点青霉高产葡萄糖氧化酶菌株的诱变选育

以产葡萄糖氧化酶的点青霉(Penicilium notatum)No.8312为出发菌株,经紫外线诱变处理,对单菌落进行摇瓶选育,在193个突变株中初筛选定3株.进一步对培养基和发酵条件优化试验,复筛得到了一株(No.T111)高产葡萄糖氧化酶的菌株,连续12次对其传代试验,该突变株遗传性状稳定,摇瓶产酶水平达到55.7U/mL,比出发株(36.2U/mL)提高了53.9%.     

亚油酸异构酶高产菌株的选育及产酶条件的优化

共轭亚油酸是一种具有多种生理活性的天然脂肪酸.以嗜酸乳杆菌为出发菌株,经紫外诱变选育,获得1株共轭亚油酸高产菌株并对其发酵条件进行优化.紫外照射选择30 s为适宜的照射处理时间,诱变菌株酶活比原始菌株提高了1.51倍.对培养基的产酶条件进行优化,结果酶活是未优化前的1.1倍.     

产异淀粉酶黄杆菌菌株的诱变选育

以土壤中筛选到的产异淀粉酶的黄杆菌菌株D15为出发菌株,进行了紫外线诱变处理,通过对大量的突变株进行筛选,获得了一株产异淀粉酶活力较高且产酶稳定的菌株ZYF32,其酶活力达到9.21 U/mL,比原出发菌株提高了3.23倍。     

不同诱变方法对青霉TS406Y胆固醇氧化酶活性的影响

以青霉Ts406Y(Penicillum sp.)为诱变出发菌株,评价了硫酸二乙酯(DES)、亚硝基胍(NTG)和甲基磺酸乙酯(EMS)对该菌株的诱变效应,发现在常规剂量内达到70%致死率时所需要的时间分别为23,3,90 min.根据使用方便和安全原则,进行了青霉TS406Y的DES诱变和选育,获得了胆固醇氧化酶活性提高84.5%的突变菌株D5,其胆固醇氧化酶活性达到了1 240 U/L,连续传代6次.发现D5菌株具有遗传稳定性.另外还发现,利用紫外线(UV)和EDS对单因素诱变后获得的胆固醇氧化酶高产菌株进行复合诱变.94%的突变菌株为负变菌株.     

液体发酵高产纳豆激酶菌株的复合诱变选育

从市售豆豉和保藏的固体发酵产纳豆激酶(NK)高活性的菌株中,筛选出5株诱变育种出发菌株.经紫外-亚硝基胍-Co60复合诱变后,获得5株液体发酵产NK高活性的菌株LJJ-1-13-12-4、PXDBJ-13-9-7-18、DNS-17-3-15-7、CBL-2-7-10-6和L-5-8-15,其产NK活性,分别为1 846.15、1 956.48、2 184.32、1 865.38和2 095.23 U/mL,分别是诱变前出发菌株的1.62、1.81、1.98、1.61和1.62倍.高产纳豆激酶菌株的选育为纳豆激酶液体发酵的进一步工业化奠定了良好的基础.     

原生质体诱变选育透明质酸菌株及发酵条件的优化

采用N 甲基 N′ 硝基 N 亚硝基胍(NTG)诱变原生质体,选育了一株产透明质酸的兽疫链球菌(Streptococcuszooepidemicus)H 35.并经过发酵条件的优化,确定了溶菌酶作用的最佳条件是0.6mg/mL溶菌酶高渗溶液,30℃水浴下酶解20min;H 35的最佳发酵条件是葡萄糖4.0%、酵母膏2.0%、NaCl0.2%、KH2PO40.2%、MgSO4·7H2O0.06%、初始pH7.0、35℃,200r/min、培养18h.发酵液中透明质酸的含量从最初的0.47g/L提高到优化后的1.43g/L.     

L-谷氨酸氧化酶高产菌株的快速筛选及诱变育种

用谷氨酸氧化酶测试液浸湿白卷纸置于菌落上,根据白卷纸上显示红色快慢、深浅,就能大致测得该菌落菌株产酶能力高低。该法可靠性大、工作量小、操作简便,显示结果快。利用该法,配合亚硝酸诱变,在短暂三个月内,将L-谷氨酸氧化酶产生菌株产酶能力提高了约25倍。     

物理化学诱变选育冠菌素高产菌株

冠菌素是一种能够引起大豆叶片黄萎病的致病因子.它作为茉莉酸类物质的结构类似物在植物抵抗各种环境胁迫中起着重要作用.但是目前冠菌素产量比较低,这就限制了冠菌素生理作用的广泛研究.本试验通过紫外、亚硝基胍结合诱变选育冠菌素高产突变体,得到的突变体冠菌素产量是出发菌株的1.8倍,命名为M-18.该菌株在18℃下发酵生产冠菌素,产量大幅度提高,发酵周期明显缩短.     

