一株抗黄芪根腐病芽孢杆菌的筛选、鉴定及抑菌物质的初步研究

从河西走廊敦煌盐碱土中分离筛选出有效拮抗黄芪根腐病病原菌尖孢镰刀菌的细菌,以期能为黄芪根腐病的生物防治提供菌种资源.采用平板对峙法和琼脂扩散法筛选拮抗菌,通过其形态特征、生理生化特征和16S rRNA基因序列进行分类学鉴定;对其产抑菌物质的发酵条件进行优化,探讨其抑菌谱与稳定性;用有机溶剂进行抑菌物质的初步提取和抑菌效...     

贝莱斯芽孢杆菌3A3-15生防和促生机制

为揭示贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)3A3-15生防和促生作用相关机理,采用9对特异性引物对其抑菌基因和促生长基因进行PCR检测,并分别通过Sackowski法、Schwyn和Neiland法检测其分泌吲哚乙酸(IAA)和嗜铁素能力,通过高效液相色谱-电喷雾质谱(HPLC-ESI-MS)分析其发酵液抑菌成分,采用平板对峙实验和孢子萌发抑制实验分析该菌株的抑菌机理.结果表明,贝莱斯芽孢杆菌3A3-15中的抑菌基因包括yndJ、srfAB、ituC、bamC和fenD,促生长基因包括ysnE和dhbC.该菌株分泌嗜铁素能力较强,A_s/A_r值达到0.238,鉴定其抑菌物质为C14～C15 surfactinA,且贝莱斯芽孢杆菌3A3-15的次生代谢物能导致病原菌(尖孢镰刀菌)菌丝扭曲、膨大、畸形,对其孢子萌发抑制作用较强,抑制率达93.2%.以上结果说明贝莱斯芽孢杆菌3A3-15具有较好的生防和促生潜力,是防治尖孢镰刀菌引起的大豆根腐病的潜在菌株.     

三七根腐病拮抗菌的筛选及活性产物的初步分离

 以文山州三七根腐病主体病原菌坏损柱孢(Cylindrocaipon destructans)为靶标,对其拮抗菌进行了筛选,获得了抑菌作用明显的3株拮抗细菌:Y-4-70,X-5-15和X-5-32;并对拮抗菌X-5-15代谢产物的抑菌活性进行了初步研究,发现该菌株发酵液石油醚萃取物对病原菌有较好的活性.     

水稻恶苗病拮抗细菌的筛选及生防机制

从稻蟹生态种养水稻根际土壤中分离得到3株对水稻恶苗病具有防治作用的拮抗细菌,其防治效果可分别达到69%,60%,62%。经鉴定,3株拮抗细菌分别为解淀粉芽孢杆菌J2(Bacillus amyloliquefaciens)、芽孢杆菌属J3(Bacillus sp.)和枯草芽孢杆菌F3(Bacillus subtilis)。3株拮抗细菌均可代谢产生蛋白酶与纤维素分解酶,致使病原菌菌丝顶端部分膨大,从而抑制菌丝生长,降低恶苗病发病率。拮抗细菌也可同时促进水稻苗期光合作用和生物量的增加,诱导水稻超氧化物歧化酶(superoxidedismutase, SOD)、过氧化物酶(peroxidase, POD)和过氧化氢酶(catalase, CAT)活性提高,丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量下降,进而提高水稻防御能力,降低病害发生。3株拮抗细菌均表现出对水稻恶苗病良好的防治效果,且对水稻生长产生积极影响,具有一定的开发潜力。     

石榴枯萎病的生防木霉菌株的筛选及鉴定

目的 石榴枯萎病是由甘薯长喙壳菌引起,对石榴有严重危害的土传病害。利用拮抗微生物抑制病原菌的繁殖是石榴枯萎病绿色防控的有效手段。通过筛选具有对石榴枯萎病原菌产生拮抗效果的微生物,研究其抑制菌作用,以期为石榴枯萎病生物防控提供菌种资源。方法 从石榴的根际土壤中分离出真菌,根据产孢量、生长速率、拮抗系数及平板对峙结果进行筛选,对防效较好的真菌根据形态学和分子系统学进行鉴定,通过盆栽实验评估其对石榴枯萎病的防治效果。结果 能有效抑制石榴枯萎病菌菌丝的生长的菌株T9经鉴定为非洲哈茨木霉菌（Trichoderma afroharzianum）,盆栽防治效果最高可达71.35%。结论 该菌株展现出了对石榴枯萎病的生物防治效果,具有应用价值。     

