四种不同样品处理方法对人胎盘组织总RNA提取的影响

目的:比较四种不同样品处理方法对人胎盘组织总RNA提取的影响,为RNA提取时的组织处理方法提供实验依据。方法:将新鲜人胎盘组织按0.1g的重量分成相等的80份,按照随机原则分成4组,每组分别采取不同的处理方法后置于液氮罐中保存并于日后用Trizol法进行总RNA提取,通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计对RNA的浓度和纯度进行检测,所得数据进行统计学处理。结果:(1)提取成功率P0.05,差异无显著性意义;(2)琼脂糖凝胶电泳总RNA样品较为完整,基本无降解;(3)纯度(OD260/OD280值代表)P0.05,差异无显著性意义;(4)浓度P0.05,差异无显著性意义。结论:尚无足够的证据证明,不同的处理方法对用Trizol法从人胎盘组织中提取总RNA有影响,在实际工作中我们可以采取较为简便、节约的方法。     

液氮下三种抗冻液对保存猪皮活力的比较研究

目的：寻求一种在液氮条件下冻存猪皮的最佳冷冻保护剂.方法：将新鲜巴马香猪皮肤消毒处理后分为3组,分别用A.20%二甲基亚砜（DMSO）、B.20%二甲基亚砜＋6%丙二醇（PG）、C.20%二甲基亚砜＋6%丙二醇＋0.5 M海藻糖（Trehalose）3种抗冻液作冻存处理后直接投入液氮保存,于15 d、30 d后复温进行活力检测.结果：0.5 mol/L海藻糖与二甲基亚砜、丙二醇联合作为抗冻液所处理的猪皮,复温后其活力明显高于其它两组.结论：海藻糖能有效提高低温储存皮肤的活力,医院在保存皮肤时可以在抗冻液中加入海藻糖以得到较高活力的猪皮用于临床.     

液氮下三种抗冻液对保存猪皮活力的比较研究

目的：寻求一种在液氮条件下冻存猪皮的最佳冷冻保护剂.方法：将新鲜巴马香猪皮肤消毒处理后分为3组,分别用A.20%二甲基亚砜（DMSO）、B.20%二甲基亚砜＋6%丙二醇（PG）、C.20%二甲基亚砜＋6%丙二醇＋0.5 M海藻糖（Trehalose）3种抗冻液作冻存处理后直接投入液氮保存,于15 d、30 d后复温进行活力检测.结果：0.5 mol/L海藻糖与二甲基亚砜、丙二醇联合作为抗冻液所处理的猪皮,复温后其活力明显高于其它两组.结论：海藻糖能有效提高低温储存皮肤的活力,医院在保存皮肤时可以在抗冻液中加入海藻糖以得到较高活力的猪皮用于临床.     

从磷酸蔗糖固定OCT包埋冰冻5年的组织中提取RNA

目的磷酸蔗糖固定后OCT包埋冰冻保存5年的组织中提取RNA。方法小鼠的脯、肝、肾等组织，经25％蔗糖磷酸缓冲液固定12～24h后，制备成OCT包埋块，在-20℃冰箱中保仔5年后，取出冰冻的OCT包埋组织进行RNA提取，用凝胶电泳、紫外分光光度计及RTPCR等方法检测所提取的RNA。结果从经25％蔗糖磷酸缓冲液固定冰冻保存5年OCT包埋组织中能提取RNA，所提RNA仍保持较好的完整性，可用于进行TR-PCR，并能扩增出较长的片段。结论从25％蔗糖磷酸缓冲液固定OCT包埋的冰冻时间较长的组织标本中可提取组织RNA，并用于进行RT-PCR扩增。     

加压下采用自主研发保存液及不同保存方法对半月板保存的研究

为探讨加压环境下采用不同保存方式及自主研发半月板保存液对半月板保存的最佳方法,用成年山羊20只,共提供40只半月板,将其随机分为4小组分组保存(A组:①自主研发保存液组(国家发明专利号为:201110188468.4),②UV保存液组,③α-MEM保存液组;B组:梯度降温加-80℃低温冰箱保存),定期取部分半月板组织进行组织学、组织化学、细胞存活率及免疫组织化学检测.A组的自主研发保存液组和B组经过冷冻保存1、3、6、9周后,胶原纤维排列规则、紧密,纤维粗细均匀,横纹清晰.半月板纤维软骨细胞形态基本正常,半月板纤维软骨细胞基质黏多糖含量丰富,细胞存活率较高;A组中UV保存液组、α-MEM保存液组组经过保存后细胞大多出现基质中黏多糖含量降低,细胞器结构不清,细胞存活率低.在所有保存组中,自主研发保存液组半月板保存效果更好.说明自主研发保存液组有利于保持半月板中纤维软骨细胞的活性,对半月板损伤更小.在半月板纤维软骨细胞存活率方面,自主研发保存液组和UV保存液组、α-MEM保存液组的差别有统计学意义(P＜0.05),自主研发保存液组和- 80℃低温保存对维持半月板纤维软骨细胞活性无明显区别,但保存更方便,保护作用更强.     

