人输卯管组织与小鼠胚胎共培养的初步观察

为了检测人输卵管组织共培养系统对胚胎早期体外发育的影响,将超排得来的小鼠2细胞期胚胎与人输卵管组织共培养,或以人输卵管组织培养后的条件培养液进行培养。培养液为Ham's F10+10％FCS,并以其作为对照培养液。实验结果显示:无论是组织共培养或是条件培养液共培养,胚胎体外发育达囊胚率,胚胎逸出透明带率及胚胎的发育速度都较F10对照组高。其中输卵管壶腹部组织共培养及其条件培养液共培养对胚胎发育的促进作用较峡部大,而且其条件培养液共培养是以组织培养一周内所得的条件培养液效果最好。组织共培养和条件培养液共培养发育的胚胎正常分裂,没有差别,形态也均正常。实验提示人类输卵管上皮可能分泌某种因子能促进胚胎发育。     

人输卵管上皮细胞共培养系统对小鼠胚胎体外发育的影响

常规体外培养的胚胎桑椹胚以上发育率低,胚胎质量不高及移植环境不适合可能是导致IVF-ET成功率低下的原因。目前,国外一些实验室尝试将多种哺乳动物乃至人的胚胎与输卵管组织或上皮细胞进行共培养,发现有促进胚胎体外发育及提高妊娠率的作用,本课题组将人输卵管上皮细胞与小鼠胚胎共培养,观察其对胚胎体外发育及胚胎质量的影响。结果显示：共培养的胚胎24h后大部分发育到4细胞期以上,发育快的已达桑椹胚。培养48h后共培养的胚胎大部分发育成桑椹胚,有些已开始形成囊胚腔。到72h,正常发育的共培养胚胎形成囊胚和孵出囊胚。3个观察…     

原代和传代培养的人输卵管上皮细胞对小鼠胚胎体外发育的影响

为了检测人输卵管上皮细胞对早期胚胎体外发育的影响，将小鼠２细胞胚胎与人输卵管上皮细胞进行体外共培养．结果显示：无论原代培养还是传代培养的人输卵管上皮细胞都可使胚胎发育率提高，发育速度加快．经传代４次以后的细胞对胚胎发育的促进作用有下降的趋势，所以传代第１至第４代是应用于共培养的最佳选择．同一代细胞中已贴壁稳定生长的细胞对胚胎发育的促进作用比刚经传代尚未贴壁的细胞大．     

多器官微流控芯片技术及其应用

器官微流控芯片技术通过模拟人体器官内环境来实现接近体内的体外细胞培养.基于微流控芯片器官模型的发展,构建多器官芯片整合的微流控系统为研究器官之间物质(如药物和外源性污染物)的代谢作用提供了崭新的平台.本文从不同的多细胞共培养系统角度介绍了构建多器官微流控芯片模型以及在预测和评估药物代谢及其对人体毒性测试等领域的应用,并对多器官微流控芯片技术的发展进行总结和展望.     

久效磷对小鼠早期胚胎体外发育的影响

采用小鼠早期胚胎的体外培养技术,研究了久效磷对小鼠着床前胚胎发育的影响。结果表明,剂量低于0.22mmol/L对小鼠早期胚胎无明显作用,剂量为0.34mmol/L时,70.6％的8细胞胚胎能发育至囊胚,剂量达0.45mmol/L,对小鼠早期胚胎有显著的毒害作用,只有5.7％可以发育至囊胚。在经久效磷处理的小鼠早期胚胎电镜照片上可以看到,细胞内网架结构保持完好,线粒体被破坏,数量变少,空泡变大、增多,细胞内不同结构对久效磷的敏感性有一定差异。     

原代和传代培养的人输卵管上皮细胞对小鼠胚胎体外发育的影响

体内精卵结合、早期胚胎发育是在输卵管中进行,人们将配子、早期胚胎进行输卵管内移植（GIFT、TET）,发现胚胎发育率和妊娠率都提高。体外模仿输卵管内环境的最好方法是将胚胎与输卵管上皮细胞或组织共培养。本实验用已建立的原代和传代培养的人输卵管上皮细胞分别与小鼠早期胚胎共培养,观察其对早胚发育的影响。胚胎与不同培养时间的人输卵管壶腹部上皮细胞共培养的发育状况见表1。表1人输卵管上皮细胞对小鼠胚胎发育的影响P：原代培养第5－6d细胞;S1－S5：传代1－5代培养第4－5d细胞;T2、T4：传代第2和第4代培养第id细胞,设此…     

