日本白鲫生长激素-I基因编码区cDNA的克隆

从日本白鲫(carassius cuvieri)脑下垂体中提取总RNA，采用逆转录PCR法扩增出日本白鲫生长激素—Ⅰ cDNA编码区，克隆到Pucm-T载体上，序列测定表明日本白鲫生长激素—Ⅰ基因的开放阅读框含有630bp，其中包括22个氨基酸的信号肽和188个氨基酸的成熟肽，日本白鲫生长激素—Ⅰ基因的克隆成功为该基因的功能及应用研究奠定了基础。     

红鲫促性腺激素α亚基的cDNA克隆

从红鲫(Red crucian earp)脑垂体中提取总RNA，根据鱼类促性腺激素(Gonadotropin Hormone，简称GTH)α亚基的保守性，设计并合成了一对20个碱基长的简并引物，用RT-PCR方法扩增并克隆了红鲫GTH-α亚基的两种不同的cDNA，分别命名为GTH-α1和GTH-α2。GTH-α1和GTH-α2分别由363和366个核苷酸组成，分别编码117和118个氨基酸．这两种类型的cDNA的核苷酸和氨基酸的同源性非常高，分别达到了95.0％和96．6％．但是，它们之间也有4个氨基酸的差别，而且GTH-α1有一个三联体核苷酸组成的氨基酸的缺失。聚类分析表明，GTH-α亚基在鲤科鱼类中具有高度保守性。     

马尾松苯丙氨酸解氨酶基因cDNA全长克隆与序列分析

苯丙氨酸解氨酶(Phenylalanine ammonia-lyase,PAL)是连接植物初级代谢和次级代谢途径关键酶、限速酶,催化苯丙氨酸转化为肉桂酸,促进黄酮、木质素等次生代谢产物的合成,在植物抗病过程中有重要意义.采用RT-PCR和RACE技术,从马尾松中克隆到PAL基因的cDNA全长.此cDNA全长2 700 bp,包括2 154 bp的完整ORF,编码717个氨基酸的蛋白,相对分子质量与等电点分别为78 200和5.81.其推导的蛋白序列与火炬松(Pinus taeda)、欧洲赤松(Pinus sylvestris)和海岸松(Pinus pinaster)的苯丙氨酸解氨酶同源性分别为98.2%、99.4%和97.8%.     

长白蝮蛇类凝血酶基因(Ussurase)的克隆及分析（英文）

从长白蝮蛇（Agkistrodon halys Ussuriensis）毒腺中抽提总RNA,采用RT-PCR扩增其类凝血酶基因,经全序列测定,类凝血酶基因ussurase全长为699个核苷酸,即编码233个氨基酸;根据同源性,推测它的活性中心为His40,Asp85和Ser179;二硫键为Cys7-Cys138,Cys25-Cys41,Cys73-Cys231,Cys117-Cys185,Cys149-Cys164和Cys175-Cys200。该蛇毒类凝血酶cDNA序列及推导的氨基酸序列均为首次报道。     

Cloning and sequence analysis of VP2 gene of infections bursal disease virus

用SPF鸡胚成纤维细胞繁殖鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV) J1C7毒株.用纯化的病毒颗粒提取RNA基因组.根据已报道的IBDV JD1株的VP2序列设计引物,利用反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)进行扩增,将获得的1359 bp片段克隆于pMD 18-T载体上.经过限制性酶切及PCR鉴定后,得到阳性重组质粒.对VP2基因进行全序列测定表明,克隆的VP2基因长1359 bp,编码452个氨基酸.J1C7株VP2蛋白高变区内两个亲水区与其他标准Ⅰ型毒株完全相同,而且具有弱毒疫苗株的特征性氨基酸:222P、256V、279N、284T、294L、299N,七肽区的氨基酸序列为SWS ARGS,因此,从分子水平上推断本研究的J1C7株为标准Ⅰ型毒株,且属于弱毒疫苗株.与已报道的IBDV VP2基因的氨基酸序列进行比对,结果表明,本研究的J1C7株与来自欧洲和中国的弱毒疫苗株有密切的亲缘关系.     

鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的克隆及序列分析

用SPF鸡胚成纤维细胞繁殖鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)J1C7毒株。用纯化的病毒颗粒提取RNA基因组。根据已报道的IBDV JD1株的VP2序列设计引物,利用反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)进行扩增,将获得的1 359 bp片段克隆于pMD 18-T载体上。经过限制性酶切及PCR鉴定后,得到阳性重组质粒。对VP2基因进行全序列测定表明,克隆的VP2基因长1 359 bp,编码452个氨基酸。J1C7株VP2蛋白高变区内两个亲水区与其他标准Ⅰ型毒株完全相同,而且具有弱毒疫苗株的特征性氨基酸:222P、256V、279N、284T、294L、299N,七肽区的氨基酸序列为SWS ARGS,因此,从分子水平上推断本研究的J1C7株为标准Ⅰ型毒株,且属于弱毒疫苗株。与已报道的IBDV VP2基因的氨基酸序列进行比对,结果表明,本研究的J1C7株与来自欧洲和中国的弱毒疫苗株有密切的亲缘关系。     

枸杞果实PSY和LCYB基因片段的克隆与序列分析

利用RTPCR技术从宁夏枸杞（Lycium barbarum L.）果实cDNA中分离出八氢番茄红素合成酶（Phytoene synthase,PSY）和番茄红素β环化酶（Lycopene β cyclase,LCYB）同源基因cDNA片段,分别命名为LybPsy和LybLcyb.测序结果表明,LybPsy序列长402 bp,编码134个氨基酸;LybLcyb序列长555 bp,编码184个氨基酸.BLAST结果显示,LybPsy和LybLcyb所推导的氨基酸与烟草、番茄对应序列同源性最高,分别为96%和92%,与其他物种对应区域也有86%~90%的序列同源性.     

SOE-PCR技术在洛伐他汀九酮合成酶基因克隆中的应用

为了验证SOE-PCK技术在洛伐他汀九酮合成酶基因(LOVB)克隆中的应用,以土曲霉基因组DNA为模板,设计4对引物,分别扩增LOVB的4个外显子,并按一定的顺序,利用SOE-PCK技术将其一一串联起来,形成LOVB①-④的cDNA序列.结果表明:重叠延伸PCP成功扩增出了LOVB①-④的cDNA序列,大小1.3 kb左右,测序结果和NCBI中登录号为AF151722.1的洛伐他汀九酮合成酶基因LOVB①-④的cDNA序列比对,同源性为98.5%.     

黑麦草漆酶编码基因片段的克隆与序列分析

黑麦草中木质素的结构、含量是决定其饲用品质的主要因素。漆酶是木质素生物合成中的关键酶之一,属于多铜氧化酶基因家族。根据报道的植物漆酶编码基因的氨基酸序列中铜离子结合域及N-端糖基化位点两个保守区设计4对引物,以黑麦草总DNA为模板,经PCR扩增、克隆、测序后得到3个有效序列,分别命名为Lac10-1、Lac8-1和Lac11-1。序列分析表明,3个基因片段的编码蛋白不仅含有保守的蓝铜氧化酶结合区域HAH和N-末端糖基化位点,而且分别与黄杨、黑麦草中分离的漆酶编码蛋白的氨基酸序列具有较高的同源性。因而,推断克隆到的3个基因片段是黑麦草漆酶基因家族的成员。     

