安宁河流域鸭瘟,鸭霍乱综合防治研究：IV.鸭瘟疫苗和…

对鸭瘟鸡胚化弱毒苗（鸭瘟苗），鸭瘟，禽霍乱（Ｇ１９０Ｅ４０）二联活苗（二联苗）和巴氏杆菌Ａ群菌苗（Ａ苗）的安全性，免疫力产生时间及对产蛋率的影响作了观测，结果表明：用正常免疫量的５～７倍接种各组试验鸭后，１４天内无一死亡，说明安全性很好，产蛋母鸭分别接种三种苗后，其免疫前后１５天或５天的产蛋率与对照组相比均有所下降，但不很明显，且在１５天后几乎安全恢复正常，免疫Ａ群菌苗后６天开始出现免疫力，二联苗     

Gln 对鸭瘟感染鸭十二指肠免疫调节相关基因表达量的影响

摘要: 目的 为谷氨酰胺( Glutamine,Gln) 在正常鸭及鸭瘟( Duck plague,DP) 模型中对肠道功能及作用途径的研究提供依据。方法 280 只无特定病原体( Specific pathogen free,SPF) 7 日龄雏鸭随机分为 8 组,四组梯度剂量每天灌喂 Gln( 0、0. 5、1、2 g / kg 饲 料) 6d,及另四组灌喂同等梯度剂量 Gln 6 d,于 第 一 天 灌 喂 30 min 后 攻 0. 2 mL2000TCID50 鸭瘟病毒,观察 Gln 对正常雏鸭的免疫促进作用及攻毒鸭免疫应激的缓解作用。测定 Toll 样受体 4( Toll-like receptor 4,TLＲ4) 通路基因表达量。结果 Gln 显著提高正常组 TLＲ4 通路 mＲNA 表达量( P ＜ 0. 05) ,显著降低攻毒组表达量( P ＜ 0. 05) 。结论 Gln 通过 TLＲ4 通路提高正常雏鸭肠道的免疫力,降低鸭瘟病毒( Duck plague virus,DPV) 造成的肠道免疫损伤。     

鸭疫里默氏杆菌三价灭活疫苗的免疫保护期研究

选择免疫原性好的血清1,2,4型鸭疫里默氏杆菌（RA）分离株制备三价灭活油乳剂苗,疫苗抗原含量为5×109CFU/ml,分别用0.5,1.0和1.5ml/只剂量接种7日龄樱桃谷肉鸭以检验器其安全性;用0.25ml/只的剂量接种樱桃谷肉雏鸭,分别于免疫后第1、2、3,4、5和9周攻毒,以检验其免疫效果.安全性检验结果显示,肉雏鸭接种后未见局部和全身异常反应;攻毒保护试验结果显示,免疫后2～9周雏鸭对3个血清型的RA的攻毒保护率达70％ ～ 100％.证明该三价灭活疫苗具有良好的安全性免疫保护力,免疫保护期不少于9周.     

实验性鸭瘟的病原动态分布及病理组织学观察

针对30只DPV攻毒试验鸭及30只同居鸭的体内DPV-DNA动态分布及病理组织学变化,采用PCR技术和常规病理学方法进行研究、结果显示：（1）DPV攻毒后6h,用PCR方法在肝、脾、法氏囊、胸腺、血液、直肠粪便可检测到DPV-DNA（2）DPV经不同途径感染成年鸭后,病毒在体内的动态分布有一定的差异．（3）在自然感染的情况下,肝、肺、血液．胸腺、直肠粪便可作为鸭瘟病原DNA早期检测的首选取材样本．（4）DPV感染后,患鸭的肝脏、肾小管上皮细胞．脾脏、法氏囊及胸腺网状细胞可见核内包涵体．（5）组织病变与病原分布的时序性相关,试验组鸭在DPV攻毒后24h,同居感染组鸭在同居后72h,心、肝、肺、肾、大脑、脾脏、法氏囊、胸腺、十二指肠等组织均表现出程度轻微的实质细胞肿胀、变性;继而发展为细胞水肿、坏死,间质严重出血（6）免疫器官胸腺、脾、法氏囊、骨髓的病原检出及组织病变皆发生在DPV感染的早期,病变器官从组织水肿、充血、出血、淋巴细胞数量减少,迅速发展为坏死．上述结果为研究DPV的致病机理、鸭瘟的早期诊断和鸭瘟的防制提供了依据．     

