盐生杜氏藻Dunaliella salina的生物学特性与培养研究

盐生杜兵藻富含β－胡萝卜素和蛋白质，适宜在高纬度、光照强的各种咸水环境中生长，对它的生物学特性和培养条件进行了研究，发现适宜于盐生杜氏藻生长的培养基主要成分为：２ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ，５ｍｍｏｌ／ＬＫＮＯ３，６．５ｍｍｏｌ／ＬＮａＨＣＯ３，５ｍｍｏｌ／ＬＭｇＳｏｒ，０．３ｍｍｏｌ／ＬＫＨ２ＰＯ４。     

杜氏藻中β—胡萝卜素的提取分离

从盐生杜氏藻中提取分离得β-胡萝卜素，探讨了不同提取条件对收率的影响．     

不同氮源对盐生杜氏藻生长和β-胡萝卜素积累的影响

研究了 Ｎａ Ｎ Ｏ３、 Ｎ Ｈ４ Ｃｌ和脲 ３ 种不同氮源对盐生杜氏藻生长和 β胡萝卜素积累的影响．结果显示,在０．０５～０．５ ｇ／ Ｌ 浓度范围内,较高浓度 Ｎａ Ｎ Ｏ３ 对杜氏藻生长有利． Ｎ Ｈ４ Ｃｌ对杜氏藻的生长有毒害作用,０．２ ｇ／ Ｌ 的浓度即对杜氏藻生长有明显抑制作用,脲在０．１～１．８ ｇ／ Ｌ 的浓度范围内对杜氏藻的生长有促进作用．但当脲浓度达到 ３．０ ｇ／ Ｌ 时,生长速度又有所下降;杜氏藻细胞中β胡萝卜素积累量与培养基中 Ｎａ Ｎ Ｏ３ 浓度成反比．在室外强光照下,以 ０．１ ｇ／ Ｌ 低浓度脲和 Ｎａ Ｎ Ｏ３ 作为氮源,杜氏藻细胞均可积累较高的 β胡萝卜素含量．本文的实验结果提示,低浓度脲有利于杜氏藻细胞生长和 β胡萝卜素积累,可作为良好的氮源．     

盐生杜氏藻(Dunaliella Salina)大量培养条件的优化研究

采用正交试验法对盐生杜氏藻的扩大培养条件进行优化研究,结果表明:在培养基pH值为9,温度为32℃,光照强度为10 000lx,接种密度为0.30,培养基配方为J/L培养基的条件下,有利于杜氏藻的生长,可适用于大型工业化培养生产.     

五种(株)杜氏藻β-胡萝卜素含量比较的初析

本文培养了5种(株)杜氏藻,诱导其生成β-胡萝卜素,并测定了这5种(株)杜氏藻中β-胡萝卜素的含量和变化规律.结果表明,在这五种杜氏藻中,D.bardawil var.w-8-1的β-胡萝卜素含量最高,高达藻干重的6.6%;而D.primolecta的β-胡萝卜素含量最低,只占藻干重的0.7%.还发现,在所研究的5种(株)杜氏藻中β-胡萝卜素含量与培养时间均呈对数关系.本研究结果为开发和利用杜氏藻中的β-胡萝卜素资源,提供了理论依据.     

盐生杜氏藻同步化及细胞周期的研究

盐生杜氏藻是一种海洋生活的单细胞藻类，细胞中具有细胞核，叶绿体等细胞器，细胞呈椭圆形，直径在15～20μm，人工配制的海水中培养。由于具有叶绿体，能进行光合作用，因此可以用光暗交替处理，诱导细胞同步法。Lor等人[1]报导用光暗交替诱导小眼虫得到较好的同步化结果，他指出对衣滴虫、小球藻。异变形藻等都可以用光暗交替法诱导同步化。盐生杜氏藻使用此法诱导同步化，并测定同步化后细胞周期，这方面还未见详细报道。本文就此作初步探讨。1材料与方法1.1盐生杜氏藻：来自山东海洋大学赠送，定名为Dunaliellabolt。a，采用人工配制…     

富含β-胡萝卜素杜氏藻的紫外线诱变筛选

以本实验室保存的7种(13株)杜氏藻为材料,筛选出β-胡萝卜素含量较高的藻株Dunaliella.bardawil(1-7)进行紫外线诱变.以橙-红色藻落为初筛标志,再经高盐、强光、低氮诱导,检测其β-胡萝卜素含量,即复筛.发现突变株11-1具有高产β-胡萝卜素的能力,其β-胡萝卜素含量高达干质量的9.48%,显著高于原出发株.此外11-1的细胞体积是原出发株的5倍多,有利于养殖和收集.     

