近红外荧光探针法测定核酸的研究

以阳离子花菁染料为荧光探针, 依近红外荧光猝灭测定核酸． 最大激发及发射波长分别为７６５ 、７９０ｎｍ ． 核酸测定的线性范围为０－０８ ～１－２μｇ／ｍ Ｌ（ＣＴＤＮＡ 及ＳＭ ＤＮＡ） , ０－１ ～１－６μｇ／ｍＬ（ｙｅａｓｔ ＲＮＡ） ．     

核酸花菁探针中间体-2,3,3-三甲基吲哚-N-乙酸的合成与表征

花菁类近红外荧光探针量子产率高、光稳定性好,广泛应用于核酸及其他生物分子的标记和检测[1].近年来,双-嵌花菁荧光探针安全方便、高灵敏度、低背景,作为一类理想核酸探针更是发展迅速[2].然而,由于花菁染料水溶性较差,在实际应用中存在一定限制,故而必须在菁染料分子中引入亲水性基团,以提高菁染料的应用范围[3,4,].本文通过引人羧酸亲水基团,制备水溶性吲哚衍生物,为合成水溶性双嵌花菁染料准备中间体.     

人血清中总蛋白的近红外荧光测定

建立了以阴离子花菁染料—ＣＴＡＢ体系依近红外荧光增强测定人血清总蛋白的方法． 最大激发及发射波长分别为７６５ｎｍ 及８１２ｎｍ ． 蛋白质测定的线性范围为０－４ ～１２μｇ／ｍＬ．     

蒽酮类热敏记录用近红外吸收色素的合成

合成了一种新的近红外区域有强吸收的蒽酮类热敏染料－２，７一二（二甲氨基）蒽酮。该化合物在８４９ｎｍ处有强吸收，且发色稳定，可成为另一种应用于热敏记录纸的理想发色色素     

基于水溶性吲哚半菁染料的比值式pH探针

合成了一种基于水溶性吲哚半菁染料的比值式pH探针,能快速响应pH值的变化。pH在8.00～11.00范围内,在紫外可见吸收光谱中,吸收峰在390 nm处随着pH的升高吸收峰逐渐减弱,而在470 nm处随着pH的升高吸收峰逐渐增强,吸收强度之比(I470 nm/I390 nm)与pH有着良好的线性关系(R2=0.992 12),可用于检测pH的变化。     

纳米NiTiO3光声光谱研究

纳米钛酸镍粉末从可见光到近红外范围的光声光谱出现了三个强的吸收峰。４４５ｎｍ和５０５ｎｍ附近的吸收峰产生于自由激子和束缚激子的光跃迁，其变化趋势强烈地依赖于颗粒度大小，８４０ｎｍ处的吸收峰源于杂质的贡献     

一种吲哚二甲川菁染料的合成、光谱性质及其应用

目的合成一种含吲哚环的二甲川菁染料,研究光谱性质、与生物分子的相互作用及其作为荧光探针在活细胞成像中的应用。方法采用UV-vis,1H NMR,IR,HR-MS分析确证产物的结构;采用吸收光谱和荧光光谱法研究二甲川菁染料在不同溶剂中的光谱性质,以及该染料在生理条件下与鲑鱼精DNA(DNA)、牛血清白蛋白(BSA)、溶菌酶、淀粉酶、糜蛋白酶和牛血红蛋白的相互作用;采用荧光倒置显微镜观察染料对K562白血病细胞的活细胞染色。结果该染料最大吸收波长(λmax)随着溶剂介电常数的增加出现蓝移。染料与DNA相互作用较强,且荧光强度随着DNA浓度的增加而增强,而其他5种生物大分子对染料的荧光强度影响不大。该染料可以穿透活细胞膜,对细胞核染色,可以清晰地看出核仁的荧光较亮,2 h后观察细胞仍有荧光。结论合成了一种光谱性质优良的二甲川菁染料,该染料对核酸(DNA/RNA)有较强的亲和性,属于活细胞通透性染料,是一种潜在的活细胞成像荧光探针。     

菁染料光稳定性及氧猝灭剂对其光稳定性的影响

文中对不同母核结构菁染料的光谱特性和光稳定性,以及氧猝灭剂对菁染料光稳定性的影响进行了研究。结果表明,这四种菁染料在近红外区均有较强吸收,其光氧化反应遵循一级动力学衰减 ,通过对光氧化反应速率常数k的测定,四种菁染料光稳定性随母核结构按以下顺序递减:吲哚>喹啉 >噻唑。选用的单重态氧猝灭剂能有效提高菁染料的光稳定性,菁染料的稳定性与氧猝灭剂的加入量有一定关联。     