降水中δ18O月变化和年际变化的比较

据IAEA／WM0监测网具有长序列站点的资料分析了在月变化和年际变化尺度下降水中稳定同位素的时空变化特征．在月尺度下，除巴马科和亚的斯亚贝巴站外，温度效应主要分布在中高纬度．大部分站的δ^18O温度斜率与海拔高度呈正相关关系．降水量效应主要出现在300N以南和沿海区．无论在月尺度下是温度效应还是降水量效应，在年际尺度下，几乎所有取样站的年加权平均δ^18O与年平均温度之间均存在一定程度的正相关关系．与单站相比，空间合计的δ^18O/温度相关关系要显著得多．由月平均资料序列(Ⅰ)和年平均资料序列(Ⅱ)进行每10年滑动计算得到的平均温度曲线Ⅰ和曲线Ⅱ具有很好的一致性．但平均温度Ⅰ明显小于平均温度Ⅱ,两条δ^18O／dt曲线则表现出明显的差异．斜率Ⅱ的变化幅度明显大于斜率Ⅰ．从20世纪60～70年代，两曲线均表现出相同的增大趋势．之后二者的变化呈反位相．计算结果还表明，斜率Ⅱ序列与温度Ⅱ序列呈反相关关系．但斜率Ⅰ序列与温度Ⅰ序列则不同：从20世纪60～70年代，斜率Ⅰ序列和温度Ⅰ序列具有相反的变化趋势．但从20世纪80年代开始，两个滑动序列的变化趋势相同。     

一个与鸭繁殖性能相关卵巢差异表达基因的分离分析

本文用mRNA差异表达显示技术,分离分析了繁殖准备期金定鸭（Anas platyrhynchos domesticus）和绿头野鸭（Anas platyrhynchos）卵巢差异表达基因.通过卵巢组织RNA提取、反转录、mRNA差异显示PCR扩增、PAGE和银染检测扩增产物、差异带回收纯化、T载体连接转化和克隆测序分析,获得一个可能与鸭繁殖性能有关的卵巢差异表达基因片段,片段大小882bp.同源性分析表明,其序列与发情期羊卵巢cDNA（同源性为96%）、褐家鼠睾丸cDNA（同源性为83%）有很高的同源性.基因家族摸体分析表明,该序列的部分片段分别与Sox-5基因、转录因子USF基因、性别决定因子SRY、Cdx A基因都有90%以上的同源性典型摸体.由上述分析,我们推测该cDNA片段与鸭繁殖性状有关.     

核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)arom基因3′-末端的克隆与分析

根据五功能AROM蛋白保守区域设计简并引物,从核盘菌基因组中获得了一段大小为1626bp的DNA片段。结合Southern杂交结果,用反向PCR克隆了arom基因3′-末端4104bp的序列。序列分析结果表明,该DNA片段推测的氨基酸序列与烟曲霉、粗糙脉孢霉、构巢曲霉和粟酒裂殖酵母等的AROM蛋白同源,包含了部分5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSP合成酶)结构域、莽草酸激酶结构域、脱氢奎尼酸脱水酶(脱氢奎尼酸酶)结构域和脱氢莽草酸脱氢酶结构域,其中含有EPSP合成酶模式2(255—273)、莽草酸激酶模式(426—453)和Ⅰ型脱氢奎尼酸酶活性位点模式(659-687)。     

核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum) arom基因3''''-末端的克隆与分析

根据五功能AROM蛋白保守区域设计简并引物,从核盘菌基因组中获得了一段大小为1626bp的DNA片段.结合Southern杂交结果,用反向PCR克隆了arom基因3'-末端4104bp的序列.序列分析结果表明,该DNA片段推测的氨基酸序列与烟曲霉、粗糙脉孢霉、构巢曲霉和粟酒裂殖酵母等的AROM蛋白同源,包含了部分5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSP合成酶)结构域、莽草酸激酶结构域、脱氢奎尼酸脱水酶(脱氢奎尼酸酶)结构域和脱氢莽草酸脱氢酶结构域,其中含有EPSP合成酶模式2(255-273)、莽草酸激酶模式(426-453)和Ⅰ型脱氢奎尼酸酶活性位点模式(659-687).     

鳜肌球蛋白轻链2基因cDNA的克隆及其发育表达分析

通过构建肌肉组织cDNA文库分离到鳜肌球蛋白轻链2基因(MLC2),基因登录号为FJ428249.MLC2基因cDNA序列全长1 206 bp,编码区长度为579 bp.MLC2基因开放阅读框编码170个氨基酸,具有EF-手相家族蛋白全部4个EF-手相结构.与已报道的其他动物MLC2相比较,所推导氨基酸序列同源性在66.3%～97.6%,其中与ca2+结合区域非常保守,7种鱼氨基酸序列同源性为100%.采用实时荧光定量PCR方法对鳜MLC2发育表达分析表明,MLC2在原肠期开始有低量表达,与原肠期相比,尾芽期、肌肉效应期和仔鱼阶段MLC2表达量随发育阶段渐进而升高.     

