嗜水气单胞菌毒力与毒力基因分布的相关性

采用PCR扩增的方法对9株鱼源嗜水气单胞菌AEROM ONAS HYDROPHILA中的气溶素基因(AERA)、溶血素基因(HLYA)和丝氨酸蛋白酶基因(AHPA)进行了扩增。结果表明,6/9的A.HYDROPHILA中存在AERA基因,8/9的A.HYDROPHILA中存在HLYA基因,而在7/9的A.HYDROPHILA中检测到AHPA基因。通过比较基因检测的结果与嗜水气单胞菌对鲫鱼的致病性,发现AHPA阴性菌株是无毒株,强毒株都呈AERA HLYA AHPA 基因型。AERA HLYA AHPA 基因型是致病性嗜水气单胞菌主要的基因型。本研究首次发现AHPA阳性的嗜水气单胞菌皆为毒力菌株,并且发现AERA和AHPA基因存在相关性,探讨了嗜水气单胞菌致病性与毒力基因分布的关系。     

109株草鱼源维氏气单胞菌的耐药性分析

本实验采用琼脂扩散法,比较分析了109株草鱼源维氏气单胞菌对25种抗生素的耐药情况。结果表明,89%以上的维氏气单胞菌分离株对青霉素和新生霉素产生高度耐药,70%以上的菌株对麦迪霉素、吉他霉素和克拉霉素不敏感,而菌株对强力霉素、诺氟沙星和链霉素敏感性较好,超过80%以上的菌株对氟苯尼考、阿齐霉素、环丙沙星和甲砜霉素表现敏感或高度敏感。     

鳗鲡病原性气单胞菌AFLP分型研究

以32株从养殖鳗鲡分离的病原性气单胞菌为试验材料,采用Biolog自动菌鉴系统对其进行生理生化鉴定,结果表明,有20株被鉴定为嗜水气单胞菌,7株被鉴定为威隆气单胞菌,1株为豚鼠气单胞菌,其余4株未能鉴定到种.为进一步确定20株嗜水气单胞菌和7株威隆气单胞菌的基因型,筛选了2对引物(E-C/M-C,E-C/M-A)分别对这两个菌种进行了AFLP分析.结果表明:20株嗜水气单胞菌中共检测到88个位点,均为多态性位点;7株威隆气单胞菌中共检测到61个位点,其中60个为多态性位点.经UPGMA聚类分析表明:20株嗜水气单胞菌可初步分为3种类型,每种类型之间平均遗传距离为0.449,同一类型内不同菌株的平均遗传距离为0.127;7株威隆气单胞菌可初步分为4种类型,每种类型之间平均遗传距离为0.467,变异范围为0.415～0.525.该结果为鱼类病原菌的DNA分型研究提供了参考.     

规模化鸡场粪样和苍蝇产CMY-2大肠杆菌中耐药基因与毒力基因调查及其共转移研究

为了解全国20家规模化鸡场粪样和苍蝇产CMY-2大肠杆菌中耐药基因与毒力基因的流行现状及其共转移情况,对2013-2015年间分离自粪样和苍蝇中的549株大肠杆菌,采用聚合酶链反应（PCR）方法筛选出blaCMY-2阳性菌株;脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析blaCMY-2阳性菌株的遗传进化关系;K-B纸片法检测阳性菌株对13种抗菌药物的耐药性;利用PCR技术检测19种相关耐药基因以及14种毒力基因;接合转移试验和质粒复制子分型研究耐药基因及毒力基因的传播方式。结果,33株大肠杆菌呈CMY-2阳性,阳性率为6.0 %,且均表现为多重耐药;检测到15种耐药基因（blaTEM-1、blaCTX-M-55、blaOXA-1、qnrBDS、aac(6’)-Ib-cr、oqxA、tetA、tetC、sul1、sul2、sul3、rmtB和flor）和4种毒力基因（iutA、traT、fyuA和VagC）;33株携带blaCMY-2基因菌株中有21株接合转移成功,blaCMY-2基因可通过lncA/C或lncI1质粒与耐药基因（blaTEM-1、blaCTX-M-55、tetA或sul2）和（或）毒力基因（traT或VagC）共同转移。本研究阐明了规模化鸡场产CMY-2大肠杆菌携带耐药基因与毒力基因的情况,证实了细菌中质粒介导的耐药与毒力的共转移,为耐药性传播及疾病防控提供了参考。     

