优势菌BP-1,经过形态观察、生理生化试验和16S rDNA基因序列分析,表明该菌为发酵型,能运动,革兰氏阳性杆菌.获得的16S rDNA基因序列长度为1478 bp,Gen Bank数据库中登录号为KP299290.该序列与GenBank数据库中多条短小芽孢杆菌16S rDNA基因序列相似性高达99%,系统进化树上与短小芽孢杆菌亲缘关系最近,从而判定菌株BP-1为短小芽孢杆菌.这为短小芽孢杆菌的鉴定和分类提供科学依据.     

具有AHL降解能力的海洋微生物的筛选与鉴定

以紫色视杆菌Chromobacterium violaceum 026为报告菌株,以己酰基高丝氨酸内酯作为菌株生长的唯一碳源及能源,通过富集培养、分离纯化,从西南印度洋海泥中筛选得到2株菌S2和S3。检测结果表明,S2、S3可能具有胞内AHL降解酶活性。形态鉴定和16S rDNA序列分析表明,2株菌均为芽孢杆菌属。系统发育分析表明,菌株S2、S3与Bacillus amyloliquefaciens的亲缘关系最近。     

DS 9701菌株的紫外诱变及PHB解聚酶高产菌株的筛选

以青霉(Penicillium.sp)DS 9701为出发菌株,通过紫外线诱变分生孢子,采用透明圈初筛和摇瓶培养复筛的方法,获得一突变株,编号DS 9701-M 09.该突变株的PHB解聚酶活力是原始菌株的2.3倍,经传代培养,该菌株的PHB解聚酶高产特性稳定遗传.     

一株拮抗姜瘟青枯劳尔氏菌的泛菌的分离及鉴定

从生姜田土中分离到一株对姜瘟青枯劳尔氏菌(Ralstonia solanacarum)有强拮抗作用的泛菌菌株Q6,对该菌株进行了形态特征、培养特征、生理生化特征的鉴定及16S rDNA 序列的分析.以16S rDNA序列为基础构建了包括12 株相关种属细菌在内的系统发育树,其中与11个泛菌属的菌株的16S rDNA序列的同源性为95.54%～99%.     

丙酸测定与丙酸高产菌的筛选、鉴定

采用表观筛选与丙酸HPLC测定方法,从富含丙酸菌与乳酸菌的奶酪中分离、筛选得到1株高产丙酸的菌株FS1026。对该菌株进行16S rDNA序列分析,构建相关序列进化树,鉴定该菌株为产酸丙酸杆菌(Propionibacterium acidipropionici sp.)     

灰黄霉素的研究进展

灰黄霉素(Griseofulvin)是从灰黄青霉(Penicillium griseofulvin)培养液中得到的一种含氯代谢产物,是一种非多烯类的抗真菌抗生素.我国目前投产的灰黄霉素产生菌的发酵单位已达世界领先水平,而且使用原料简单,产品成本低,在国际市场上有很强的竟争力.概述了灰黄霉素的研究与应用进展,包括通过耐前体变株的筛选可获得灰黄霉素高产株;培养基中氯化物无机盐对该化合物的代谢有较重要的影响;采用超声波技术进行提取可缩短提取时间,提高提取率;由于灰黄霉素的溶解度很低,可对灰黄霉素的超细化处理做成喷雾剂或缓释药物.灰黄霉素不仅是一种普遍应用于临床治疗皮肤和角质层真菌感染的抗生素,而且在农业植物保护方面有着良好的应用前景.     

一株高温菌所产酶的功能分析与菌株分类鉴定

从长白山温泉中分离出一株可产生淀粉降解酶的高温菌(CW₂), 用薄层层析法分析鉴定酶促淀粉降解的产物, 发现CW₂所产生的淀粉降解酶系胞外酶, 可催化淀粉降解产生异麦芽低聚糖(主要包括异麦芽糖、 异麦芽三糖和潘糖). 用PCR法扩增其16S rDNA, 测定其序列（873 bp）, 与GeneBank中已知菌的16S rDNA序列对 比, 该菌株与模式菌株Bacillus licheniformis ATCC 14580,Bacillus licheniformis  DSM 13,Bacillus subtilis strain JM4的16S rDNA序列同源性最高, 只分别相差9,9,13个碱基, 序列相似性分别为98.97％,98.97％,98.51％. 用Neighbor joining方法构建CW₂进化树, 并用Bootstraping法对其评估, 结果表明, CW₂与Bacillus licheniformis, Bacillus sonorensiss形成Bacillus属中的亲缘关系最近的一个进化种群.     

