一株高产胞外多糖的乳酸芽孢杆菌的筛选及功能鉴定

为丰富可用于功能食品的微生物资源,本研究从四川怀远发酵米糕作坊环境中分离出1株高产胞外多糖和乳酸的芽孢杆菌（XQ）,经分子鉴定为短小芽孢杆菌Bacillus pumilus.HPLC检测XQ产乳酸含量为8 mg/mL;苯酚 硫酸法检测粗胞外多糖浓度达到7.16 mg/mL.并经滤纸片法测定出XQ产生的粗胞外多糖对常见的食源性病原菌沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均有抑菌作用.DEAE分离粗胞外多糖为中性多糖E1和酸性多糖E2.当浓度为10 mg/mL时,E1对羟自由基清除活性为3.24%,而E2羟自由基清除活性高达84.58%;E1和E2对DPPH自由基的清除活性分别为26.07%和47.03%.E2还具有明显的抗肿瘤活性：当浓度为4 mg/mL时,E2对A549细胞的生长抑制率可达到81.30%,在浓度为6 mg/mL时,E2对HepG2细胞的生长抑制率为53.40%.在模拟胃肠道耐受性实验中发现XQ对胰蛋白酶、胃蛋白酶和胆盐均具有良好的耐受性.在安全性方面,没有发现XQ有溶血现象,对革兰氏阳性菌抗生素没有抗药性,具有良好的药物安全性.表明XQ可作为一种潜在的益生菌.     

蝙蝠葛碱提多糖对Hela细胞增殖的影响

利用蝙蝠葛根提取多糖成分,并应用噻唑蓝还原法(MTT)检测了蝙蝠葛多糖对Hela细胞增殖的抑制作用及细胞毒性作用.结果表明:蝙蝠葛碱提多糖在质量浓度较低时,对Hela细胞的增殖有促进作用,此作用在质量浓度为0.25 mg/mL时达到最大,此时Hela细胞增殖率为149％.随着浓度的进一步加大,Hela细胞的生长逐渐受到...     

翘鳞肉齿菌多糖的分离纯化及抗氧化活性的研究

为了分离纯化翘鳞肉齿菌多糖,解析其结构特征,并研究其抗氧化活性.运用DEAE-cellulose column进行柱层析分离纯化翘鳞肉齿菌多糖,高效凝胶渗透色谱(HPGPC)方法研究其均重分子量,通过红外光谱解析其结构特征,进一步研究其对羟基自由基(·OH)、1,1-二苯基-2-苦基肼自由基(DPPH-)和2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐自由基(ABTS+)的清除作用,同时研究了翘鳞肉齿菌多糖在H2O2作用下对PC12细胞的保护能力.其结果显示从四川省小金县翘鳞肉齿菌子实体分离纯化得到一种水溶性杂多糖(SIKP-1)纯品,其重均分量约为2.0×104 Da.通过化学方法研究了不同质量浓度的翘鳞肉齿菌多糖(SIKP-1)抗氧化活性,结果表明:当SIKP-1质量浓度为0.1mg/mL时,其对DPPH-自由基的清除率可达到40.63%;当SIKP-1质量浓度达到0.32mg/mL时,对·OH自由基的清除率可达到51.61%;当SIKP-1的质量浓度为3mg/mL时,对ABTS+自由基的清除率可达69.75%;在细胞生物学实验中,结果显示在用终质量浓度为0.5,1,2 mg/mL的SIKP-1处理下,PC12能免于H2O2的损伤,随着剂量的增加其存活率越高,分别为15.89%,27.60%,29.36%.综上试验结果显示,翘鳞肉齿菌多糖(SIKP-1)具有显著的抗氧化功能,因此可以作为一种理想的抗氧化剂资源.     

百合细胞悬浮体系构建及多糖含量测定的探索

该文旨在研究百合悬浮体系构建及诱导百合多糖产生的最佳培养方案。首先采用不同取材部位及激素组合来诱导百合愈伤组织形成,将其扩繁进而构建起百合细胞悬浮体系;然后使用不同激素处理来诱导其产生次生代谢产物百合多糖,并通过苯酚硫酸法测定多糖含量。结果发现,百合愈伤组织诱导的最佳取材部位为叶柄,最佳激素配比为6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L;百合悬浮细胞培养及诱导百合多糖产生的最佳激素配方为6-BA 1.0 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L+NAA 0.2mg/L,其多糖含量可达到3.8%。该项目可以用于指导百合细胞悬浮体系构建及百合多糖的生产等方面的研究。     