基于双层光刻技术制备神经血管单元三细胞共培养微流控芯片

目的:应用双层软光刻技术和微流控芯片技术,制备以星形胶质细胞为桥梁,神经元-星形胶质细胞-脑微血管内皮细胞在同一立体空间或平面内肩并肩生长的微流控芯片.方法:(1)设计一种贯通三通道神经血管单元的体外共培养微流控芯片模型.(2)基于双层光刻技术制备芯片模板及神经血管单元共培养微流控芯片.(3)测算不同通道进样流速比.(4)在芯片内培养神经血管单元3种要素细胞.结果:(1)芯片内3个主流道的长度均为1 cm,高度均为45μm,中间主流道的宽度为570μm,两侧主流道的宽度均为500μm.设计流道间孔径的长度均为30μm,宽度和高度均为10μm,孔径的间距均为15μm.(2)甩两层光刻胶,第1层结构高度为10μm、第2层结构高度为35～40μm、总高度约为45μm的芯片模板进行后续试验.(3)A、B、C三通道进样流速比为5∶6∶5.(4)明场下神经元、星形胶质细胞和脑微血管内皮细胞在微流控芯片内以星形胶质细胞为桥梁背靠背生长.结论:本研究设计一种神经血管单元三细胞共培养微流控芯片,使3种要素细胞以星形胶质细胞为桥梁在同一平面肩并肩生长,能更好地模拟体内细胞所处的微环境,有助于细胞间相互作用...     

肉苁蓉水提液对猪早期体外发育胚胎中NO浓度含量的影响

目的探讨肉苁蓉水提液对猪早期体外发育胚胎中一氧化氮浓度的影响,以研究肉苁蓉促进猪胚胎发育的药理作用。方法将采集的猪卵母细胞随机分为试验组和对照组,试验组在胚胎培养时在基础液中加入50μg/mL肉苁蓉水提液。将培养至囊胚阶段的胚胎取出,用Griess试剂法测定囊胚细胞中NO含量。结果细胞中NO含量显著低于对照组(P<0.05)。结论肉苁蓉水提液减少了胚胎细胞中NO含量,这可能是其促进细胞体外发育的作用机理之一。     

成纤维细胞和ES细胞在小鼠和兔去核卵母细胞内发育

以昆明白小鼠成纤维细胞和胚胎干（ES）细胞作为供核细胞,以昆明白小鼠和日本大耳白兔的MⅡ期去核卵母细胞作为受体,采用核移植方法,构楚了克隆胚胎．在同种克隆中,以ES细胞为供核细胞的克隆胚胎卵裂率明显低于以成纤维细胞为供核细胞的克隆胚胎卵裂率（24．4％相对于56．9％,P〈0．05）,1．8％的ES细胞克隆胚胎发育到囊胚阶段,而成纤维细胞克隆胚胎没能发育到囊胚阶段;在异种克隆中,以ES细胞为供核细胞的克隆胚胎卵裂率（89．6％）和囊胚发育率（18．8％）明显高于以成纤维细胞为供核细胞的克隆胚胎卵裂率（54．2％）和囊胚发育率（4．2％）．     

用于细胞成像的便携型微流控芯片检测系统

针对微流控芯片检测装置普遍需要大型数码显微镜的问题,使用自行设计的一套嵌入式微流控芯片小型成像系统拍摄芯片管道中的细胞,并提出在该条件下细胞自动检测与识别的算法。首先,用球形波进行图像背景校正,然后用基于局部方差的直方图均衡化算法进行细胞目标增强,并作滤波和背景去除处理,最后用C anny算子检测细胞边缘并返回原图对细胞进行标记。结果表明:小型的微流控芯片检测系统和处理方法可以使整个片上系统实现更高的集成化、自动化和便携性。     