中国酱油发酵酱醪中嗜盐四联球菌的鉴定

从采用传统露天酿造工艺的中国酱油发酵酱醪中分离筛选嗜盐乳酸球菌,对其进行形态、生理生化特性研究及16S rDNA序列分析,在此基础上确定其分类地位,为研究其在酱油酿造中的作用奠定基础.研究结果表明,筛选菌株为四联球型,革兰氏染色阳性,不运动;接触酶反应阴性,能从葡萄糖产酸而不产气;NaC l含量为18%的培养环境下乳酸产量达2.2%;基于16S rDNA序列的系统发育分析表明筛选菌株与嗜盐四联球菌的亲缘关系最近,从而初步确定其为嗜盐四联球菌.     

复合诱变及发酵优化选育染料木素转化菌株的研究

本研究通过对两株β-葡萄糖苷酶高产菌株黄丝曲霉JS-Q和黑曲霉XK-L进行复合诱变,诱变混合菌株直接进行产酶培养,利用"复杂系统定向调控技术",以酶活为指标对培养条件进行连续的定向调控,在产酶培养条件优化过程中富集正突变株并逐步提高酶活,在挑选出正突变株的同时优化出适合高酶活正突变株的培养条件.最终从优化产酶培养基中挑选到菌株F17和F27,产酶能力比出发前菌株XK-L提高了64.9%和49.4%.用这两株菌分别发酵槐角苷,经测定其转化率分别为76%和78%,比出发菌株XK-L提高31.0%和34.5%.     

发酵法生产京尼平菌株的筛选与培养

从土壤中筛选到一株产β-葡萄糖苷酶的菌株FYS-9,其发酵可将京尼平苷转化为京尼平。通过菌落形态特征、孢子和菌丝显微观察及18S rDNA基因序列分析,初步鉴定该菌株为泡盛曲霉（Aspergillus awamori）。以FYS-9为出发菌株,通过紫外线、原生质体诱变,选育得到一株高产β-葡萄糖苷酶的突变株70C-3,该突变株发酵产酶平均酶活力达到36.15IU/mL,比FYS-9提高39.4%。对突变株70C-3发酵转化京尼平苷条件的优化结果表明,在京尼平苷添加量1.5%,30℃、150r/min转化24h的条件下,京尼平苷的转化率达到97.7%,京尼平的产量可达8.5g/L。     

中国南海红树内生真菌No.1403次级代谢物的研究

中国南海红树的内生真菌Ｎｏ．１４０３是由香港城市大学Ｖｒｉｊｍｏｅｄ教授等分离出来的。其发酵液粗提物有明显的抗菌活性,对酵母菌和霉菌均有抑制作用。采用硅胶柱层析、核磁共振、质谱,红外光谱和Ｘ光结晶衍射等方法对该菌静置培养的发酵液化学成分进行研究,发现真菌Ｎｏ．１４０３能产生灰黄霉素Ａ和多种醌类抗生素Ｂ,Ｃ,Ｄ及其它化合物,其中Ｃ未见文献报道,Ａ的产量很高,约为２０ｍｇ／Ｌ,本研究表明Ｎｏ．１４０３     

一株渤海丝状海洋真菌的分子生物学复核鉴定

采用真菌形态观察的标准培养条件,结合18S rDNA—ITS片段克隆测序和序列特征GeneBank比较分析,对本实验室分离保藏的海洋真菌Penicillium sp．BH06进行了培养特征和显微形态的复核鉴定研究,依据分子生物学和形态结构特征,认定该菌株应修订为桔青霉（Penicillium citrinum）．研究结果提示,基于传统形态学观察并结合ITS序列分析,可为丝状真菌的分类鉴定提供可靠的分子生物学依据．     

一株产抗菌物质链霉菌的筛选及鉴定

从土壤中分离到一株对棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)有较强拮抗作用的链霉菌菌株HCCB10124,研究其拮抗性表明,对10种常见的病原真菌和部分细菌有拮抗作用,但对植物病原性真菌的抑制效果高于细菌.其形态特征、培养特性、生理生化特性、细胞壁组分与链霉菌属中的白网链霉菌(Streptomyces albireticuli)相同,16S rDNA序列的同源性达99%.根据多项分类原则和系统进化树的构建分析,将该菌株初步归属于白网链霉菌.     