免疫与未免疫鸡感染IBDV后血浆TNF-α和NO变化

为探讨肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）和自由基在鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）发病过程中的作用机制．研究了经ＩＢＤ弱毒苗免疫和未免疫的３０～５９ 日龄ＡＡ 鸡在感染传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）后血浆ＴＮＦ－α和一氧化氮自由基（ＮＯ）水平动态变化．结果表明：攻毒后第１ 天,未免疫攻毒鸡（Ａ组）血浆ＴＮＦ－α即表现较大的变化,至第３ 天,Ａ组和免疫攻毒鸡（Ｂ组）ＴＮＦ－α显著高于未免疫未攻毒鸡（Ｃ组）;血浆ＮＯ则表现为在攻毒后第３ 天,Ａ 组明显上升,显著高于Ｂ和Ｃ组,至第５ 天３组ＴＮＦ－α和ＮＯ虽均下降但Ａ组仍高于或明显高于Ｂ和Ｃ组,以后３ 组间无明显差异．     

鸭疫里氏杆菌疫苗在雏鸭体内诱导细胞免疫的动态研究

本试验选用1日龄仙湖鸭48只,随机均分为6组,其中1～5组为试验组,第6组为对照组.各试验组按不同的免疫次数、首免龄期、接种剂量,用鸭疫里氏杆菌油乳剂灭活疫苗分别作免疫接种,对照组不作接种.各试验组（包括对照组）在免疫前及免疫后每周采血一次,涂片,用酸性α-醋酸荼酯酶（ANAE）反应方法进行染色,用油镜检测计算T、B淋巴细胞百分比值.研究结果表明：无论是2日龄、7日龄或14日龄首免,首次免疫1周后,雏鸭体内都能产生相应的免疫应答,但2日龄免疫应答能力弱,7日龄较强,14日龄最强.两次免疫的细胞免疫效果比一次免疫效果明显.     

鸭瘟重组病毒穿梭载体的构建及分析

目的本研究目的为构建重组穿梭载体,拯救带有增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)重组病毒,为重组二联苗的研制奠定基础。方法选择已经证实的US区域的US2-SORF3、US7-US8和UL区域中的UL15-UL18的非编码区作为插入位点构建穿梭载体P-US2-SORF3-EGFP,P-UL15-UL18-EGFP,P-US7-US8-EGFP。在已感染疫苗毒的鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblasts,CEFs)中转染穿梭载体,经细胞同源重组,收集细胞上清,进行噬斑筛选及纯化。结果成功构建了三个带有EGFP标签的穿梭载体,p Blusecript II SK构建的穿梭载体未成功筛选到重组噬斑而用p UC18构建的穿梭载体成功筛选到重组噬斑。结论拯救鸭瘟重组毒的研究中,p Blusecript II SK载体可能不是最佳的适用载体,也可能是插入位点为病毒复制的必须区。     

鸭乙肝病毒表面抗原特异性单抗的研制及应用

以纯化的鸭乙型肝炎病毒表面抗原（ＤＨＢｓＡｇ）免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取免疫鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤ＳＰ２／Ｏ－Ａｇ１４融合,应用ＥＬＩＳＡ筛选出５Ｂ８和８Ｇ１１ ２株抗体分泌滴度较高的杂交瘤细胞,二者所分泌的单抗仅与ＤＨＢｓＡｇ发生反应,而与其它９种禽类常见的病毒均不发生反应,其亚类鉴定分别属于ＩｇＭ和ＩｇＧ２ａ。用鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）阳性鸭血清中粗提的病毒悬液进行５Ｂ８株单抗介导的ＳＰＡ胶体金     