紫外诱变原生质体选育碱性蛋白酶高产菌株的研究Ⅲ.诱变株的选育及其产酶条件的研究

以地衣芽孢杆菌（ＢａｃｉｌｕｓＬｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）５３号菌为出发菌株，在原生质形成和再生的最佳条件下制备原生质体，并对原生质体进行了多次诱变处理，从大量突变株进行筛选最终获得了高产、稳定、耐热的碱性蛋白酶产生菌株５３－Ｇ３８－６，产酶活力由１１０４Ｕ／ｍｌ提高到２２０８０Ｕ／ｍｌ．该诱变株最适产酶条件为：培养基由质量分数（ｗ／％）为胰蛋白胨１，酵母膏０．５，玉米粉５，Ｎａ２ＨＰＯ４１２Ｈ２Ｏ０．４，ＫＨ２ＰＯ４０．０３，Ｎａ２ＣＯ３０．１组成，ｐＨ自然，培养温度４２℃，培养时间４４～４８ｈ，ｗ／％为０．２的ＣａＣＯ３可提高酶的产量．酶作用的最适条件：６２℃，ｐＨ１０．０，ｐＨ在９～１０之间稳定     

紫外诱变原生质体选育碱性蛋白酶高产菌株的研究：Ⅲ.诱变…

以地衣芽孢杆菌（ＢａｃｉｌｌｕｓＬｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）５３号菌为出５３－Ｇ３８－６，产酶活的最佳条件下制备原生质体，并对原生质体进行了多次诱变处理，从大量突变株进行筛选最终获得了高产、稳定、耐热的碱性蛋白酶产生菌５３－Ｇ３８－Ｋ６，产酶活力由１１０４Ｕ／ｍｌ提高到２２０８０Ｕ／ｍｌ。     

辅酶Q10的高产菌种筛选及发酵工艺优化

目的筛选辅酶Q10高产发酵菌种,并对发酵工艺进行优化。方法辅酶Q10发酵高产菌种采用筛选法,所产辅酶Q10类型鉴定采用硅胶薄层层析法。结果与单一碳源相比,葡萄糖、蔗糖(1∶1)的复合碳源更有利于辅酶Q10的产出;添加2%的玉米浆后辅酶Q10含量得到提高;最佳发酵pH为6.5,最佳发酵温度为30℃;对羟基苯甲酸和茄呢醇的添加都可大幅度提高辅酶Q10产量,并分别提高了11%和21%;在最优化发酵条件下,辅酶Q10产量达到188.6 mg/L。结论粉红掷胞酵母作为高产辅酶Q10菌种具有较好的实用性以及进一步提高产量的潜力和广阔的应用前景。     

生物絮凝剂产生菌的筛选及其培养条件优化

从淀粉废水、活性污泥及多种土壤中分离得到32株产絮凝剂菌株,经复筛,得到1株具有较高絮凝活性的细菌SⅥ-4.该菌产絮凝剂的最佳条件为:可溶性淀粉2%,蛋白胨1%,KH2PO40 2%,K2HPO40 2%,NaCl0 05%,(NH4)2SO40 05%,MgSO4·7H2O0 05%,pH6 0～8 0,30～34℃,120r/min,摇床培养2～3d.所产絮凝剂对4‰的高岭土悬浊液的絮凝效率最高可达91 6%.     

纤维素降解菌的筛选与诱变育种

采用羧甲基纤维素(CMC)平板初筛和50℃培养,筛选到一株纤维素酶活力较高的耐高温霉菌MY菌株,其CMC培养基最适pH为6.0,培养温度为40℃,最佳产酶时间为5d.以MY菌株为出发菌株,分别采用紫外线和硫酸二乙酯诱变,以透明圈直径与菌落直径的比值(HC值)提高30%以上或菌落形态发生明显变异为筛选指标,共筛选到97株突变株;通过测定粗酶液CMC酶活力,从中筛选出29株CMC酶活力提高30%以上的菌株;结合突变菌株的传代稳定性实验,最后筛选得到1株性能优良的霉菌MY004突变株,其CMC酶活力比原始菌株MY提高了80.6%.     