难处理金矿吸附浸矿细菌多糖含量变化的研究

采用苯酚-硫酸方法测定HQ0211菌裂解液中多糖含量,得出最佳的裂解时间为25 min,最佳吸收波长为430 nm,最佳冷却时间为10 min.在利用HQ0211菌对含砷金矿进行吸附氧化试验研究时,微生物细胞多糖含量随着溶液体系电位的变化而变化.在480~572 mV阶段,游离在溶液中的细菌的多糖质量浓度为0.033~0.123 mg/mL,吸附在含砷金矿石矿物上的细菌细胞多糖为5.3~8.9 mg/g;当电位达到638 mV时,溶液中游离的细菌细胞多糖质量浓度达1.155 mg/mL,吸附在矿物上的细菌细胞多糖可高达57.5 mg/g.     

马齿苋多糖组分POP I对氧化损伤INS-1细胞的影响

目的：观察马齿苋多糖组分（POP I）对四氧嘧啶致大鼠胰岛素瘤细胞（INS-1 cell line）氧化损伤的影响.方法：不同浓度POP I （0.05,0.1,0.5,1.0,2.0,5.0和10.0 mg/mL）作用四氧嘧啶氧化损伤的INS-1细胞1d、3d和5d后,分别测定其细胞存活率、胰岛素分泌量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量和谷胱甘肽（GSH）含量.结果：POP I可明显抑制由四氧嘧啶所致的INS-1细胞存活率降低、SOD活性下降、GSH浓度减少和.MDA含量增加,并存在时-效和量-效关系;在5.6 mmol/L或16.7 mmol/L葡萄糖刺激下,POP I浓度依赖性地促进了INS-1细胞分泌胰岛素.结论：一定浓度范围内,POPI对四氧嘧啶致胰岛β细胞损伤有明显的保护作用,其作用机理可能与POP I提高细胞抗氧化能力有关.     

MTT法测定香菇多糖细胞毒性的研究

目的：研究香菇多糖的细胞毒性。方法：水煮醇沉法提取香菇多糖,MTT法测定其细胞毒性。结果：在香菇多糖浓度较低时,存在细胞死亡现象,但随着香菇多糖浓度升高,反而促进细胞生长。结论：香菇多糖几乎无细胞毒性。     

铁棍山药多糖对PC12及Hepa1-6细胞在体外增殖的影响

采取闪式提取法从铁棍山药中提取山药多糖,利用胰蛋白酶去除多糖中的杂蛋白,冷冻干燥获得山药多糖制品.分别以10μg/mL、100μg/mL、500μg/mL、1 000μg/mL浓度添加于生长良好的PC12及Hepa1-6细胞中,再分别二次培养12h、24h、36h,研究山药多糖在体外对PC12及Hepa1-6两种细胞增殖的影响.结果显示:在培养24h后,当山药多糖浓度为10μg/mL、100μg/mL时,对PC12细胞增殖的影响没有差异性(P>0.05),但当浓度进一步提高到500μg/mL、1 000μg/mL时,则对PC12细胞的增殖体现出显著影响(P<0.05);对于Hepa1-6,在培养12h且山药多糖浓度在10μg/mL、500μg/mL时,对Hepa1-6细胞增殖的影响差异性显著(P<0.05),同时在100μg/mL浓度下,山药多糖对Hepa1-6细胞的增殖抑制更加明显(P<0.01).但当浓度达到1 000μg/mL时,对Hepa1-6细胞增殖呈现促进作用.在培养24h时,各浓度的山药多糖对Hepa1-6细胞增殖的影响均没有差异性(P>0.05).当培养36h后,在山药多糖浓度为10μg/mL、100μg/mL、500μg/mL下,统计显示对Hepa1-6细胞增殖的影响差异性显著(P<0.05).上述结果说明,山药多糖在一定的浓度范围内具有明显的抗肿瘤作用.     

玉米须多糖的提取、组成和生物活性研究

采用水提醇沉法、DEAE纤维素柱层析、交联葡聚糖凝胶柱层析提取并纯化得到一种玉米须多糖,利用DPPH、ABTS自由基清除实验、MTT法对人肝癌细胞Hep G-2抑制实验对该多糖的抗氧化能力和抑癌能力进行测定,利用高效液相凝胶色谱法(HPGPC)测定了该多糖的分子质量,通过红外吸收光谱法(IR)、薄层层析法、气质联用法(GC-MS)、核磁共振波谱法(NMR)对该多糖的单糖组成及结构进行了研究.结果表明,该多糖具有显著的抗氧化作用和抑癌能力,DPPH和ABTS自由基被清除50%时该多糖浓度分别为0.0312 mg/mL和0.1173mg/mL,当浓度为4mg/mL时,该多糖对人肝癌细胞的抑制率达18.3%.HPGPC结果表明该多糖分子量为44465Da.由结构分析结果推测,该多糖是一种由D-阿拉伯糖和D-半乳糖组成的β构型的多糖.     

