假交替单胞菌κ-卡拉胶酶的酶解工艺优化及产物分析

为探索假交替单胞菌κ-卡拉胶酶的酶解工艺,以κ-卡拉胶为底物,还原糖生成量为评价指标,对酶解工艺进行优化。采用3,5-二硝基水杨酸法和苯酚 硫酸法分别测定还原糖和总糖含量,计算酶解产物的平均聚合度,并利用质谱鉴定酶解产物。结果显示,假交替单胞菌κ-卡拉胶酶降解κ-卡拉胶的优化工艺条件为:加酶量为0.35 U（反应体系5 mL）,反应温度为40 ℃,反应pH=8.0,κ-卡拉胶底物质量浓度为9 g/L。在此条件下,酶解反应240 min后产生的还原糖质量浓度为1.531 g/L,酶解产物的平均聚合度为2。该κ-卡拉胶酶酶解反应的Km=2.07 g/L,Vmax=7.25 U/mg。质谱分析显示,假交替单胞菌κ-卡拉胶酶降解κ-卡拉胶的产物为κ-卡拉胶二糖和κ-卡拉胶四糖。     

琼枝和异枝麒麟菜中硫酸酯基多糖不同提取方法的化学分析比较

采用“直接水提法”以及“KCl分级法”来提取琼枝和异枝麒麟菜中的多糖．分别用蒽酮-硫酸法、间苯二酚法、明胶-BaCl2分光光度法测定多糖样品的总糖质量分数、3,6-内醚半乳糖质量分数、总硫酸基质量分数;用凝胶色谱法测定各多糖样品的相对分子质量分布情况：用GCMS测定麒麟菜硫酸酯基多糖的单糖种类及含量．结果显示采用“直接水提法”以及“KCl分级法”比传统的“碱处理法”产率高,而且硫酸基质量分数也明显增高．两种麒麟菜多糖均为硫酸酯基多糖,大部分都属于k-卡拉胶类．各多糖样品的相对分子质量分布在10^5左右．麒麟菜多糖主要是由半乳糖和3,6-内醚半乳糖组成,此外还含有少量的葡萄糖、木糖、塔罗糖和艾杜糖等,不同方法提取的多糖样品其单糖种类基本一致．     

坛紫莱多糖的分离纯化和结构分析（Ⅱ）

对广东产坛紫菜沸水提取多糖采用Sevag法脱蛋白,冻干后得粗多糖,得率为8%。在粗多糖溶中加入CTAB以沉淀除去酸性多糖PP1,超滤以纯化中性多糖PP2,PP2经DEAE-纤维素、葡聚糖凝胶G200进一步纯化。经纸层析、凝胶过滤及紫外光谱分析鉴定为纯品。通过红外光谱、气相色谱对PP2进行组成分析,再用化学方法测定其总糖,3,6-内醚-L-半乳糖及硫酸基的含量,分别为86.33%、5.425%和12.2%。最后通过高碘酸氧化,Smith降解等方法测定PP2的化学结构,结果表明,PP2由半乳糖、3,6-内醚-L-半乳糖、甘露糖、葡萄糖、木糖和阿拉伯糖组成,具有α,β型糖苷键,连接方式有（1→3）、（1→4）、（1→2）3种。PP1分子量通过凝胶过滤法初步测得为16.2万左右。     

紫菜多糖的提取及抗流感病毒活性研究

采用4种方法提取坛紫菜多糖,其中综合法提取率高达16.58%.气相色谱及化学分析表明其单糖主要由半乳糖、3,6-内醚-L-半乳糖、甘露糖和少量木糖组成.可溶性多糖经DEAE-23柱层析进一步纯化,得到蒸馏水洗脱组分———中性多糖和1.0-2.0mol LNaCl梯度洗脱组分———酸性多糖,各占4.12%和95.88%.酸性多糖经硫酸降解和超滤膜分离得到多糖组分F1(350030000),二者比例为4∶1.鸡胚实验表明,紫菜多糖具有抗甲1型流感病毒活性,且F1>F2>中性多糖.     

半乳糖-聚乙二醇-聚-L-赖氨酸共聚物的制备与分析

 将相对分子质量为4 000的聚乙二醇中活性较弱的羟基转化为氨基,利用乳糖分子中含有半缩醛结构,可与双端氨基聚乙二醇（AT-PEG）分子中的伯氨基形成Schiff 碱,然后在氰基硼氢化钠作用下选择性还原为稳定的C-N 单键,使半乳糖连接在PEG的一个氨基上,合成半乳糖-单端氨基聚乙二醇（Gal-PEG-NH₂）,以Gal-PEG-NH₂为大分子引发剂,引发N^ε-苄氧羰基-L- 赖氨酸-N-羧酸酐［Lys(Z) NCA］开环聚合制备一系列半乳-糖-聚乙二醇-聚-L-赖氨酸（PLL-PEG-Gal）嵌段共聚物,通过调节Lys(Z) NCA和 Gal-PEG-NH₂的摩尔比例（［A］/［I］）可控制聚合物的相对分子质量。利用IR、¹³C-NMR、UV等方法进行共聚物结构分析,并对其接糖率进行了分析。结果表明,乳糖与双端氨基聚乙二醇反应生成的带有一侧氨基的聚乙二醇能引发Lys(Z) NCA 聚合生成Gal-PEG-PLL,其中半乳糖的接入率为8.3%。随着［A］/［I］的增加,共聚物的相对分子质量变大。     