转基因和再克隆对克隆胚胎细胞凋亡的影响

细胞凋亡在着床前胚胎发育过程中发挥着重要作用,胚胎凋亡检测能为获得高质量的体细胞克隆胚胎提供有益信息,进而有助于提高克隆效率.用原位末端标记法对牛的转基因克隆和转基因再克隆囊胚进行了细胞凋亡检测,再克隆囊胚是利用转基因克隆牛的体细胞作为供体细胞进行体细胞核移植后获得的第二代克隆胚胎.结果表明转基因克隆胚胎的囊胚发育率显著低于非转基因克隆胚胎的囊胚发育率,而转基因克隆囊胚的细胞凋亡指数显著高于非转基因克隆胚胎的细胞凋亡指数.此外,转基因再克隆胚胎的囊胚发育率和胚胎细胞凋亡指数与非转基因克隆胚胎的囊胚发育率和胚胎细胞凋亡指数相比差异性不显著.结果表明早期的转基因克隆胚胎发育能力的减弱可能是由于供体细胞的基因转染和药物筛选过程导致的,而再克隆对其早期胚胎的发育能力没有负面影响.     

卵细胞体外成熟(IVM)在小鼠生物净化中的应用

目的 在小鼠生物净化中,从超排后未排卵的卵巢,取卵泡内未成熟卵采用卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)使之在体外成熟并具备受精能力,以提高卵子利用率和作为常规促超排失败的一种补救措施。方法 在小鼠生物净化中,取注射PMSG和HCG后未排卵卵巢,在实体显微镜下划破卵泡挑选卵丘卵母细胞复合物(COCs),置于成熟液滴中在体外发育成熟。同时以注射PMSG和HCG后正常超排卵、只注射PMSG后取未成熟卵体外成熟和注射PMSG和HCG后取疑似成熟卵和裸卵体外成熟作为对照。经体外受精、体外胚胎发育后,将2-细胞胚移植到受体输卵管,使其在受体内发育成为成熟的个体。结果 注射PMSG和HCG后未排卵组(A组),卵细胞体外成熟率为87.0%±3.2%,二胞率为55.1%±12.3%,囊胚率为23.1%,移植41枚二细胞胚至2只受体鼠,出生5只幼崽,产仔率12.2%。只注射PMSG,48 h后取未成熟卵组(B组),体外成熟率为83.9%±3.9%,二胞率为51.8%±9.3%,囊胚率为38.5%±13.9%。注射PMSG和HCG正常超排组(C组),其二胞率为78.9%±0.6%,囊胚率为78.0%±3.8%。注射PMSG和HCG未排卵卵巢,取裸卵和疑似成熟卵(D组),体外成熟培养0 h,6 h和16～18 h,其成熟率、二胞率和囊胚率与其它三组相比均较低且有极显著性差异。A组和B组与正常对照C组相比,二胞率均有显著性差异,囊胚率均有极显著性差异。结论 卵母细胞体外成熟(IVM)可以作为小鼠生物净化中促超排失败的一种补救措施,并且可以提高珍稀品系小鼠的卵子利用率。     

静电场对小鼠胚胎发育能力的影响

首次报道哺乳动物胚胎经静电场处理后对＂细胞阻滞＂和后期发育能力的影响．结果表明，用静电场处理小鼠体外受精卵和２细胞胚胎时，对克服小鼠＂２细胞阻滞＂无显著影响．处理发育于Ｍ１６＋１００μＭＥＤＴＡ＋输卵管上皮的２细胞胚胎时，显著提高了胚胎的发育能力，最佳处理剂量的囊胚率从４２％提高到６４％，囊胚孵化率从２０％提高到４５％．     

国产试剂配制的培养液对小鼠早期胚胎培养效果的研究

本实验用 Whitten 的小鼠早期胚胎培养法验证了国产试剂配制培养液对小鼠早期胚胎体外培养的效果。实验表明,在用国产试剂配制的小鼠早期胚胎培养液中,2—细胞胚胎能正常发育到囊胚阶段。     