长爪沙鼠不同组织基因组DNA的提取条件比较

目的建立长爪沙鼠基因组DNA的提取方法并对其脑、肝、肾和肌肉组织中的基因丰度进行比较。方法采用酚-氯仿法对不同消化温度和不同蛋白酶K浓度处理的各种组织提取DNA,比较其OD260/OD280值、DNA和蛋白质含量。结果提取DNA时温度和酶浓度对不同组织的DNA和蛋白质含量的影响不同。肾DNA样品中的蛋白质含量在低酶浓度组明显低于高酶浓度组,低酶浓度组的肾和肝DNA样品中的蛋白质含量均明显低于高酶浓度组。消化温度对提取肌肉组织的DNA含量影响较大,而从肾和肝组织中提取的DNA含量在37℃和50℃消化组之间没有差异。肝组织中的基因丰度最高,而肌肉组织中的基因丰度最低。结论提取DNA时,消化温度和酶浓度对提取不同组织的DNA和蛋白质含量有不同程度的影响。不同组织的基因丰度差异较大。     

液氮超低温冻结对梭子蟹品质的影响

用液氮超低温冻结技术,采用2min降温至-90℃、5min降温至-90℃、2min降温至-70℃三种不同降温速率,将三疣梭子蟹分别冻结至中心温度-25,-35,-45,-55℃;后贮藏在-20,-35,-40℃的条件下,以硫代巴比妥酸(TBA)值、挥发性盐基氮(TVB-N)值、总巯基含量、盐溶性蛋白含量等为指标,比较不同处理对梭子蟹蟹肉的品质影响,为研究液氮超低温冻结技术及梭子蟹最佳品质保持技术提供理论支持。结果表明:随着中心温度的降低和冻结速率的加快,总巯基含量和盐溶性蛋白含量降低趋势均减缓,TBA值和TVB-N值均逐渐降低,中心温度冻结至-25℃的样品的TVB-N值为15.85mg/100g,而冻结至-55℃的样品仅12.99mg/100g;-35℃贮藏条件下样品的TVB-N值和TBA值都比-20℃和-40℃贮藏的样品低。研究可知,2min柜内降温至-90℃,中心温度-55℃,-35℃冷库贮藏,比较有利于梭子蟹液氮冻结贮藏。     

水溶性丝素蛋白的制备及其构象转变

通过液氮淬冷和冷冻干燥的方法获得了粒度均一、直径为3～4 mm的水溶性丝素蛋白微珠,并将丝素蛋白微珠分别进行室温保存、-20℃下保存和乙醇浸泡等不同方法处理。通过扫描电子显微镜(SEM)、傅里叶变换红外光谱仪(FT-IR)和X线衍射仪(XRD)等分析技术表征丝素蛋白微珠的形貌、构象和晶相组成。结果表明:液氮淬冷和冷冻干燥制备的丝素蛋白主要为无规线团结构,易溶于水;在室温和-20℃下放置1周后的丝素蛋白发生了由无规线团向β-转角、α-螺旋和β-折叠等构象转变,水溶性变差;经乙醇处理后的丝素蛋白因含有大量的β-折叠构象则不溶于水。     

高山红景天花粉的超低温保存

对来自大兴安岭、长白山的高山红景天花粉进行了超低温保存研究。结果表明:不同的干燥时间对超低温保存后花粉萌发力有明显影响,12 h干燥处理的花粉萌发力明显高于8 h、24 h干燥处理的;用0℃(8 h)→-10℃(8 h)→-20℃(8 h)变温预冻处理能大幅提升超低温保存后花粉的萌发力;超低温保存后的解冻方式以-20℃(8 h)→4℃(8 h)→25℃(8 h)为最佳。     

六种核酸提取试剂盒对粪样中小鼠肝炎病毒核酸 提取效率的比较

目的 比较六种商品化试剂盒在小鼠粪便中提取小鼠肝炎病毒(MHV)RNA的效率,筛选出效率高、耗时短的核酸提取方法。方法 采集感染MHV小鼠的新鲜粪便样本,分别用液氮研磨法、磁珠匀浆法以及PBS溶解离心法进行处理,通过同一核酸提取试剂盒比较病毒核酸提取效率,明确最佳样本前处理方法;之后,用6种试剂盒进行RNA提取,经反转录后进行TaqMan实时定量PCR检测,以Ct值评价6种试剂盒的提取效率,结合产物测序和血清抗体ELISA结果,筛选MHV的最佳核酸提取方法。结果 对于粪便样本的前处理,液氮研磨法的RNA提取效率显著高于磁珠匀浆法。对于6种试剂盒的提取效果,TIANGEN DP422[总RNA浓度：(549.70±52.38) ng/μL,Ct值：(24.51±0.10)]核酸提取效率最高;TIANGEN SD101[总RNA浓度：(274.13±6.87) ng/μL,Ct值：(2.39±0.017)]和QIAGEN 52904[总RNA浓度：(288.13±15.11) ng/μL,Ct值：(2.40±0.012)]用时最短;XS VRL[总RNA浓度：(348.80±15.85) ng/μL,Ct值：(24.70±0.13)]操作最为方便。结论 粪便样本前处理建议采用液氮研磨法。针对粪便中MHV RNA的提取,TIANGEN DP422提取效率最高,推荐用于小鼠肝炎病毒的分子生物学检测。