纤维素降解菌的筛选与诱变育种

采用羧甲基纤维素（CMC）平板初筛和50℃培养, 筛选到一株纤维素酶活力较高的耐高温霉菌MY菌株, 其CMC培养基最适pH为6.0, 培养温度为40℃, 最佳产酶时间为5d. 以MY菌株为出发菌株, 分别采用紫外线和硫酸二乙酯诱变, 以透明圈直径与菌落直径的比值（HC值）提高30%以上或菌落形态发生明显变异为筛选指标, 共筛选到97株突变株; 通过测定粗酶液CMC酶活力, 从中筛选出29株CMC酶活力提高30%以上的菌株; 结合突变菌株的传代稳定性实验, 最后筛选得到1株性能优良的霉菌MY004突变株, 其CMC酶活力比原始菌株MY提高了80.6%.     

响应面法优化黑曲霉产葡萄糖氧化酶条件

运用响应面法对黑曲霉(Aspergillus niger)产葡萄糖氧化酶以及发酵条件进行了优化。根据单因素实验结果,利用Plackett-Burman设计对影响其产酶相关因素进行评估并筛选出具有显著效应的3个因素：葡萄糖,玉米浆和碳酸钙。用最陡爬坡试验逼近以上3个因子的最大响应区域后,采用Box-Behnken设计以及响应面分析法,确定其优化后发酵条件为(g/L)：葡萄糖172.11、玉米浆11.05、碳酸钙52.29、牛肉蛋白胨3.5、（NH₄）H₂PO₄ 0.5、KCl 0.15、MgSO₄·7H₂O 0.125、FeSO₄·7H₂O 0.125,220r/min,30℃培养48h。优化后的葡萄糖氧化酶酶活达786.3U/g,比在种子培养基中酶活350.5U/g提高了2倍左右。     

降胆固醇红曲霉菌株的选育及其生物学特性研究

以实验室保藏的红色红曲霉菌株(Monascus ruber)M5为出发菌株,经过紫外线诱变筛选,得到一株产降胆固醇红曲霉功能性菌株N7,并对该菌株的生物学特性进行了研究,认为该菌株具有较好的遗传稳定性和较强的耐乙醇能力,并选择出其最适生长温度以及最佳pH值.     

一株产漆酶真菌的筛选、鉴定及发酵研究

采用愈创木酚显色法筛得一株产漆酶周期较短的丝状真菌．通过形态学观察和分子生物学序列分析,鉴定其为棘孢木霉(Trichodermaasperellum),并对所获菌株进行了发酵条件优化．通过单因素试验和正交试验获得该菌的最佳发酵条件为：蔗糖25 g/L、麸皮汁80 g/L、酒石酸铵10 g/L 和豆粕18 g/L,KH2 PO42, MgSO4?7H2 O 0．6,CaCl2?2H2 O 0．8,Cu2＋0．25(1 mM),pH 5．5~6．5,其漆酶最高酶活水平为571．32 U/L．     

紫杉醇产生菌的筛选与发酵条件的调控

采用稀释倒平板法分别从云南红豆杉和南方红豆杉中分离出230余株内生真菌,经薄层层析、紫外及HPLC分析初步筛选,确定有5株表现出产紫杉醇的特性,其中1株真菌产率较高,约为1 mg/L.产紫杉醇的内生真菌菌丝体生长和紫杉醇积累之间存在相反的关系.低浓度乙酸铵(＜0.01 mmol/L)有利于菌丝体生长,不利于紫杉醇积累;较高浓度的乙酸铵不利于菌丝体生长而有利于紫杉醇积累.较高浓度的苯丙氨酸和酒石酸铵(＞0.05 mmol/L)有利于菌丝体生长,不利于紫杉醇积累;较低浓度的苯丙氨酸和酒石酸铵不利于菌丝体生长而有利于紫杉醇积累.亮氨酸对菌丝体生长和紫杉醇积累的影响很小;苯甲酸钠抑制菌丝体的生长和紫杉醇的积累.     

混合菌液态发酵纤维素酶及发酵pH的优化

以优势互补为原则,采用绿色木霉、根霉混合发酵产纤维素酶.利用旋转回归法研究根霉、绿色木霉混合发酵生产纤维素酶的比例、pH两个重要的影响因素,并拟合出回归方程.回归分析表明,发酵过程中,混合菌比例、pH对滤纸酶活具有显著影响.通过岭脊分析寻优得出:绿色木霉、根霉的混合比例为1∶1、发酵初始pH为3.5,在此优化条件下滤纸酶活由优化前的2.73 IU/mL、3.15 IU/mL提高到5.418 IU/mL.