拟南芥中离子转运蛋白载体构建及烟草转化

植物修复是利用植物富集重金属离子及其化合物,并通过组织代谢去除环境污染物的环境修复技术．克隆了拟南芥中的两个金属离子转运蛋白基因ZAT1和IRT1并转化烟草,经PCR及GUS组织化学染色鉴定,ZAT1和ITRT1基因都已整合进表达载体,并获得了GUS染色阳性植株．这些工作为获得富集重全属离子的转基因烟草奠定了基础,将有效地促进植物修复技术的发展和应用。     

sⅡ系列缺失启动子载体的构建

为检测新型sII根部特异启动子的功能,采用PCR的方法,扩增胡萝卜根部特异启动子sII基因的启动子序列,得到该启动子-650bp和-1000bp区域片段.在启动子片段的5'和3'端分别引入了克隆所需的限制性酶切位点,分别定向克隆到经改造的质粒载体pBI121和pBITM2MARⅡ中,取代原有的组成型启动子CaMV35S,获得了四个含有胡萝卜根部特异启动子sII基因不同缺失片段区域与GUS报告基因的融合检测载体.该系列载体通过农杆菌介导转入胡萝卜,检测sII不同长度片段启动子在胡萝卜根部驱动报告基因的表达情况,分析该启动子的功能.     

重组表达载体pGEM-VLA4的构建

从人外周血细胞中提取mRNA,用RT-PCR法扩增含BamH与HindⅢ酶切位点VLA4基因序列,运用分子生物学方法将该序列克隆到pGEM中,构建成VLA4基因序列的真核表达载体并进行鉴定分析.对重组载体用双酶切系统酶切后进行电泳并测序,结果证明目的基因克隆及连接方向正确,测序结果正确.通过实验,成功地构建了含VLA4基因的真核表达载体pGEM-VLA4.     

半胱氨酸蛋白酶基因RNA干扰表达载体的构建及油菜的遗传转化

将半胱氨酸蛋白酶基因(Bncp5)cDNA序列片段正反向插入表达载体pFGC5941中,构建了RNA干扰表达载体pFGC-Bncp5-RNAi.采用根癌农杆菌介导法,转化甘蓝型油菜下胚轴.在5mg/L BastaMS培养基中筛选,PCR鉴定结果显示,获得Bncp5转基因植株28株.半定量PCR分析结果显示,半胱氨酸蛋白酶基因在转基因油菜中表达受到一定程度的抑制,表明Bncp5的干扰载体在油菜中得到表达.     

枯草杆菌—大肠杆菌多功能穿梭载体的构建

本文简要地报道了由枯草杆菌运载体pUB_(110)和大肠杆菌运载体pGEM_3构建的一个多功能穿梭载体pBE_2.该载体能在枯草杆菌和大肠杆菌中复制和表达,并具有一个强启动子和一个多酶切位点区可供广泛利用,是一个比较理想的运载体.     

盐藻DSG10表达载体构建及其根癌农杆菌的转化

盐藻(Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａｓａｌｉｎａ)是一种极耐盐的单细胞绿藻,可以在ＮａＣｌ浓度为0.1～5.5ｍｏｌ/Ｌ的环境中生长,是进行植物耐盐机理及其基因克隆的重要材料[1,2].我们通过构建盐藻表达谱基因芯片,对盐藻在不同盐浓度下的基因表达进行了研究,克隆到了一系列差异表达的序列[3].在对这些序列进行生物信息学分析的基础上,初步预测一些序列可能与渗透压调节有关.对于这些差异表达序列功能的鉴定,有效方法之一是将其转入植物中进行表达.因此,构建一个方便、迅速、含有较多酶切位点的中间载体是十分必要的.在植物基因转化方法的选择上,采…     

GmGASA6基因CRISPR-Cas9载体构建及大豆的遗传转化

通过对大豆GmGASA6基因的结构分析,选择了两个靶位点构建了GmGASA6 CRISPR-Cas9的基因编辑载体.利用农杆菌介导的大豆子叶节转化法进行了遗传转化,共转化外植体800个,获得了转基因阳性苗15株.通过测序证实部分T1代植株GmGASA6基因的靶位点发生了基因编辑.与野生型相比,种子萌发实验发现突变体的胚...     

exendin-4表达载体构建及其在大肠杆菌中分泌表达

目的:研究新型抗糖尿病药物exendin-4的分子作用机制,为exendin-4的大规模生产奠定基础.方法:采用重叠PCR法扩增出exendin-4的完整序列,并将其克隆至表达载体pET22b上,得到重组质粒pET-Exn4.重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后,超声破碎表达产物,Tricine-SDS-PAGE分析exendin-4表达.结果:PCR、酶切鉴定和测序结果证明成功构建了重组表达载体pET-Exn4,Tricine-SDS-PAGE结果表明ex-endin-4基因在大肠杆菌中获得了分泌表达.结论:成功构建了exendin-4的重组表达载体并在大肠杆菌中实现分泌表达.     

