母婴配对血清中TT病毒的分子鉴定

为了解TT病毒（TTV）在我国母婴间传播的可能及分子病毒学依据，合成引物（引物1：5′－ACAGACAGAGGAGAAGGCAACATG－3′；引物2：5′－CTGGCATTTTACCATTTCCAAAGTT－3′；引物3；5′－GGCAACATGTTATGGATAGACTGG－3′），采用半套式聚合酶链反应（hemi-nested PCR）方法，检测了40对母、婴母对血清中的TTV DNA，并对TTV DNA均阳性的一对母婴配对血清中PCR产物进行测序和序列分析，结果发现：（1）在40例产妇血清中，有5例经半套式PCR检出了TTV DNA，检出率为12.5%；40例脐血中，检出TTV DNA阳性血清1例，阳性率为2.5%，脐血呈阳性的新生儿母亲静脉血中TTV DNA也为阳性。（2）母婴同时检出TTV DNA的血清PCR产物经测序后进行序列比对，二者病毒核苷酸序列的同源性为1005；与日本G2b型代表株核苷酸同源性为98.6%，属于G2b亚型，研究结果表明：TTV存在母婴传播途径，TTV可经胎盘垂直传播。     

PCR检测白血病患者外周血中EB病毒的DNA

目的：了解白血病患者ＥＢ病毒感染情况。方法：收集２１例急性淋巴细胞白血病、１例慢性淋巴细胞白血病、１５例急性粒细胞白血病、８例慢性粒细胞白血病患者及３２例正常对照组的外周血,分离单个核细胞,提取ＤＮＡ,应用ＰＣＲ方法检测ＥＢ病毒ＤＮＡ。结果：在１例初诊慢性粒细胞白血病病人样本中发现ＥＢ病毒阳性,余均为阴性。结论：白血病患者存在ＥＢ病毒感染情况,但并不普遍。     

从中国非甲—庚型肝炎病人中克隆到TT病毒样DNA序列

从中国非甲－庚型肝炎病人中克隆到ＴＴ病毒样ＤＮＡ序列张军１杨海杰１苏智军２张奕返２林长青１黄鹤１郭庆１王颖１曾定１夏宁邵１（１厦门大学肿瘤细胞工程国家专业实验室厦门３６１００５２福建省泉州市第一医院泉州３６２０００）肝炎是严重危害我国人民身体健康的疾...     

用PCR产物制备探讨针检测EB病毒

目的：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）产物制备地主辛标记探针，通过斑中杂交检测鼻咽癌患咽拭子、活检组织及血标本中ＥＢ病毒ＤＮＡ。方法：按献「４」的方法，以Ｂ９５－８ＤＮ为模权进行ＣＰＲ，用ＰＣＲ产物进行地主辛标记反应获得探针。将梯度稀释的变性探针制成ＮＣ膜，与对照标记的ＤＮＡ进行比较，以测试探针的灵敏度。结果：表明标记探针的检测灵敏度可达０．１ｐｇ，有地对９例患的一（均经ＰＣＲ检测，证实ＥＢ病毒Ｄ     

用PCR法检测人巨细胞病毒DNA

用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）法检测患者尿液中人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ．结果表明，自行设计合成的引物位于ＨＣＭＶ基因组早期蛋白基因区，经ＰＣＲ仪扩增一段长４３０ｂｐ的特异序列片段，对正常人基因组ＤＮＡ或其它疱疹病毒ＤＮＡ无交叉反应．此法可检测出少至１０－１６ｇ（０．１ｆｇ）的病毒ＤＮＡ．通过对３５份尿液标本的检测，比较ＰＣＲ法和组织培养法的检测结果完全一致     