小叶女贞叶片提取物药用活性研究

对小叶女贞叶片提取物进行体外抗菌、细胞毒性以及抗氧化药用活性研究,结果表明,小叶女贞叶片提取物对铜绿假单胞菌PAO1具有较强的抑制作用,最小抑制浓度(MIC)为8.0 mg/mL;对人肝癌细胞BEL-7404体外增殖具有显著的抑制作用,浓度在0.6 mg/mL时,抑制率达94.2％;同时具有较强的DPPH自由基清除能力,浓度为15.1 μg/mL时,清除率为85.9％.活性跟踪测试表明,小叶女贞叶片提取物干柱层析得到的各组分中,低极性组分Fr.1为活性部分.     

灰树花多糖对谷氨酸损伤PC12细胞的保护作用

通过谷氨酸诱导PC12 细胞损伤,建立氧化应激损伤的体外模型,探讨灰树花多糖对细胞损伤的保护作用。试验分为对照组、谷氨酸模型组 （谷氨酸15 mmol/L）、治疗组 （灰树花多糖25、50、100、200 mg/L+谷氨酸15 mmol/L）。MTT法检测细胞活性;酶标仪检测抗氧化酶活性、抗超氧阴离子活力及丙二醛含量;ROS Assay Kit试剂盒检测活性氧水平;流式细胞仪检测细胞凋亡率。灰树花多糖质量浓度为100 mg/L时,细胞的存活率最高（80.27% ± 0.82%）,过氧化氢酶活性最高（24.78 µmol•min^-1•mL^-1）,超氧化物歧化酶活性最大（21.42 µmol•min^-1•mL^-1）,谷胱甘肽过氧化物酶活性最好（48.62 µmol•min^-1•L^-1）,抗超氧阴离子活力最大（137.65 µmol•min^-1•L^-1）,MDA含量最小（0.92 nmol/mL）。当灰树花多糖质量浓度为200 mg/L时,活性氧的荧光强度与谷氨酸组比,达到极显著水平（P＜0.01）,抗超氧阴离子的活性升高。 MDA含量不同程度下降。随着灰树花多糖浓度的增大,细胞凋亡减少,与模型组相比具有显著性差异。灰树花多糖能抑制细胞凋亡,提高抗氧化酶活性和抗超氧阴离子的活性,减少活性氧和丙二醛的生成,对谷氨酸损伤具有一定的保护作用。     

3种脱蛋白方法对虎斑乌贼肌肉多糖体外抗氧化活性的影响

【目的】比较3种不同脱蛋白方法对虎斑乌贼肌肉多糖体外抗氧化活性的影响。【方法】采用Sevag法、三氯乙酸法和等电点法对经过热水浸提的虎斑乌贼肌肉多糖进行脱蛋白,同时对脱蛋白多糖的体外抗氧化活性进行研究。【结果】3种不同脱蛋白方法得到的多糖均具有一定的抗氧化能力。当多糖浓度为5 mg/mL时,Sevag法、三氯乙酸法和等电点法得到的脱蛋白多糖对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基的清除率分别为87.05%、42.35%和38.54%,相应的IC50值分别为1.96mg/mL、11.81mg/mL和9.84mg/mL;对羟基自由基(·OH)清除率分别为93.67%、70.80%和68.75%,相应的IC50值分别为0.67mg/mL、1.37mg/mL和2.72mg/mL;对超氧阴离子(O-2)清除率分别为72.33%、62.42%和53.33%,相应的IC50值分别为0.15mg/mL、1.56mg/mL和3.81mg/mL。多糖还原力大小分别为0.183,0.160和0.144。【结论】3种脱蛋白方法所得虎斑乌贼肌肉多糖抗氧化活性大小依次为Sevag法三氯乙酸法等电点法。     