DJ-1真核表达载体构建及其转染口腔癌细胞的表达

目的:构建人DJ-1真核表达载体pcDNA3.1(+)/DJ-1,并转染人口腔癌细胞系Tca8113,建立含有DJ-1真核表达载体的口腔癌细胞模型。方法:以人HEK293细胞为模板,应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增人DJ-1基因全长,与真核表达载体pcDNA3.1(+)重组,经酶切鉴定和测序分析后,通过脂质体介导法转染人口腔癌细胞系Tca8113,并设立空质粒对照组(转染pcDNA3.1空载体)和未转染组,最后采用RT-PCR法检测Tca8113细胞中DJ-1基因的表达情况。结果:RT-PCR法获得长度为500 bp左右的阳性产物,重组质粒后经酶切鉴定和序列分析证实真核表达载体pcDNA3.1(+)/DJ-1构建成功。转染Tca8113细胞后RT-PCR法证实与空质粒组和未转染组相比,转染真核表达载体pcDNA3.1(+)/DJ-1的细胞系中DJ-1基因表达明显增高。结论:成功构建人真核表达载体pcDNA3.1(+)/DJ-1,并建立含有该载体的口腔癌细胞模型,为进一步研究DJ-1基因在口腔癌中的功能及应用DJ-1进行基因治疗奠定基础。     

Construction of High Level Expression Cell Lines of Erythropoietin *

Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ（ＥＰＯ）ｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｍｏｓｔｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｆａｃｔｏｒｓｄｕｒｉｎｇｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｍａｍｍａｌｉａｎｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ,ａｃｔｉｎｇｍａｉｎｌｙｏｎｔｈｅｅｒｙｔｈｒ...     

浅谈施工企业管理

在项目管理过程中做好进度控制、成本控制、质量控制、安全控制“四大控制”，优化现场管理的同时，应以人为本做好人员的管理，在同等条件下提高自身竞争力。     

风景区公路隧道“零开挖”进洞施工技术研究

通过安徽省黄塔(桃)高速公路隧道"零开挖"进洞技术研究,介绍了风景区公路隧道施工技术.     

水稻磷酸酯酶2A基因蛋白的原核表达载体构建、表达和纯化

利用PCR技术,从水稻品种日本晴幼穗cDNA中扩增磷酸酯酶2A的基因ORF片段,并将其克隆入原核表达载体pGEX-6p-1中构建重组质粒pGEX-6p-1-PP-2A,经限制性内切酶酶切鉴定以及测序结果表明成功构建了原核表达载体pGEX-6p-1-PP2A。转化E.coli JM109并通过终浓度为0．4mmol／L的IPTG诱导,表达出39kD的CST-PP2A融合蛋白,并用蛋白亲和层析柱GSTrap FF对表达产物进行纯化,为下一步的研究打下了实验基础。     

对我国电子政务建设的思考

分析了电子政务建设的意义，阐述了电子政务建设的主要内容及电子政务建设的原则。     

晋华宫矿高产高效矿井建设

晋华宫矿为大同煤矿集团公司特大型矿井之一。近年来，围绕“双高”矿井建设，针对现有的客观不利条件．积极采用煤体松动和人工强制放顶技术，并结合管理创新。加快“双高”矿井建设步伐，使全矿安全、生产、效益等方面取得了良好效果。     

建筑施工管理的几个问题

结合实际施工管理中遇到的问题,提出对现场管理、施工管理的创新以及后期施工管理等几方面的认识,供施工管理人员参考.     

浅谈施工企业的工程造价管理

工程造价管理是企业经营管理的核心工作。施工企业应通过强化造价意识搞好造价管理，并在施工过程中对工程造价进行全方位管理，同时要做好工程结算工作。     

抗HBsAg单链Fab抗体基因酵母表达载体的构建

采用重叠PCR技术 ,以抗乙肝表面抗原 (HBsAg)IgG铰链区基因为Linker将Fab抗体基因的重链和轻链连接起来 ,构成单链Fab基因。通过测序鉴定 ,克隆的单链Fab基因与理论上的完全一致 ,并成功构建含完整单链Fab基因的毕赤酵母 (P pastoris)表达载体。