一种色氨酸修饰的苯并呋咱类碱性荧光探针的合成与性能研究

以色氨酸和4 氯 7 硝基苯并呋咱为原料,设计合成了一种碱性pH荧光探针,通过核磁、质谱表征了它的结构. 光谱测试结果表明,当探针水溶液的pH值由7.94上升到12.24时,其紫外吸收光谱发生明显变化,480 nm处的吸收峰明显下降,同时在390 nm处出现一个新的吸收峰,探针水溶液的颜色由橙红色变为黄色;并且其荧光发射峰的强度逐渐下降,产生明显的猝灭现象. 因此,该探针对碱性条件具有明显的光学响应现象.     

长毛对虾碱性磷酸酶功能基因的研究

用对－氯汞苯甲酸修饰该酶分子中的巯基、酶活力不受影响，说明该酶不是“巯基酶”。用Ｎ溴代琥珀酰亚胺修饰酶后，活力完全丧失，修饰后的酶在２７５ｎｍ处的紫外吸收峰完全消失，３４０ｎｍ处荧光发射峰也逐渐下降至完全淬灭，说明色氨酸基是酶活性必需基团之一。     

吡啰红Y共振光散射法测定纳克级核酸

研究了二苯并吡喃类染料吡口罗红Y(PY)与核酸作用的共振光散射光谱,在pH11.5～12.0Tris-NaOH缓冲溶液中,1.75×10-5mol/L的PY溶液加入核酸后,体系的共振光散射增强,在364.0nm处,存在一共振光散射增强峰,其增强强度(△IRLS=I-I0)与核酸浓度呈线性关系,据此建立了一种测定纳克级核酸的简便灵敏的方法.对于fsDNA,方法的线性范围为27.0～625ng/mL,检出限为8.1ng/mL;对于ctD NA,方法的线性范围为39.0～500ng/mL,检出限为11.7ng/mL;对于yRNA,方法的线性范围为59.0～375ng/mL,检出限为17.7ng/mL.建立的方法已用于六种合成样品的测定,结果令人满意.     

桑色素-铝离子-核酸三元体系的研究及其分析应用

用分光光度法研究了桑色素-铝离子-核酸三元体系。在pH 3.25的Britton-Robinson介质中, 桑色素在250,300和350nm处有吸收峰。铝离子的加入使桑色素350nm处的吸收峰下降, 在419nm处出现桑色素-铝络合物的吸收峰。再往桑色素-铝离子二元体系中加入核糖核酸或脱氧核糖核酸, 则进一步引起桑色素350nm吸收峰的降低,419nm处的吸收大大加强, 同时在370nm处有一等色点。419nm处吸光度的增加值与加入的核酸量在一定范围内成正比, 基于此建立了在较宽范围内测定核酸的方法。其线性范围分别为：ρ(ct DNA), 0.71～35.4μg/mL;ρ(fs DNA), 0.64～25.6μg/mL;ρ(y RNA), 0.94～28.4μg/mL。     

中氮茚衍生物-花菁离子缔合平衡体系在核酸测定中的应用

应用中氮茚衍生物-花菁离子缔合平衡体系建立了一种测定痕量核酸的方法.中氮茚衍生物的最大发射波长在385nm,在一定量花菁存在下,其荧光强度显著猝灭,核酸的加入又可使其荧光回复.在最佳条件下,荧光回升与核酸浓度成正比.标准曲线线性范围:小牛胸腺DNA(CTDNA)为2-500ng/mL;鱼精子DNA(FSDNA)为2-400ng/mL.相应的检测限:CTDNA为0.92ng/mL;FSDNA为0.85ng/mL.应用本法对3个实际样品进行了测定,结果令人满意.     

派罗宁GS双峰双波长光度法测定核酸

 采用光度法研究了派罗宁GS与核酸的结合反应,结果表明在pH 6.0左右的介质中,派罗宁GS与核酸在室温下能迅速结合形成紫红色复合物,该复合物在570 nm处有正吸收峰,在540 nm处有负吸收峰.据此,建立了1个测定核酸的双峰双波长光度分析新方法.用该方法测定小牛胸腺DNA(ctDNA)、鱼精子DNA(fsDNA)、酵母RNA(yt RNA)及热变性ctDNA(Dct DNA)的检出限均低于0.011μg/mL.方法简单、快速,试剂及反应体系稳定、选择性好、准确度高,用于4个合成试样的分析,回收率为96.1%~103.0%.     