必解癌Ⅱ号协同5Fu抗肠癌实验研究

用我所研制的必解癌Ⅱ号（ＢＪＡ－２）在人肠癌裸鼠皮下移植瘤模型上进行抗肿瘤治疗（ＢＪＡ－２组），并与５Ｆｕ治疗（５Ｆｕ组）、ＢＪＡ－２和５Ｆｕ治疗（联合用药组）及空白对照组（对照组）比较。治疗裸鼠接种移植瘤当天开始，将ＢＪＡ－２按每天每只裸鼠１６ｍｇ的剂量混入饲料内经口投入，治疗４２天，平均每只裸鼠服药总量为６７２ｍｇ，５Ｆｕ以每只裸鼠每日剂量为０．８ｍｇ配制饮水，用药二个疗程，每一疗程５天，平均总量为８ｍｇ。结果显示：联合用药组抑瘤率最高达５３．９％，明显高于５Ｆｕ治疗组（４４．８％），说明ＢＪＡ－２有协同抗肿瘤作用。ＢＪＡ－２组治疗后脾重／体重比值、淋巴结实质组织细胞增生、末体重／初体重比值等指标均优于其它组，表明ＢＪＡ－２具有提高宿主免疫功能作用。     

新城疫Ⅱ系、Ⅰ系疫苗早期免疫的探讨及其免疫应答的形态学观察

试验对具有母源抗体的雏鸡采用新城疫Ⅱ系苗滴鼻首免,20日龄Ⅰ系苗饮水二免,通过对1000羽试验雏鸡血清HI抗体效价的连续检测和攻击强毒试验结果,证明雏鸡首免和二免后,HI抗体效价维持在较高水平,对强毒攻击具有坚强的保护力,至100日龄时保护率仍可达80％,而对照鸡在30日龄时保护率即降至0。Ⅰ系苗饮水二免后,经80天观察,未见鸡群出现任何明显不良反应,二免后3天采取免疫鸡和同日龄同群感染鸡的脑,肺脏、脾脏,腔上囊和血液分别作成匀浆接种9日龄鸡胚,未能分离到Ⅰ系病毒。关于新城疫苗免疫应答的形态学变化,国内外尚乏报道,本试验作了比较系统的观察,注意到雏鸡首免和二免后各个时期的免疫器官:胸腺,腔上囊,脾脏,盲肠扁桃体,肠道淋巴组织和气管,肺脏,肝脏及肾腔等器官的免疫应答表现,特别在Ⅰ系苗二免后,更为明显,免疫后淋巴母细胞和浆细胞的增多反应了HI抗体效价提高的相关免疫状态,气管和肺脏次级支气管上皮下淋巴细胞的大量集聚和形成淋巴小结是另一突出特点,提示采用滴鼻和饮水免疫途径可以诱导呼吸道的局部免疫应答和增强呼吸道的局部抵抗力。试验表明:1日龄雏鸡Ⅱ系苗滴鼻首免,20日龄Ⅰ系苗饮水二免,效力可靠,安全,方法简便易行,具有一定的实用价值,并在形态上对免疫效力予以佐证,结合文献论证了呼吸道局部免疫力在抵抗新城疫强毒感染中的重要意义。     

免疫鸡群感染新城疫强毒后排毒规律研究

将经过２次新城疫（ＮＤ）疫苗基础免疫的ＳＰＦ鸡,随机分成５组,每组８只,在６０日龄时分别用Ｆ４８Ｅ８、Ｔｅｘａｓ、Ｈｅｒｔ３３、Ｌａｓｏｔａ等新城疫强毒和弱毒经口腔接种（剂量为０．２５ｍＬ）,１２ｈ后采取泄殖腔棉试样品,利用ＮＤ强毒快速检测试剂盒进行排毒的动态监测,并在攻毒前期、中期、后期各试验组ＳＰＦ鸡的ＨＩ效价。结果发现试验组鸡群中个体在第３天开始排毒,２０ｄ左右排毒结束,其间在６￣７ｄ和１１     