小鼠四倍体半克隆胚胎发育研究

半克隆(Semi-Cloned)胚胎是通过注射体细胞核到未去核的卵母细胞中产生的。在半克隆胚胎中,体细胞被用来作为精子的替代物。然而,由于异常的染色体分离,构建的半克隆胚胎在激活后形成了非整倍体而导致胚胎发育受到严重影响,不能发育到期。本研究通过抑制小鼠半克隆胚胎在激活过程中染色体数目减半,避免非整倍体胚胎形成,研究四倍体半克隆(TetraploidSemi-cloned,TSC)胚胎的发育和体细胞核的掺入对胚胎发育的影响。结果显示,TSC胚胎的体外发育率显著高于二倍体半克隆胚胎,与正常受精卵及孤雌激活对照无显著性差异,但TSC胚胎的细胞数在桑椹胚和囊胚期比正常二倍体受精胚胎和孤雌激活胚胎少。通过Oct-4染色发现,TSC胚胎囊胚期内细胞团(InnerCellMass,ICM)细胞很少或者没有。移植63个四倍体半克隆胚胎到3只假孕母鼠体内,得到20个胎盘,但没有得到胎儿。组蛋白乙酰化和DNA甲基化检测显示,部分TSC胚胎在囊胚期没有形成正常受精胚胎在ICM和滋养外胚层(Trophectoderm,TE)之间的差异分布。TSC胚胎的基因表达不依赖于细胞分裂次数而依赖于发育时间。虽然TSC胚胎避免了二倍体半克隆胚胎形成非整倍体现象,但由于TSC胚胎没有ICM细胞或ICM细胞很少,所以只能形成胎盘而不能形成胎儿。本实验第一次较为全面地研究了TSC胚胎的发育,同时也为研究体细胞核再程序化、基因打靶技术提供了一种新的途径。     

冷冻中甘油对小鼠胚胎保护效果的研究

将小鼠２－细胞、４－细胞、８－细胞以及桑棋期的胚胎快速冷冻,以甘油作低温保护剂,浓度分别为０．５ｍｏｌ／Ｌ,１．５ｍｏｌ／Ｌ,２．５ｍｏｌ／Ｌ,３．５ｍｏｌＬ培养到囊胚阶段。结果表明：随着保护剂浓度的升高,胚胎发育率增加;在囊胚之前,发育程度越高,抗低温的能力越强,胚胎的发育率也就越高,各阶段组发育到囊胚期的胚胎经移植后均能得到正常发育的胎儿。     

基于微流控芯片的细胞共培养技术研究进展

细胞共培养技术一般用于研究细胞与细胞间的通讯机制,对揭示多细胞生物生理和病理过程具有重要意义.基于微流控芯片的细胞共培养技术能够模拟原生微环境以进行复杂的代谢和调控,为研究细胞与细胞间通讯提供了新的共培养技术平台,已经广泛应用于肿瘤转移及分析、抗癌药物筛选、药物吸收和药物代谢等领域.本文从微流控芯片上细胞共培养系统的设计、共培养系统上的检测以及模型的应用方面进行了总结和展望.     

小鼠囊胚发育阶段miRNA表达的研究

研究小鼠囊胚发育阶段miRNA的表达,探讨miRNA在着床前胚胎发育中的作用.采用miRNA芯片技术和RT-PCR方法,鉴定小鼠囊胚发育阶段miRNA的表达.在小鼠囊胚发育阶段共筛查到124个miRNA,其中包括与发育和细胞分化相关的miRNA let-7e、miR-125a和miR-181a.说明小鼠囊胚发育阶段表达大量的miRNA,有可能对着床前胚胎发育和分化过程起重要的调控作用.     

植入前胚胎的短期酒精暴露对植入后胚胎发育的影响

哺乳动物的早期胚胎发育对胚胎着床以及胎儿的长期生长发育都具有决定性作用.酒精对胚胎发育可以产生严重影响,但现有研究主要集中于产前胎儿酒精暴露,对早期胚胎(植入前)酒精暴露关注较少.为进一步阐明酒精导致的胚胎的发育异常机理,本研究利用体外胚胎培养模型,重点研究了酒精暴露对囊胚细胞谱系的分化和胚胎植入的影响.通过对谱系分化...     

稀土氧化物对小鼠胚胎体外发育和胚胎移植影响的初步研究

将稀土氧化物加入人胚胎常用体外培养液 Ham'sF-10中,对2细胞小鼠胚胎进行体外培养。发现稀土氧化物浓度为50～100ppm 时,胚胎发育速度及发育率明显高于 Ham'sF-10对照组,且发育加快现象在培养的24小时内己出现,浓度200ppm以上时,促生长效应逐渐减弱;800ppm 以上时,胚胎发育受抑制也在24小时内出现。将在 Ham'sF-10和含50ppm 稀土氧化物的 Ham'sF-10培养液中培养72小时后发育的囊胚分别移植入两组各9只受体母鼠,两组的受体产仔率没有显著性差别,仔鼠未见畸形或生长异常。