用微量单管RT－PCR快速检测及定型脊髓灰质炎病毒

介绍一种逆转录─聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）的简单快速检测和定型脊髓灰质炎病毒（ＰＶ）的方法，无需提取ＰＶＲＮＡ，共用一种缓冲系统，将ＲＴ和ＰＣＲ试剂混合在２０μＬ反应体系中，整个操作可置于一不间断温度循环程度程序中完成。一步法ＲＴ－ＰＣＲ与常规ＲＴ－ＰＣＲ及中和抗体试验对ＰＶ的检测结果完全一致，它的检测敏感度可达５ＴＣＩＤ（５０）／ｍＬ。该法需要的时间，费用和污染的都大大减少，而且特别适于临床常规诊断和鉴别ＰＶ的需要。     

检测一种新的可经输血传播病毒（TTV）156例及分析

应用聚合酶链反应,检测海口地区不同人群中输血传播病毒(TTV)感染状况.结果表明在156例标本中,阳性41例(26.3%),其中一般人群40例中,阳性3例(7.5%),献血员20例中,阳性1例(5.0%),静脉毒瘾3例中,阳性2例(66.7%),非甲-非庚型肝炎46例中,阳性24例(52.2%),乙型肝炎33例中,阳性9例(27.3%),丙型肝炎14例中,阳性2例(14.3%).提示海口地区人群中均存在TTV感染.     

聚合酶链反应检测脐血及乳汁中乙型肝炎病毒DNA

应用聚合酶链反应(PCR)技术对乙肝病毒(HBV)血清学指标一项或多项阳性的产妇检测其脐血及乳汁中乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV—DNA)。31名产妇共采集脐血标本20份,乳汁标本31份,有脐血标本者同时有乳汁标本,另11人仅有乳汁标本。检测结果:脐血中HBV—DNA阳性8例,阳性率40％;乳汁标本中HBV—DNA阳性11例,阳性率35.5％;脐血、乳汁双阳性4例,占20％。其中抗原阳性组检出率脐血46.5％,乳汁26.66％。结论:乙肝病毒可以垂直传播,也可通过乳汁传播;抗原阳性者传染性强于抗体阳性者;任何一项HBV血清学指标阳性均可能在脐血及乳汁中检出HBV—DNA。     

用微量单管RT-PCR快速检测及定型脊髓灰质炎病毒

介绍一种逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）的简单快速检测和定型脊髓灰质病毒（ＰＶ）的方法，无需提取ＰＶＲＮＡ共用一种缓冲系统，将ＲＴ和ＰＣＲ试剂混合在２０μＬ反应体系中，整个操作可置于一不间断温度循环程度程序中完成，一步法ＲＴ－ＰＣＲ与常ＲＴ－ＰＣＲ及中和抗体试验对ＰＶ的检测结果完全一致，它的检测敏感度可达５ＴＣＩＤ５０／ｍＬ，该法需要时间，费用和污染的都大大减少，而且特别适于临床常规诊断和鉴别     

JD病毒基因组片段的克隆和序列分析

扩增并克隆了ＪＤ病毒的ｇａｇ 基因片段（位于３００ｎｔ～５６４ｎｔ,编码基质蛋白ＭＡ）和ｐｏｌ基因片段（位于３４６７ｎｔ～３６９１ｎｔ,编码反转录酶ＲＴ）,测定其序列并同ＢＩＶ、ＢＦＶ 和ＢＬＶ 的相应基因进行比较．所建立的方法能够特异性扩增ＪＤＶ序列,适用于ＪＤＶ的检测     

应用二温式多重PCR技术鉴别鸡传染性支气管炎病毒和鸡传染性喉气管炎病毒

为了简化聚链反应（PCR）程序和加快检测速度,将二温式PCR与多重PCR结合起来,建立一种同是检测鸡传染性支气管炎病毒（IBV）和鸡传染性喉气炎病毒（ILTV）的二温式重PCR技术,试验根据IBV和ILTV的基因文库,设计2对分别与IBV和ILTV某段基因序列互补的引物。用这2对引物同一样品中的IBV、ILTV核酸模板进行二温式多重PCR扩增,结果均同时得到2条特异性大小与实验设计相符的1720bp(IBV)和647bp(ILTV）的扩增带,而对其他6种禽病病原的扩增结果均为阴性,敏感性测定结果表明明,该二温式多重PCR技术检出10pg的IBV RNA模板和10pg的ILTV DNA模板。     