用比布列西猩红共振光散射技术测定蛋白质

在酸性溶液中，比布列西猩红与蛋白质作用，产生共振光散射(RLS)增强光谱，最大散射峰位于286．0nm，且增强RLS强度在一定范围内与蛋白质浓度呈线性关系．研究了pH、比布列西猩红的浓度及离子强度对RLS强度的影响．人血清白蛋白(HSA)的线性范围为0.02～4．0μg／mL，牛血清白蛋(BSA)0．02-4．5μg／mL，溶菌酶(Lys)为0．02-2．0μg／mL，γ-球蛋白(γ-IgG)为0.0l-7.5μg／mL.测定的检测限(3σ)分别为：16．6ng／mL(HSA)，15．7ng／mL(BSA)，16．7ng／mL(Lys)和7．5ng／mL(γ-IgG)．此方法用于人血清样品测定，结果满意．     

葛根素荧光猝灭测定核酸的研究

基于DNA与RNA对中药葛根素的荧光有猝灭作用而建立了DNA、RNA的测定新方法.在生理pH值附近,当激发波长为266 nm,葛根素在460 nm处出现荧光,随着核酸的加入,葛根素的荧光强度线性下降,本文对4种不同核酸的线性方程、线性范围、检测限进行了测定,对外来离子的干扰进行了研究,与经典的核酸测定方法进行了对比,并对核酸使葛根素荧光猝灭作用机理进行了探讨.     

抗－DNA免疫复合物性质的研究

用聚乙二醇（ＰＥＧ）和硫酸铵从系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）患者血清中分离出免疫复合物（ＩＣ）和血浆核酸（ＰＮＡ）。分析结果表明，ＰＮＡ的主要成分是ＲＮＡ，仅有少量ＤＮＡ存在，并且ＰＮＡ中ＤＮＡ的ｄＧ＋ｄＣ含量（５５％）明显高于正常值（４２％）。一旦经过ＲＮａｓｅ处理，ＰＮＡ抑制抗－ＤＮＡ抗体结合ＤＮＡ的能力降低，说明抗－ＤＮＡ抗体和ＲＮＡ有交叉反应。动力学研究观察到，抗－ＤＮＡ免疫复合物中抗原抗体的分子比是１：１，结合能为３７ｋＪ／ｍｏｌ。这提示，除ＤＮＡ／抗－ＤＮＡ外，其他抗－ＤＮＡ免疫复合物也可能同ＳＬＥ患者的组织损伤有关。     

核酸某些碱性三苯甲烷染料体系的RRS及其分析应用

在Tris缓冲溶液中,核酸能与某些碱性三苯甲烷染料如乙基紫（EthyI Violet,EV)、结晶紫（Crystal Violet,CV)和甲基紫（MehtyI Violet,MV）结合而使共振瑞利散射（RRS）急剧增强并产生新的RRS光谱。以鲱鱼精DNA（Herring Sperm DNA,hsDNA)为例考察了其相应的光谱特征、影响因素和适宜的反应条件,体系均在hsDNA浓度为0～2.0μg/mL时与散射强度呈直线关系,方法具有较高的灵敏度,其检出限（3σ）分别为4.7ng/mL（EV-hsDNA体系）,13.0ng/mL（CV-hsDNA）和12.2ng/mL（MV-hsDNA体系）。考察了某些共存物质的影响,并用于全成样品中核酸的测定,获得了满意的结果。     

藏红T在核酸分子表面进行长距组装的光谱特征

表征了藏红Ｔ（ＳＴ）在核酸分子表面进行长距组装的共振光散射光谱、电子吸收和发射特征。结果表明,ｐＨ７．０５、离子强度０．００４５下ＳＴ在核酸表面进行的长距组装随着ＳＴ与核酸的摩尔比（Ｒ）不同涉及到两种作用机理,当Ｒ〉１．３时,长距组装表现为紫移的减色效应和荧注猝灭,在３２８．０ｎｍ、４７２．０ｎｍ和５７２。０ｎｍ;Ｒ〈１．３３时,长距组装产物发生离解,具有红移的减色效应、荧光猝灭和微弱的共振光散射