水飞蓟素对雏鸭人工感染鸭肝炎病毒疗效的观察

目的为了探索水飞蓟素对鸭病毒性肝炎的治疗效果。方法100只雏鸭分为5组,于11日龄接种鸭肝炎病毒。第1、2、3组腿肌接种5×104倍稀释的病毒尿囊液,并分别每天口服0、30、10 mg·kg^-1的水飞蓟素;第4组仅每天口服10 mg·kg^-1的水飞蓟素;第5组为空白对照组。试验期内正常喂食及饮水,于攻毒后的第5天足背静脉采血,分离血浆,比色法测定血浆谷-草转氨酶和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性水平。结果雏鸭人工感染病毒后,在96 h内死亡严重,适当剂量的水飞蓟素具有良好的保护作用。雏鸭感染病毒后血浆GOT活性增强、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性下降,口服水飞蓟素可明显改善这些效应。结论适当剂量的水飞蓟素可有效防止人工感染型鸭肝炎病毒导致的死亡,其机制可能与水飞蓟素的护肝作用和免疫调节作用有关。     

La Sota毒株胰蛋白酶作用试验

在３７℃条件下,用０．１％和１％胰蛋白酶消化新城疫病毒（ＮＤＶ）ＬａＳｏｔａ毒株１２和２４ｈ后,接种１５日龄ＮＤＶ非免疫雏鸡,接种１５ｄ内雏鸡健活,采取血清测定血凝抑制（ＨＩ）抗体效价与对照组无显著差异;用０．１％和１％胰蛋白酶分别作用ＬａＳｏｔａ毒株２、４、１２和２４ｈ后,接种１０日龄ＮＤＶ非免疫鸡胚,鸡胚平均致死时间及尿囊液中病毒血凝（ＨＡ）效价与对照差异不显著;ＬａＳｏｔａ、Ｃｌｏｎｅ－３０     

粤北地区鸡致病性大肠杆菌蜂胶佐剂疫苗的免疫试验

从粤北地区分离到的鸡致病性大肠杆菌中选择6株优势致病性大肠杆菌菌株做为制苗菌种，制备制苗菌液，按相同比例混合灭活，加蜂胶乙醇浸液为佐剂制备多价菌苗．安全试验结果证实，该灭活菌苗对20日龄肉仔鸡安全，试验鸡元不良反应；在5～10℃保存12个月，疫苗物理性状稳定．免疫效力试验结果：疫苗保护率为100％；接种20日龄雏鸡O．5ml／只，血凝试验检测结果为接种多价蜂胶灭活疫苗的试验鸡在免疫后第二周可检测出抗体，抗体滴度均数为3．10log2；免疫后第四周达到最高峰，抗体滴度均数为3．60log2；免疫后第五周抗体滴度开始下降，抗体滴度均数为2．10log2，但抗体滴度仍高于对照组（1．25log2）．在大肠杆菌感染鸡场进行的多批区域试验结果表明，该多价灭活疫苗安全，具有良好的保护作用．     

辣椒（Capsicum annuum L.）下胚轴离体培养的研究

将辣椒无菌苗下胚轴切段接种在ＭＳ培养基（附加不同的植物激素）上，诱导产生愈伤组织。最适的诱导培养基为ＭＳ＋２ｍｇ／Ｌ ＢＡ，０．５ｍｇ／Ｌ ＩＡＡ，在此培养基上产生的愈伤组织具有较强的分化能力。将愈伤组织转移到分化培养基，光照培养，芽分化率可达２５．０％。不定芽在含１ｍｇ／Ｌ ＧＡ３和２ｍｇ／Ｌ ＢＡ的ＭＳ培养基上伸长成苗，再移入生根培养基上诱导生根，长成完整植株。     

卡介苗接种后异常反应1例报告

卡介苗接种后异常反应１例报告刘建萍，严洲（兰医二院保健科７３００３０）卡介苗是由牛型结核杆菌，经人工培养传种接代而制成的一种无致病性的活菌苗，经接种后可使机体产生一种特异性免疫力，可以起到预防结核的作用，有力的保护了儿童的身体健康。但接种过量或误做皮...     