棉苗立枯病拮抗菌的筛选及鉴定

为明确7株拮抗细菌对棉苗立枯丝核菌在生物防治中的应用潜力,通过拮抗菌拌种催芽、温室盆栽测试、小区拌种测定及大田拌种测定其防治棉苗烂根病的防治效果。结果表明,拮抗菌S37和S44具有较好的促生和防病效果。在小区试验中,S37和S44对棉苗立枯病的防治效果分别为47.8%和57%,与化学种衣剂福多甲的效果相当。在新疆兵团143团和148团的大田试验中,S37对棉苗立枯病的防治效果均为37.5%,也与福多甲的防治效果相当。通过菌落形态特征观察和16S rDNA分析,对防病和促生效果最好的2株拮抗菌S37和S44进行了鉴定,结果表明,这2株拮抗菌均为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。     

酒糟泥中纤维素降解菌的筛选与鉴定

利用羧甲基纤维素钠培养基及刚果红染色从酒糟泥中筛选具有纤维素降解能力的菌株,利用DNS法测定纤维素降解能力最强的菌株6d内的滤纸酶活,并从形态学和分子生物学两方面对该菌株进行初步鉴定.结果表明:从酒糟泥中获得4株长势良好的菌株,其中菌株FIB-3刚果红染色后的透明圈直径与菌落直径比值(1.88±0.175)最大,并且该...     

不同物质对黄芪根腐病致病菌的抑制作用

采用生物测定的方法,选择苦参碱、槐啶碱、槐果碱、对羟基苯甲酸和阿魏酸5种物质,研究各物质水和丙酮溶液以及不同物质丙酮混合溶液对黄芪根腐病2种主要致病菌菌丝生长和孢子萌发的抑制活性和最低抑菌质量浓度.结果表明:不同物质对2种致病菌菌丝生长和孢子萌发的影响不同,同种物质丙酮溶液的抑菌效果明显好于水溶液的抑菌效果.3种生物碱对2种致病菌菌丝生长的抑制作用比较显著,其中槐啶碱丙酮溶液的抑菌活性最强,在质量浓度为1.00 g/L时的相对抑制率分别为43.63%,27.10%,最低抑菌质量浓度均为0.062 5 g/L.2种酚酸类物质对2种致病菌孢子萌发的抑制作用明显强于对菌丝生长的抑制作用.不同物质丙酮混合溶液对2种致病菌菌丝生长和孢子萌发的抑制活性与单个物质丙酮溶液无明显差异,抑制效果最好的槐啶碱和苦参碱混合液对2种致病菌抑制的EC50为31.62,10.00 g/L,最低抑菌质量浓度均为0.062 5 g/L.不同物质的水和丙酮溶液对2种致病菌活性的抑制作用存在明显的浓度效应,抑制作用随溶液浓度降低而减弱.     

7种植物对黄芪根腐病病原菌的抑制作用研究

采用生物测定的方法,研究了7种植物不同部位的浸提液对黄芪根腐病的3种主要病原菌的抑制作用.结果表明,不同作物的浸提液对3种镰孢菌的孢子萌发和菌落生长的影响不同,既有抑制作用,也有促进作用.其中小麦、玉米、马铃薯和党参浸提液对3种镰孢菌的孢子萌发和菌落生长的抑制作用较显著,而黄芪根和甘草根浸提液对3种镰孢菌的孢子萌发和菌落生长均表现出不同程度的促进作用.     