用聚合酶链反应检测HBVDNA敏感性的探讨

本实验用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对５６例受检者进行乙肝病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ检测，并将结果与血清标志物检测结果比较，结果表明，在ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和抗ＨＢｃＡｇ同时阳性的受检者中，１００％可检测出ＨＢＶＤＮＡ。在血清标志物全阴性受检者中，也有４５％可测出ＨＢＶＤＮＡ。结合其他血清标志物的检测结果，说明用ＰＣＲ技术检测ＨＢＶＤＮＡ是敏感的，在临床应用上也是可行的。     

猕猴肉瘤病毒SV40 T-ag-C 基因克隆及序列分析

摘要: 目的对来源于一株自然感染猕猴肉瘤病毒SV40 的猴肾细胞培养物进行大T 抗原C-羧基端( T-ag-C) 基因 克隆及核苷酸序列分析。方法采用PCR 法分别从一株自然感染SV40 病毒的猴肾细胞培养物和SV40776 标准 株接种的vero 细胞培养物提取的总DNA 中扩增出441bp 的SV40 大T 抗原C-羧基端( T-ag-C) 基因片段,分别将其 克隆到PMD18-T 载体中,转化至JM109 感受态大肠杆菌细胞后,挑取阳性克隆进行测序鉴定,并对获得的目的基 因核苷酸序列进行序列分析及同源性分析。结果来源于猴肾细胞培养物的SV40 大T 抗原片段与本实验室来源 于云南野生猴群的猕猴外周血所得到的SV40 大T 抗原片段同源性为97. 31% ,与GenBank 中登录号为NC _ 001669. 1 序列进行比对,同源性为96. 33% ; 与SV40-776 标准株接种的vero 细胞培养物所扩增的大T 抗原片段同 源性为97. 55% 。结论对大T 抗原基因克隆和序列分析是了解和掌握SV40 病毒分子流行病学及其变异趋势的 重要手段。     

SlNPV PK基因的部分序列分析

ＳｌＮＰＶ基因组ＤＮＡ的ＨｉｎｄⅢ－Ｘｂａ片段上含有部分的ＰＫ基因，ＳｌＮＰＶＰＫ的氨基酸序列与ＨａＮＰＶ，ＨｚＮＰＶＳｐｌｉＮＰＶ，ＡｆＮＰＶ，ＡｃＮＩＶ，ＬｄＮＰＶＰＫ氨基酸序列的同源性分别为４５％，４４％，８９％，３７％，３８％和３７％，其上含有蛋白激酶的特征序列ＩＶＨＡＮＤＶＫＬＥＮＶＬ。     

斜纹夜蛾NPV多角体基因的克隆和部分测序

本文对ＳＩＮＰＶ基因组作了酶解分析，测得其基因组大小为１４５ｋｂ，并用双酶法确定了ＳＩＮＰＶ基因组的ＨｉｎｄⅢ和ＰｓｔⅠ物理图谱。以含ＡｃＮＰＶ多角体基因的质粒ｐＡＣ－Ⅰ的ＳａｌＩ－Ｃ片段为探针，对ＳＩＮＰＶＤＮＡ酶切片段ｓｏｕｔｈｅｒｎ转印杂交结果，初步判断多角体基因定位于ＰｓｔＩ－Ｂ／Ｃ／Ｄ片段、ＢｇｌⅡ－Ｃ／Ｄ片段、ＢａｍＨＩ－Ｂ／Ｃ片段和ＥｃｏＲＩ－Ａ／Ｂ片段上，且ＳＩＮＰＶ与ＡｃＮＰＶ多角体蛋白基因有６４％的同源性，而以大肠仟菌质粒ｐＵＣ１９为载体对ＳＩＮＰＶ的多角体基因试克隆，得到带有ＢｇｌⅡ－ＰｓｔⅠ双酶切片段的２个克隆子。对这两个杂交阳性克隆子之一的核苷酸序列测定，表明插入片段与ＢｍＮＰＶ多角体基因上游序列亦有一定同源性。     