水貂肠炎病毒疫苗免疫效力指标及动物模型研究

按正交及配对实验设计，将水貂病毒性肠炎（ＭＶＥ）细胞培养灭活矿油苗和铝胶苗接种于４８只水貂、１２只豚鼠、１２只家兔，检测三种动物免疫后６￣４０天的血清ＨＩ抗体水平和水貂免疫后１１￣３１天的ＳＮＩ，结果表明：（１）该两苗对水貂的体液免疫效力相同；（２）豚鼠、家兔、水貂接种疫苗后６￣４０天的ＨＩ抗体水平差异不显著，故豚鼠或家兔可作为水貂免后产生抗体水平的模型；（３）水貂免疫后１１￣３１天的ＨＩ抗体水平     

某鸡场鸡传染性法氏囊病弱毒疫苗饮水免疫后发生的一次鸡病的诊断

１９９１年４月上旬，四川某鸡场对３５７０只１３日龄依莎雏鸡作法氏囊病弱毒疫苗饮水免疫，１４日龄时发病死亡９只，到２３日龄９天内共死亡８１４只，病死率达２２．８％。对２０只送检病死鸡的沙门氏菌分离率为１／２０株（５％）．但病料人工感染小白鼠试验为阴性，证明非病原菌所致，用病料与新城疫血清（抑制价１：６４０）作用后接种非免疫健康鸡１组的存活率为７５％，直接接种未与新城疫血清作用病料的２组存活率为５０％，剖检回归本动物试验自然死亡和人为处死的病鸡发现了较为典型的法氏囊病变，由此认为：法氏囊弱毒疫苗饮水免疫是引起鸡群发病死亡的主要原因。     

安祖花组织培养快繁技术研究

将外植体接种于诱导愈伤组织和芽的分化培养基上，培养１个周期（３０～４０ｄ），外植体上出现光滑的愈伤组织，２个周期后愈伤组织上分化出芽体，将有芽体分化的愈伤组织转入ＭＳ＋ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡＯ．１ｍｇ／Ｌ培养基中，２个月左右可长成２～３ｃｍ的生根小植株。生根试管苗经炼苗后移入花盆，生长良好。     

［Ag_2（α－Ph_2PPy）_2］_2（NO_3）_4的合成和晶体结构

ＡｇＮＯ＿３和ａ－ｐｈ＿２ｐｐｙ，（ａ－（Ｃ＿６Ｈ＿５）＿２Ｐ（ＮＣ＿５Ｈ＿５））在加有少量Ｈ＿２Ｏ＿２和ＮａＯＨ的Ｃ＿２Ｈ＿５ＯＨ水溶液中反应生成标题化合物的灰黑色晶体。属四方晶系，空间群Ｐ４＿１，ａ＝１．３００ｎｍ，Ｃ＝４．０７６ｎｍ，ｖ＝６．８８４ｎｍ￣３，Ｚ＝８，Ｄ＿ｃ＝１．６７ｇｃｍ￣（－３），Ｒ＝０．０５９，ｒ＿ω＝０．０７２．每一不对称单元中存在二套独立而结构基本相同的［Ａｇ＿２（ａ－ｐｈ＿２ＰＰｙ）＿２］￣２＋，它的二个Ａｇ原子和二个ａ－ｐｈ＿２ＰＰｙ中－Ｎ－Ｃ－Ｐ－桥的Ｎ，Ｐ原子联接成为一个稳定非共面八员环，而环内Ａｇ，Ａｇ间距分别是０．３１４，０．３ｌ０（ｎｍ），均未成键。不对称单元中的二个八员环通过的Ｏ原子与环上Ａｇ原子的弱成键而具有结构联系。环内还出现了罕见的三配位Ａｇ原子。