棉花黄萎病拮抗内生菌的筛选鉴定及抗菌物质研究

从棉株中分离筛选到一株对棉花黄萎病菌具有较强拮抗作用的内生细菌BSD-2.通过形态特征、生理生化特性以及16S rDNA碱基序列测定和同源性分析,鉴定其为枯草芽孢杆菌.平板对峙试验表明,BSD-2对多种植物病原真菌有抑制作用.BSD-2培养液以50 %硫酸铵沉淀所得的拮抗物粗提液,具有良好的热稳定性和酸碱稳定性,对胰蛋白酶、蛋白酶K和胃蛋白酶均不敏感,对氯仿敏感,能够有效抑制黄萎病菌孢子萌发.     

四种植物不同溶剂浸提液对黄芪根腐病致病菌的抑制

选择黄芩、苦豆子、苦参和洋葱四种植物为研究对象,分别用蒸馏水、70%乙醇、丙酮和乙酸乙酯四种不同溶剂进行提取。通过对菌落生长实验和最低抑菌质量浓度的测定,筛选出对黄芪根腐病两种主要致病菌有较强抑制作用的四种植物不同溶剂提取液。结果表明:不同植物的抑菌效果不同,同一种植物的不同溶剂提取液抑菌效果也不同。在所选择的四种植物中,苦参的丙酮浸提液对根腐病两种主要致病菌的抑菌效果比较显著,在质量浓度为200 g/L时的抑菌率分别为61.2%,31.2%,最低抑菌质量浓度均为6.25 g/L,且它对腐皮镰孢菌抑制的EC50仅为99.3 g/L。苦参的70%乙醇浸提液对尖镰孢菌的抑制效果也达到50%以上。     

两株松材线虫拮抗细菌的筛选和鉴定

【目的】筛选对松材线虫具有较高杀线活性的拮抗细菌。【方法】以分离自南京、洛阳、上海的松树茎部的137株内生细菌为研究对象,采用培养滤液和菌悬液浸渍法对这些菌株进行杀线活性的测定,并对筛选的高效拮抗细菌进行菌种鉴定。【结果】通过培养滤液浸渍试验筛选出3株细菌对松材线虫有较高的杀线活性,使用3种菌滤液处理线虫48 h后,线虫死亡率均达到100%,其中菌株LYMC-3的培养滤液还可使线虫虫体出现消解。将3株菌的培养滤液分别稀释2倍、4倍和10倍后处理松材线虫,随稀释倍数的增加,培养滤液的杀线活性逐渐降低。处理线虫48 h后,菌株LYMC-3的10倍稀释滤液与其他两株菌滤液相比对线虫的致死率最高,为94.7%; 在菌悬液浸渍试验中筛选出菌株NJSZ-13对松材线虫有较高杀线活性,10⁵ cfu/mL 浓度的菌悬液处理线虫48 h后,线虫死亡率达81.5%。通过对LYMC-3和NJSZ-13菌株的形态特征、生理生化特征、Biolog鉴定和16S rDNA序列以及系统发育分析,确定菌株LYMC-3、NJSZ-13分别为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)和蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。【结论】从松树体内筛选到两株对松材线虫有高效拮抗活性的菌株LYMC-3和NJSZ-13,对生物防治松材线虫病具有潜在的应用价值。     

黄瓜灰霉病拮抗菌的筛选鉴定及其抑菌特性研究

从石家庄地区多个蔬菜大棚的根际土壤分离筛选到一株高效生防菌F1-2,对黄瓜灰霉病菌的抑菌圈直径高达33mm。根据菌株F1-2的形态特征、生理生化特性以及16SrDNA序列对其进行鉴定,初步确定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。采用生长速率法对拮抗菌的抑菌谱进行测定,其对所选的16种病原菌均有很好的抑制作用。实验还对拮抗菌F1-2的抑菌特性进行了研究,菌株连续传代至10代抑菌性能保持不变,菌株的发酵液对热和酸碱都比较稳定。该菌株的代谢产物具有广谱抑菌活性和较强的稳定性,具有开发成为灰霉病生防制剂的潜力。     