不同提取水温对龙须菜多糖的得率、组成和免疫活性的影响

系统研究了不同提取水温（30～100℃,温度梯度10℃,共8组）对龙须菜非胶体粗多糖的得率、多糖、蛋白、硫酸基、3,6内醚半乳糖、半乳糖含量的影响,并进一步比较了各组多糖的体外免疫活性和抗病毒能力。结果表明：不同提取水温对龙须菜非胶体粗多糖的得率影响显著（P〈0.01）,50℃提取水温组的粗多糖得率较高,蛋白含量较低（P〈0.01）,在30～50℃提取水温范围内,总糖含量显著上升;50℃水温组非胶体粗多糖的硫酸基含量显著高于40℃组,各组非胶体多糖的3,6内醚半乳糖含量在15%～20%之间,而半乳糖的含量则在30%～40%;各组非胶体多糖均表现出显著的体外免疫活性,其中50℃提取水温组的免疫活性显著高于其它各组,各组非胶体多糖均没有表现出抗疱疹病毒（HSV-Ⅰ和Ⅱ）活性。因此,综合多糖得率、生化组成及免疫活性,建议龙须菜免疫多糖的最佳提取水温为50℃。     

密脉鹅掌柴的化学成分研究(Ⅰ)

 对密脉鹅掌柴进行了化学成分研究.采用硅胶柱色谱、RP-C8柱色谱等方法分离化学成分,¹H NMR,¹³C NMR等方法进行结构鉴定,从中分离鉴定了4个化合物:14-羟甲基-3-氧-β-D-吡喃葡萄糖醛酸基(1^→2)-β-D-吡喃鼠李糖基齐墩果酸苷(1),绿原酸(2),异绿原酸C(3),莱蓟素(4).化合物1为新化合物,化合物2～4均为首次从该植物中分离得到.     

β-半乳糖苷酶诱导条件的研究

从市售不同品牌的普通酸奶中分离出6株乳杆菌,分别编号为YB1、YB2、YB3、YB4、YB5、YB6。通过镜检、革兰氏染色、过氧化氢酶反应、糖发酵反应等初步鉴定为保加利亚乳杆菌。对其一株菌产β-半乳糖苷酶的条件进行优化研究,采用乳糖进行不同浓度的诱导,结果表明当乳糖浓度为1.00%时的诱导效果较好;IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)是一种乳糖类似物,也可诱导菌株产生β-半乳糖苷酶,且其终浓度为0.8mM时的诱导效果较好;对两种诱导剂进行诱导效果的比较,表明应用0.8mM的IPTG可达到最佳诱导效果。     

苦瓜籽总甙体外抗HSV-Ⅰ和RSV活性研究

从苦瓜种子中提取苦瓜籽总甙,并测定了此总甙体外抗HSV-Ⅰ和RSV的活性．实验结果表明,0.375×10 -3g/mL苦瓜籽总甙药液可抑制HSV-Ⅰ对Vero细胞和RSV对Hep-2细胞的损害.且此浓度对正常Vero细胞和Hep-2细胞均无毒性作用.     

O-肉桂酰低分子量κ-卡拉胶的合成及抗氧化活性

对κ-卡拉胶进行盐酸降解得到低分子量κ-卡拉胶,与肉桂酰氯进行酰化反应,制得O-肉桂酰低分子量κ-卡拉胶.FT-IR、UV、1H NMR及13C NMR分析表明,肉桂酰基接枝到了低分子量κ-卡拉胶的分子链上.体外抗氧化性能测试结果表明,酰化产物对羟自由基和超氧阴离子自由基的清除能力明显提高.     

阿伐那非类似物的合成与表征

以4-(3-氯-4-甲氧基苄基氨基)-2-[(2S)-2-羟甲基-1-吡咯烷基]-5-嘧啶羧酸乙酯为原料,在VDMSO∶VTHF=1∶1的混合溶液中,水解成酸后,与不同的胺反应,合成了8种未见文献报道的阿伐那非类似物.所合成的产物经~1H NMR、~(13)C NMR、ESI-MS得到验证.     