四倍体鱼促性腺激素α亚基cDNA的克隆与序列分析

从四倍体鱼脑垂体中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增并克隆了四倍体鱼GTH-α亚基4种不同的cD-NA,分别命名为GTH-α1、GTH-α2、GTH-α3和GTH-α4.其中,GTH-α1和GTH-α2的cDNA都由363个核苷酸组成,编码117个氨基酸;而GTH-α3和GTH-α4都由366个核苷酸组成,编码118个氨基酸.分析表明,四倍体鱼4种不同的GTH-α亚基之间的核苷酸和氨基酸的同源性非常高,均在96%以上;四倍体鱼和原始亲本红鲫和鲤鱼GTH-α亚基氨基酸序列之间的同源性也非常高,如四倍体鱼GTH-α1和原始母本红鲫GTH-α1氨基酸的同源性为99.2%,四倍体鱼GTH-α3和原始父本鲤鱼GTH-α1氨基酸的同源性达到了100%.     

萃取--火焰原子吸收法测定高纯稀土氧化物中的锌

该文研究了用吡咯啶二硫代氨基甲酸铵(APDC)-甲基异丁基酮(MIBK)萃取体系，火焰原子吸收法测定高级纯稀土氧化物中的锌．建立了优化的测定条件，并对可能存在的元素作了干扰实验．实验结果表明，氧化铕相对标准偏差为5．44％，氧化钐为3．24％，加标回收率氧化铕为95．73％～98．5l％，氧化钐为95．29％～101．59％．     

马尾松亲环素基因全长cDNA的克隆与原核表达

亲环素(Cyclophilins,CyPs)具有肽酰脯氨酸顺反异构酶活性,催化蛋白质折叠过程,并且起着分子伴侣的作用,同时参与mRNA加工和信号转导等生物学过程.本研究采用RT-PCR技术和RACE-PCR技术,从马尾松(Pinus massoniana)中分离了亲环素基因cDNA全长,命名为cyp-pml(GenBank登录号:GQ497815).该基因全长1002 bp,编码区全长为519 bp,编码172个氨基酸,在5'端有106 bp非编码区,在3'端含有377 bp(其中含有26 bp的polyA)非编码区.生物信息学分析表明该基因编码的蛋白质等电点和相对分子质量为8.82和18 212,含有典型的亲环素肽酰脯氨酸顺反异构酶蛋白功能域.序列分析表明该基因与植物亲环素家族基因有较高的同源性.通过亚克隆技术把cyp-pml的开放读码框克隆到表达载体pET-24a(+)中,成功构建了pET-cyp-pml重组表达载体,并在IPTG诱导下在大肠杆菌中成功表达了与推导相一致的蛋白,相对分子质量约1.8×104.     

丙二醇产品及其杂质的气相色谱测定研究

选用国产高分子多孔微球GDX－101为固定相,氢火焰离子化检测器,1,4－丁二醇为内标,对环氧丙烷加压水合制丙二醇工艺物料中的全组分进行规定,该方法规定的检测限为2．95×10~(-7)g,回收率为96．5％～98．6％,变异系数为2．06％。     

hKv4．3基因中抑制序列功能的研究

目的：研究基因中抑制序列对离子通道基因表达的影响．方法：我们将hKv4．3基因的启动子和5’非翻译区的一段序列（＋2-＋160，S160）以不同的位置和方向克隆到报告质粒pβ-gal-Basievector中，瞬时表达，进行β—galactosidase相对活性分析．结果：S160对hKv4．3基因表达具有强烈的抑制作用．结论：抑制序列S160对hKv4．3基因的抑制功能具有位置特异性．