一株当归根腐病拮抗菌株的筛选、鉴定及培养条件优化

本研究从河西走廊盐碱土中分离得到的多株对植物病原菌具有拮抗活性的细菌菌株中,筛选当归根腐病拮抗菌株,为当归根腐病的生物防治提供适合的菌种资源.采用平板对峙、琼脂扩散法筛选拮抗细菌,通过形态学、生理生化试验及分子生物学鉴定法确定菌株分类学地位;以活性物质稳定性试验为基础,设计单因素试验,响应面分析法优化培养条件.结果表明:菌株A17-2-1具有较好的当归根腐病拮抗活性,且抗菌谱较广,经鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis);其活性物质在高温、强碱及紫外照射下均具有较好的稳定性;最优培养条件为p H8.5、温度32℃、氯化钠含量0.5%,在此条件下培养24 h,菌株A17-2-1菌悬液在波长600 nm处吸光度值为1.360,且在该条件下对两株当归根腐病病原菌的抑菌率均达到81.01%以上.     

产维生素K2贝莱斯芽孢杆菌ND的诱变育种及突变子快速筛选

本研究旨在探索贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ND诱变育种的最佳条件,确定原生质体的最佳制备条件和融合条件.结果表明,紫外灯下50cm处诱变30s涂布于2.0%LiCl平板的复合诱变,最有利于获得VK2产量提高的突变子.溶菌酶0.1mg/mL于33℃下保温20min,原生质体再生率最高,为41.2%;65℃热处理10min或紫外处理40s,原生质体的灭活率可达到100%;40%PEG-6000在37℃下处理6min原生质体融合频率最高,为9.8%.本研究将分光光度法测定与HPLC法测定提取液中维生素K2(VK2,MK-7)的含量相结合构建了一种可快速筛选产VK2突变体的方法,最终获得一株VK2产量提高31.42%的突变菌株.另外也为贝莱斯芽孢杆菌的诱变育种和原生质体制备提供了研究基础.     

生防芽孢杆菌对半夏根际土壤酶活性及产量的影响

采用大田实验的方法,研究三株对植物枯萎病具有较强抑制作用的Bacillussubtilis B579、Bacillus amyloliquefaciens 9-2、Bacillus subtilis 2-1三株菌对半夏根际土壤关键酶活性的影响.研究结果表明,生防菌的施入能显著提高半夏根际土壤中过氧化氢酶、碱性磷酸酶、脲酶和几丁质酶等4种与土壤肥力相关的酶活性,且施入生防菌处理组的产量相比对照组和空白组明显较高.     

生防菌BC2001对番茄根结线虫的生防研究

人工培养番茄根结线虫茎部结瘤，通过盆钵、电镜扫描试验直观评估BC2001菌的生防能力。结果表明，BC2001菌能使茎结瘤消减，且植株生长良好；从扫描电镜上看，BC2001菌可以在结瘤中定殖，并附着在虫体上，同时造成虫体缢缩死亡。     

内生芽孢杆菌防治植物病害的应用及作用机制研究进展

植物内生细菌由于其独特的生境,成为植物病害防治中的重要生防因子.芽孢杆菌在植物体内分布具有广泛性和多样性,其在防治病害和促进植物生长发育方面的作用被广泛研究和应用.芽孢杆菌控制植物病害的作用机制主要包括竞争、拮抗、促进植物生长和诱导植物抗病性四个方面.植物诱导抗性作为植物内生细菌防病的主要机制之一,具有非特异性、广谱性和系统性,在植物病害的生物防治中可被广泛应用.     

烟草黑胫病与青枯病生防芽孢杆菌筛选

烟草黑胫病与青枯病是贵州省黔西南州安龙县烤烟上主要根茎病害。为筛选防治烟草黑胫病与青枯病的芽孢杆菌,从安龙县烟草黑胫病与青枯病混合发生地块采集健康烟株根际土壤,分离到根际芽孢杆菌662株。采用平板对峙法筛选同时拮抗这2种病菌的芽孢杆菌。结果表明,2株芽孢杆菌具明显拮抗烟草黑胫病菌(Phytophthora nicotianae)与青枯病菌(Ralatonia solanacearum)的能力,通过形态学、生理生化测定及分子生物学鉴定,2株芽孢杆菌均为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。本研究为贵州烟草生防制剂的研发打下基础。