盐生杜氏藻大量培养条件的研究

阐述了大量培养盐生杜氏藻的有关条件：在培养过程中需要间断地通过ＣＯ２１０ｍｌ／ｓ；加入３０μｍｏｌ／ＬＥＤＡＴ、５０μｍｏｌ／ＬＦｅ＾３＋，０．５ｍｍｏｌ／ＬＭｇ＾２＋均可提高藻体的生长，对β－胡萝卜素的积累有利；在培养过程中需加０．３ｍｍｏｌ／／的脲素作为氮源，也有利于藻体的生长。     

杜氏盐藻(Dunaliella salina)对重金属铜胁迫的生理响应

将不同质量浓度的CuCl_2溶液添加到培养基中,研究重金属铜对杜氏盐藻(Dunaliella salina)胁迫的生理响应.分别用不同质量浓度的CuCl_2溶液培养盐藻,检测盐藻的光合色素、可溶性多糖、蛋白质、SOD及MDA质量浓度的变化.结果显示,铜可抑制盐藻细胞的生长,且呈剂量-效应关系,72 h的EC50为9. 55 mg/L.随着铜质量浓度的增加,各质量浓度组盐藻细胞内叶绿素a、b、总叶绿素、类胡萝卜素、多糖和蛋白质质量浓度均显著性降低(P 0. 05或P 0. 01).铜可导致盐藻细胞氧化损伤,随着铜质量浓度的升高,SOD活力先升高后降低,MDA质量浓度升高.表明铜可以抑制盐藻细胞内光合色素、多糖和蛋白质的合成.盐藻对铜胁迫的响应机制可能是通过抗氧化防御系统.     

盐生杜氏藻碱性蛋白的研究

以一种单细胞的盐生杜氏藻为实验材料，利用化学和机械的方法破碎细胞，然后梯度分离细胞核，用盐酸抽提细胞核蛋白质，并与小牛胸腺组蛋白相比较。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析测定所得的碱性蛋白发现盐生杜氏藻核中有三条碱性蛋白带，两条蛋白带与Ｈ３与Ｈ４相对应，另一条分子量很小。     

流加培养对杜氏盐藻生物量的影响

将微生物工程中的流加培养技术嫁接引用到海洋微藻的培养,对海洋微藻杜氏藻(Dunaliella salina)进行了分批培养、恒速流加培养和变速流加培养三种方法的比较实验。在采用流加技术培养杜氏盐藻中,建立了流加数学模型控制流加。实验结果表明:采用恒速流加培养技术和变速流加培养技术均可明显提高杜氏盐藻的生物量,在变速流加培养方式中,当流加因子A=0.194时,变速流加培养比分批培养方式中杜氏盐藻的生物量增加7~8倍。     

氮、磷、硫对盐生杜氏藻色素积累的影响

研究了盐生杜氏藻(Dunaliella salina)在不同浓度氮、磷、硫等营养条件下对细胞积累β-胡萝卜素和叶绿素的影响．发现盐生杜氏藻细胞经过10d生长,在营养缺乏条件下其β-胡萝卜素和叶绿素的比率达到最大,积累β-胡萝卜素的最适条件是无氮、无磷和无硫,但是不利于盐生杜氏藻的生长．讨论了此结果的机理和意义,为利用盐生杜氏藻大规模生产β-胡萝卜素提供了理论依据．     