Isolation, chemical characteristics and immunity activity of an extracellular polysaccharide EPSⅠ isolated from Antarctic bacterium Pseudoalteromonas sp. S-15-13

A new extracelluar polysaccharide (EPS) was isolated and purified from Antarctic bacterium S-15-13, identified as Pseudoalteromonas sp. After being separated and purified by DEAE-Sephadex A-50 ionexchange and Sephadex G-100 gel chromatography, two mains fractions (EPSⅠ and EPSⅡ ) were obtained. EPSⅠ was composed of mannose, glucose and galactose with a molecular weight of 23kDa and EPSⅡ was composed of mannose only with a molecular weight of 62kDa. The effect of the polysaccharide EPSⅠ on the cellular immune response of mice was investigated. Results demonstrated that EPSⅠ could markedly facilitate lymphocyte proliferation, and might be a strong immunomodulator.     

表观遗传试剂诱导滇重楼内生真菌 Hypomyces sp.CLG4次生代谢产物的研究

采用高效液相色谱(HPLC)分析添加HDACI,500μM恩提诺特的H.sp.CLG4.培养萃取物与对照的差异,硅胶柱层析、反相柱层析、半制备高效液相等色谱方法对添加表观遗传试剂的Hypomyces sp.CLG4.次级代谢产物进行分离纯化,并利用现代波谱分析方法对化合物进行结构鉴定.研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(his...     

中国跃度蝗属3新种（蝗总科：纲翅蝗科）

本文记述采自内蒙及黑龙江地区跃度蝗属3新种:宽径域跃度蝗Podismopsis ampliradiareas新种、二声跃度蝗P.bisonita新种及镜泊跃度蝗P.jinbensis新种。并首次记述呼盟跃度蝗P.humengensis Zheng ef Lian及宽翅跃度蝗P.amplipennis Zheng ef Lian的雌性。     

戟叶酸模非石油醚部位的化学成分研究

利用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱等方法对酸模属植物戟叶酸模(Rumexhastatus)的非石油醚部位进行分离和纯化,根据化合物理化性质以及波谱数据分析鉴定其结构.共分离得到7个化合物,分别为1-O-阿魏酰基-β-D-吡喃葡糖苷(1)、蔗糖(2)、酸模素(3)、酸模素-8-O-β-D-葡萄糖苷(4)、反式白藜芦醇(5)、反式白藜芦醇-3-O-β-D-葡萄糖苷(6)、β-谷甾醇(7).化合物1、2首次从该植物中分离得到.     

中药香附的化学成分研究

利用硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析及高效液相等多种方法对中药香附(Cyperus-rotundus L.)95％甲醇提取物的石油醚萃取物中的化学成分进行了研究,从中分离得到15个化合物.根据其理化性质和波谱数据鉴定所得化合物为倍半萜类化合物10个,分别为isonardoeudesmol C(1)、(...     

羊脆木树皮的化学成分研究(Ⅰ)

采用硅胶柱色谱、重结晶、高效液相色谱半制备法等方法,对羊脆木(Pittosporum kerrii Craib)树皮的氯仿、甲醇部位进行化学成分研究,分离纯化得7个单体,通过波谱分析鉴定其结构,分别为:β-stigmsterol(1)、β-stigmasterol-3-O-β-D-glucopyranoside(2)、ethyl caffeate(3)、2,6-dimethoxy-1,4-benzoquinone(4)、3-hydroxy-4-methoxybenzoic acid(5)、syringaresinol-4,4′-di-O-β-D-glucoside(6)、3,4,5-trimethoxyphenol-1-O-β-D-glucopyranoside(7),其中4、5为首次从该属中分离得到.细胞毒试验表明氯仿提取物及从其中分离出来的化合物3、4都具有明显的细胞毒活性,对K562细胞的IC50分别为3.7、4.0、3.0μg/mL.     

Paenibacillus sp. K1 β-半乳糖苷酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

从鲜牛奶中分离到1株产β-galactosidase的细菌,经16S rDNA序列比对鉴定为类芽孢菌Paenibacillus sp. K1。提取该菌株的染色体DNA,以pUC18（lac-）为载体,构建其DNA文库;在含有X-gal的LB平板上筛选该文库,得到6个蓝色菌落;对阳性克隆中插入的DNA片段序列测定,鉴定出1个编码全长为2028bp并携带有组成型启动子的β-半乳糖苷酶基因。将该基因导入大肠杆菌BL21（DE3）中,实现了β-半乳糖苷酶高效表达,其酶活为25.06U/mL,高于原始菌株的4.55U/mL,并进一步用亲和层析将该酶进行了纯化。     

岷江柏的化学成分研究(二)

目的:研究岷江柏的化学成分.方法:反复运用正相硅胶、Sephadex LH-20柱色谱分离提纯,经理化常数测定,结合IR、ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR等现代波谱学技术确定化合物结构.结果:从岷江柏乙醇提取物中分离纯化出7个化合物,分别鉴定为β-胡萝卜苷(β-daucosteol)1,槲皮苷(quercitrin)2,木犀草素(luteolin)3,柏黄酮(cupressuflavone)4,穗花杉双黄酮(amentoflavone)5,新柳杉双黄酮(neocryptomerin)6,7-甲氧基香豆素(hemiarin)7.结论:化合物1-7为首次从该植物中分离得到.