磷酸奥司他韦-乳铁蛋白吸入剂的制备及HPAEpiC细胞毒性与抑菌作用研究

采用喷雾干燥法制备了磷酸奥司他韦-乳铁蛋白干粉吸入剂。以m(L-亮氨酸)∶m(甘露醇)、溶液体积、进料速率、气体流量为影响因素,以收率、卡尔指数(Carr’s index)、空气动力学直径(D_a)、体外肺部细微粒子沉积率(FPF)为主要指标,设计了4因素3水平的正交试验,对制剂配方及喷雾干燥工艺参数进行优化,得到优化后的制备条件为：m(L-亮氨酸)∶m(甘露醇)=3∶0,溶液体积40 mL,进料速率约6.4 mL/min,气体流量约473 L/h。采用CCK-8法测试在优化条件下制备的干粉吸入剂对正常人肺泡上皮细胞(HPAEpiC)的毒性,并采用梯度稀释法和菌落计数法测试了干粉吸入剂对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抑制作用,结果表明：当干粉吸入剂的质量浓度不高于600μg/mL(所含磷酸奥司他韦的质量浓度约为353μg/mL)时,HPAEpiC细胞的存活率大于90%,表明制备的干粉吸入剂在此浓度范围内对HPAEpiC细胞几乎没有损伤作用;在质量浓度为1 mg/mL时干粉吸入剂对金黄色葡萄球菌具有一定的抑制作用,抑菌率为22.50%。     

雪上一枝蒿体内外毒性研究

为观察雪上一枝蒿不同部位提取物的体内外毒性,以MTT法测定了药物在体外对Vero猴肾细胞的毒性作用,以小鼠急性毒性试验测定了药物对小鼠的口服半数致死量(LD₅₀).结果表明：雪上一枝蒿各提取部位对Vero细胞有不同程度的毒性作用,药物浓度为500 μg/mL时,氯仿、石油醚、正丁醇和乙酸乙酯提取物对体外培养24 h的细胞增殖抑制率分别为63.9%, 69.7%, 32.9%和18.2%.氯仿部位、石油醚部位、正丁醇部位对小鼠的经口LD₅₀分别为37.991 mg/kg、6766.928 mg/kg、5492.337mg/kg.     

金针菇多糖对骨骼肌疲劳的作用

本研究探索了金针菇多糖是否具有延缓骨骼肌疲劳的作用.使用连续电刺激蟾蜍腓肠肌作为疲劳模型,比较金针菇多糖溶液和任氏液对蟾蜍腓肠肌疲劳的作用.研究显示,金针菇多糖在浓度分别为0.01mg/mL、0.04mg/mL和0.1mg/mL时,离体腓肠肌收缩幅度下降达到最大收缩幅度的90%、50%和10%的时间明显长于在任氏液作用下的离体腓肠肌(P0.01),并且三种浓度的多糖溶液延缓骨骼肌疲劳的作用具有剂量依赖性的趋势;0.04mg/mL的金针菇多糖溶液也极显著地延长了在体腓肠肌收缩幅度下降达到最大收缩幅度90%、50%和10%的时间(P0.01).上述结果表明,金针菇多糖溶液具有延缓骨骼肌疲劳的作用.     

印度块菌粗多糖的提取及抗氧化活性研究

采用正交试验研究了热水浸提法提取印度块菌(Tuberindicum Cooke&Massee)子实体粗多糖(TICP)的最优工艺,根据方差分析结果确定了热水浸提法的最优工艺为:料液比1∶15,提取时间120 min,提取温度100℃,提取2次,多糖提取率为6.790 2%.用95%乙醇对粗多糖进行醇沉,然后利用总抗氧化能力(T-AOC)测定法、羟基自由基(OH.)清除法、铁离子螯合能力及测定还原能力等方法对上述印度块菌粗多糖的抗氧化活性进行评价,结果显示块菌粗多糖对羟基自由基的清除活性最高,其EC50值为0.26 mg/mL,其次为还原能力和铁离子螯合能力,其EC50值分别为1.15 mg/mL、2.80 mg/mL,同时块菌粗多糖具有较好的总抗氧化能力(T-AOC),当浓度为20 mg/mL时,其总抗氧化能力为72.06 U/mL.     

裙带菜多糖的结构及抗氧化、免疫调节活性

采用水提醇沉法制备裙带菜多糖(UPP),提取率为11.00%±0.25%,UPP由葡萄糖、木糖、甘露糖、阿拉伯糖、岩藻糖、半乳糖、鼠李糖组成,分子质量为691.05 ku.体外抗氧化实验测得UPP的氧自由基吸收(ORAC)能力、ABTS自由基清除能力和DPPH自由基清除能力分别为164.54±4.85μmol/g(以Trolox为标准品计)、64.93±4.76和46.80±6.06μmol/g(后两者均以Trolox为阳性对照).选用RAW264.7细胞对UPP的体外免疫调节活性进行研究,发现UPP在50～1 500 mg/L质量浓度范围内对该细胞无明显毒性,且可显著增强该细胞的吞噬能力,当UPP质量浓度为600 mg/L时,相对细胞吞噬能力达113.22%±2.75%.当UPP质量浓度为600 mg/L时,促RAW264.7细胞释放NO量达12.60±1.01μmol/L;UPP在100～800 mg/L的质量浓度范围内可显著上调诱导性一氧化氮合酶(iNOS)的mRNA表达量.以上研究结果表明,裙带菜多糖具有良好的体外抗氧化能力和免疫调节活性,可应用于保健食品的工业生产中.     