Hierarchical recognition on the taxonomy of <Emphasis Type="Italic">Nitzschia closterium</Emphasis> f. minutissima

Nitzschia closterium f. minutissima, a marine eukaryotic unicellular diatom, originally classified as Bacillariophyta/Bacillariophyceae/Bacillariales/Bacillariaceae/Nitzschia, is one of the most important feed sources in mariculture. In this study, its morphological features were examined under DIC Microscopy （differential interference contrast microscope）; its pigments and fatty acids composition were analyzed by using High Performance Liquid Chromatography （HPLC） and gas chromatography （GC）; the complete Actin cDNA, part 18S rDNA, complete ITS1 and ITS2 sequences, part 28S rDNA sequences, and a putatively encoding A5 fatty acid desaturase gene were cloned respectively and further functioned in transgenic yeast. The sequence alignments were separately conducted using the related sequences from Nitzschia closterium f. minutissima, Cylindrotheca closterium （Bacillariophyta/Baci- Ilariales/Bacillariaceae/Cylindrotheca） and Phaeodactylum tricornutum （Naviculales） with ClustalX 1.83. No distinct difference was discovered between N. closterium f. minutissima and P. tricornutum in both biochemical and molecular level. Their identity was more than 99.6% among 18S rDNA, 5.8S rDNA and actin-gene sequences, and is up to 98.6% even among ITS1 and ITS2 sequences. Their △5 desaturase similarity was 99.4%. However, the lower similarity was disclosured between N. closterium f. minutissima and Cylindrotheca closterium, which shared less than 40% identity in the ITS1 and ITS2 sequences. So, N. closterium f. minutissima should not be placed in Bacillariales, Bacillariaceae, Nitzschia, but in Naviculales, Phaeodactylaceae, Phaeodactylum, and it was actually a strain of P. tricornutum.     

降解柴油的耐盐酵母菌的鉴定及性质研究

从胜利油田被石油污染的土壤中分离到一株能降解柴油的酵母菌YH—41。根据形态学特征、生理生化特征和分子生物学方法对其进行了鉴定。利用紫外分光光度法测定了该菌对柴油的降解率。通过单因素试验及正交试验确定了该菌对柴油的最适降解条件为pH6、温度30℃、通气量(锥形瓶容积)500 mL、接种量(OD600)3 mL。克隆了该菌的18S rDNA序列并进行测序,以18S rDNA序列同源性为基础构建了相关属种的系统发育树。结果表明YH—41与假丝酵母属(Candida)的奥默毕赤酵母(Pichia ohmen)的单倍体极接近。经优化菌体对柴油的降解率达到46.8%。经GC-MS分析可知,该菌种对柴油有很好的降解能力。     

饲用复合酶生产菌株的诱变选育

通过UV诱变复合酶产生菌黑曲霉筛选得到一突变株JW001,该菌株可同时发酵产生高活力的多酶系,其中纤维素酶和酸性蛋白酶活力分别为18 379 u/g和6 472 u/g,比出发菌株分别提高122%和92%.优化确定了曲盘固体发酵工艺,并进行了复合酶动物应用试验,试验表明黑曲霉JW001菌株发酵生产的饲用复合酶制剂对不同畜禽均有很好的饲喂效果.     

核酸酶P1产生菌的诱变选育

以核酸酶Ｐ１产生菌桔青霉ＡＳ．３．２７８８为出发菌株，经过诱变处理，获得了产核酸酶Ｐ１的变异株Ｈ１０１５。该菌株在葡萄糖培养基上直接发酵７２ｈ，核酸酶Ｐ１的酶活力达到３４５ｕ／ｍｌ，比出发菌株酶活力提高了２０多倍。     

L－谷氨酰胺生产菌定向选育的初步研究

以天津短杆菌ＴＧ－８６６为出发菌株，利用亚硝基胍、硫酸二乙酯等常规诱变方法以及原生质体融合法最终筛选出一株谷氨酰胺生产菌ＧＭＮ－１８［ＭＳＯ~Ｒ＋８－ＡＧ~Ｒ＋ＳＧ~Ｒ＋（ＮＨ_４）_２ＳＯ_４~Ｒ］，在适宜条件下平均积累谷氨酰胺２７．３ｇ／Ｌ。