盐度对盐生杜氏藻叶绿体超微结构的影响

研究不同盐度对盐生杜氏藻（ Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａｓａｌｉｎａ（ Ｄｕｎａｌ．） Ｔｅｏｄ ．） 叶绿体超微结构的影响．结果显示,在ＮａＣｌ 浓度为２ ．７ ｍｏｌ／Ｌ 的培养液中,其叶绿体为典型的杯状结构．在ＮａＣｌ 浓度从２ ．７ ｍｏｌ／Ｌ 增加到４ ．３ ｍｏｌ／Ｌ时,其杯状叶绿体逐渐离解为多个相互连结或分离的部分;叶绿体内的类囊体片层系统解体并出现大量的嗜锇质体小球;在分离的叶绿体间隙中形成多个线粒体．在培养液的ＮａＣｌ 浓度逐步从４ ．３ ｍｏｌ／Ｌ 降低到２ ．７ ｍｏｌ／Ｌ后,盐藻的叶绿体又逐步恢复为典型的杯状结构．由此可知,不同盐度下盐藻叶绿体的结构变化是一个可逆的过程,这种可逆变化是盐藻得以在高盐度,强光照,易蒸发的自然环境中生存的一种适应机制．     

盐生杜氏藻的完整叶绿体分离

盐生杜氏藻(Dunaliella salina)是世界上最耐盐的一种单细胞真核绿藻,可在含0．1～5．0mol／L NaCl的培养液中正常生长．盐生杜氏藻细胞内的主要调渗物质是甘油,在甘油代谢途径中,3-磷酸甘油脱氢酶是一个关键酶．近年来的研究表明杜氏藻(Dunaliella tertiolecta)细胞质和叶绿体中都存在3-磷酸甘油脱氢酶的同工酶,且叶绿体上的同工酶与渗透调节作用直接相关,为了解D．satina中3-磷酸甘油脱氢酶同工酶的细胞定位和分布,我们通过冰浴超声波破碎和蔗糖密度梯度离心,获得盐生杜氏藻的完整叶绿体,用相差显微镜镜检、酶的活性分析等方法对其完整性作了初步分析。     

盐度对盐生杜氏藻叶绿素荧光参数的影响

本文研究了一次性培养过程中,不同盐度（15、30、60、90、120、150）对盐生杜氏藻PSII最大光能转化效率Fv/Fm、PSⅡ的潜在活性Fv/Fo、PSⅡ的实际光能转化效率ΦPSⅡ、相对光合电子传递效率rETR、叶绿素相对含量及细胞密度的影响.实验结果表明：盐度对盐生杜氏藻的光合作用及生长均有显著影响（P〈0.05）;盐生杜氏藻进行光合作用和生长的最适盐度都为90.相关性分析结果表明： 在整个培养周期中,Fv/Fm、叶绿素相对含量均与细胞密度呈显著的正相关关系.     

盐生杜氏藻中一个早期光诱导蛋白(Cbr)的序列分析及功能预测

高等植物及光合微生物在强光照射下会出现光氧化现象,从而引起光合效率降低,光合产物减少,当产生这种有害作用时,早期光诱导蛋白(early light-inducible proteins,ELIPs)迅速被诱导表达,并与游离的叶绿素、类胡萝卜素结合形成抑制三聚体,有效地阻止了游离氧对光合结构的进一步损害,早期光诱导蛋白的这种特性,对于研究光合生物在强光等特殊环境压力下的耐受机制具有一定的借鉴意义。     

盐生杜氏藻锰超氧化物歧化酶(MnSOD)在大肠杆菌中的功能鉴定

将极端耐盐的盐生杜氏藻(Dunaliella salina)的锰超氧化物歧化酶（DsMnSOD）基因克隆到表达载体pET32a中,并转入SOD缺陷型大肠杆菌菌株K12（SOD-）中,诱导重组蛋白表达,在耐盐、抗辐射和抗寒方面对其功能进行验证.结果显示,导入外源DsMnSOD基因的工程菌,在有氧条件下受到各种胁迫时,生长状况明显优于原菌,其耐受NaCl浓度从8%提高到10%,耐受紫外线（295nm,83μW/cm2）照射时间从45s提高到65s,4℃培养的存活率从10.7%提高19.0%,且SOD的     

五种盐藻生化组成及β-胡萝卜素异构体分析

对五种盐藻的蛋白质、脂类、碳水化合物、甘油、β胡萝卜素、叶绿素、某些矿物质及氨基酸的含量进行了全面测定。摸索和建立了一套从盐藻中提取、纯化β胡萝卜素的快速有效的方法，并对分离纯化的β胡萝卜素异构体及其在各藻中的含量作了分析测定，为有效开发利用盐藻提供了有价值的参考数据。