磷酸奥司他韦-乳铁蛋白吸入剂的制备及HPAEpiC细胞毒性与抑菌作用研究

采用喷雾干燥法制备了磷酸奥司他韦-乳铁蛋白干粉吸入剂。以m(L-亮氨酸)∶m(甘露醇)、溶液体积、进料速率、气体流量为影响因素，以收率、卡尔指数(Carr’s index)、空气动力学直径(D_a)、体外肺部细微粒子沉积率(FPF)为主要指标，设计了4因素3水平的正交试验，对制剂配方及喷雾干燥工艺参数进行优化，得到优化后的制备条件为：m(L-亮氨酸)∶m(甘露醇)=3∶0，溶液体积40 mL，进料速率约6.4 mL/min，气体流量约473 L/h。采用CCK-8法测试在优化条件下制备的干粉吸入剂对正常人肺泡上皮细胞(HPAEpiC)的毒性，并采用梯度稀释法和菌落计数法测试了干粉吸入剂对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抑制作用，结果表明：当干粉吸入剂的质量浓度不高于600 μg/mL(所含磷酸奥司他韦的质量浓度约为353 μg/mL)时，HPAEpiC细胞的存活率大于90%，表明制备的干粉吸入剂在此浓度范围内对HPAEpiC细胞几乎没有损伤作用；在质量浓度为1 mg/mL时干粉吸入剂对金黄色葡萄球菌具有一定的抑制作用，抑菌率为22.50%。     

稀土等对霍山石斛组培苗石斛多糖含量的影响

以霍山石斛试管苗为材料,研究硝酸镧稀土(10~40 mg/L)、水杨酸(0.2~5.0 mg/L)和L-赖氨酸(0.5~12.5 mg/L)对石斛多糖含量的影响,并对石斛多糖提取工艺进行探讨。结果表明:稀土镧和L-赖氨酸对石斛多糖含量具有极显著影响,水杨酸有显著影响,在各自浓度范围内提高石斛多糖含量最适浓度分别为20、2.5和0.2 mg/L,与对照相比多糖含量(质量分数)分别增加76.33%、77.11%和23.60%。正交试验表明石斛多糖提取工艺的最佳方案为:100 mL的石油醚 100 mL体积分数为80%的乙醇 40 mL的料液。各因素对霍山石斛多糖提取的影响大小顺序依次为:体积分数为80%乙醇量、石油醚量、料液量。     

人参多糖通过抑制ROS水平和凋亡保护H2O2诱导的心肌细胞氧化应激损伤

为探讨人参多糖缓解心肌氧化损伤的功效,利用过氧化氢(H2O2)诱导的H9c2大鼠心肌细胞建立体外心肌氧化损伤模型,利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞存活率,试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA),流式细胞术检测活性氧(ROS)和细胞凋亡,Western Blot法检测细胞凋亡相关蛋白.结果表明：与对照组(Con)比较,H2O2能够使细胞存活率显著下降(P<0.001);与H2O2诱导组(模型组,Mod)比较,6.25 μg/mL人参多糖预防治疗24 h将细胞存活率由(57.47±5.08)%提高到(85.65±4.28)%(P<0.001),说明人参多糖能够对抗H2O2诱导的细胞毒性作用.流式细胞术DCFH-DA染色结果显示：与Con组比较,H2O2显著升高细胞ROS水平;而人参多糖预防治疗24 h后细胞ROS水平降低,提示人参多糖能够抑制H2O2诱导的H9c2细胞活性氧水平升高,并通过降低MDA含量及提高SOD活性缓解氧化应激损伤.同时,人参多糖可通过增加H2O2诱导损伤引起的Bcl-2/Bax比值,降低凋亡相关蛋白表达来缓解氧化应激导致的细胞凋亡.总之,人参多糖通过抑制ROS水平和细胞凋亡保护心肌细胞氧化应激损伤,为阐述人参保护心脏功效机制及产品研发提供了实验依据.