广州地区1995—1997年HIV抗体检测情况分析

为了解献血员人群ＨＩＶ感染情况，我们对１９９５～１９９７年献血员ＨＩＶ抗体检测情况进行了分析。方法：献血员ＨＩＶ抗体的初筛试验采用抗－ＨＩＶ抗体ＥＬＩＳＡ法，ＨＩＶ抗体初筛试验阳性者用蛋白印迹法（ＷＢ）进行确认。结果：３年内共检测１４００２８人次，初筛ＨＩＶ抗体阳性１８例献血员，并全部经ＷＢ法确认为ＨＩＶ抗体阳性。其中１５例为男性，３例女性，均为来自外省的流动人口。１８例ＨＩＶ抗体阳性献血员中，ＨＣＶ抗体阳性检出率为８３３％（１５／１８），ＨＢｓＡｇ阳性检出率为６１１％（１１／１８），ＨＢｓＡｇ和ＨＣＶ抗体阳性检出率为３３３％（６／８）。结论：在献血员人群中ＨＩＶ抗体阳性检出率呈上升趋势，为此献血员ＨＩＶ抗体筛查对预防和控制输血传播ＨＩＶ具有重要意义。ＨＩＶ与ＨＢＶ和ＨＣＶ具有较高的重叠感染率     

小反刍兽疫病毒融合蛋白基因的克隆、序列分析及表达

根据GenBank报道的小反刍兽疫病毒(PPRV)融合蛋白(F)基因序列,用特异性引物对PPRV疫苗株F蛋白基因进行了RT-PCR扩增,并将其克隆到pGEM-T载体中进行测序。结果表明:F基因ORF全长1641 bp,编码546个氨基酸;推导的氨基酸序列中第1~18位氨基酸构成信号肽序列,第488~510氨基酸为跨膜区。构建原核表达载体pETF1和pETF2,转化E.coliBL21(DE3),用IPTG诱导表达。SDS-PAGE和Western-blotting的分析结果表明,F1和F2基因在大肠杆菌中均获得了表达,且均具有良好的反应原性。用Ni-NTA试剂盒纯化F1和F2重组蛋白,为研发检测PPRV特异性抗体的诊断试剂奠定了基础。     

半夏属植物凝集素基因片段克隆与序列分析

半夏属植物凝集素同其他天南星科植物凝集素一样,有3个甘露糖专一结合位点,且具显著的抗虫性.本研究根据已知掌叶半夏凝集素基因表达序列的相关信息设计引物,采用RT-PCR方法,分别从滴水珠、石蜘蛛、盾叶半夏、掌叶半夏、三叶半夏中克隆出长约530bp的凝集素基因片段.使用Genescan软件、ORF finder软件、Ex2PASy Proteomics Server软件对5个凝集素基因片段进行分析,结果表明:克隆出的滴水珠、石蜘蛛、盾叶半夏、掌叶半夏、三叶半夏凝集素基因片段分别编码107、171、170、170、170个氨基酸,在它们所编码的肽链中,都具有酪蛋白激酶II磷酸化位点、蛋白激酶C磷酸化位点和N-糖基化位点三类不同的功能位点.但由于编码序列碱基的突变,引起肽链中的氨基酸发生变化,从而导致这五种植株的凝集素基因存在较高的多态性以及存在功能位点的差异.其凝集素基因多态性及功能位点的差异对凝集素功能的影响需进一步分析.本实验为克隆五种植物凝集素基因的表达序列与结构基因以及深入研究半夏属凝集素的功能提供了有意义的参考资料.