广东地区感染养殖罗非鱼的无乳链球菌分子分型研究

以广东省内5个罗非鱼Oreochromis niloticus主要养殖区内分离的无乳链球菌Streptococcus agalactiae为研究目标,通过毒力基因PCR检测、多位点序列分型、脉冲场凝胶电泳技术研究广东地区感染罗非鱼的无乳链球菌分子特征。结果发现170株分离无乳链球菌中毒力基因的携带率介于60.59%~100%之间,毒力基因携带形成10个谱系,dltR-bca-sod A-spb1-cfb-bac(38.24%,65/170),dltr-bca-sod A-spb1-bac(23.53%,40/170)和dltr-bca-sod A-spb1-cfb-bac-scp B(22,35%,38/170)为主要的谱系,dltr-bca-sod A-spb1-bac-scpb(8.24%,14/170)和dltr-bca-sod A-spb1(4.71%,8/170)次之。多位点序列分型研究证实170株菌在7个位点均为单一的等位基因,为adh P(10),phe S(1),atr(2),gln A(1),sdh A(3),glc K(2),tkt(2),序列型为ST7型。146株菌脉冲场凝胶电泳结果表明146株菌分为6个簇(A-D,F,G),相似性介于86%~100%之间。A(18),B(16),C(103),D(7)为主要的遗传簇,占菌株数的98.63%(144/146)。基因簇A,C在4个采样区均有发现;基因簇B分布在吴川、茂名和阳江;基因簇D分布在茂名、珠海和阳江;基因簇F和G分别来自茂名和珠海。在A-D遗传簇中均有发现来自不同地区的菌株呈现100%的相似性,为同一克隆株。结果表明广东省主要罗非鱼养殖区内感染链球菌携带毒力基因比率高,序列型均为高致病的ST7型别,不同地区间具有相同的PFGE型别,不同地区间交叉传播感染的可能高。     

齐口裂腹鱼维氏气单胞菌的耐药性分析

采用k-B法检测分离自齐口裂腹鱼的维氏气单胞菌对20种抗菌药物的耐药表型,用PCR法扩增维氏气单胞菌的四环素类tetA、tetC、tetM,氨基糖苷类aph(3')-lia、aac(6')-Ib、ant(3')-Ⅰa、aac(3)-Ⅱa、磺胺类sull、sul2,sul3共10种耐药基因.结果显示:氟哌酸、氟苯尼考、磺胺异恶唑等1 1种药物对维氏气单胞菌有较好的抑菌效果.该菌对磺胺类和部分氨基糖苷类敏感,相关耐药基因也未检出,只有四环素类的tetA基因被检出.药敏试验结果和耐药基因检测结果基本一致,这能为维氏气单胞菌的防治和耐药机理的研究提供参考.     

中华鳖病原维氏气单胞菌的分子鉴定及分子分类学研究

气单胞菌是一类人和水产经济动物的严重致病菌,用分子进化手段鉴定一株分离自红脖子病甲鱼病灶部位的菌HBJY01,同时探讨气单胞菌的进化地位.克隆HBJY01的16S rRNA和gyrB基因,鉴定该菌的属种.用16S rRNA和gyrB基因通过构建系统进化树和计算序列两两间遗传距离的方法,探讨气单胞菌的进化地位.HBJY01的16S rRNA和gyrB基因与维氏气单胞菌的相应基因同源性最高,经分子鉴定为维氏气单胞菌.气单胞菌应独立于弧菌科,单独形成一个科,即气单胞菌科(Aeromonadaceae).     

VNTR技术用于大理地区结核分枝杆菌基因分型的研究

目的:应用数目可变串联重复序列(VNTR)分子分型技术,对大理地区60株肺结核临床分离株进行分型研究,探讨大理地区菌株DNA多态性及基因型特征。方法:采用VNTR分子分型技术对60株结核分枝杆菌3个VNTR位点进行检测,应用Quantity one软件和BioNumerics 6.6软件进行聚类分析。结果:60株结核分枝杆菌可以分为4个基因群(Ⅰ群、Ⅱ群、Ⅲ群、Ⅳ群),28个基因型。Ⅰ群占15.0%,含有5个基因型,Ⅱ群占31.7%,含有8个基因型,Ⅲ群占40.0%,含有11个基因型,Ⅳ群占13.3%,含有4个基因型。结论:大理地区的结核分枝杆菌存在基因多态性,其主要流行群为Ⅲ群。     

成都市武侯区动物性食品源大肠杆菌耐药表型的检测与分析

采用K-B纸片扩散法对36株从2011年到2013年期间分离的携带有毒力基因的动物性食品源大肠杆菌进行氨苄西林、四环素、头孢曲松、环丙沙星等12种抗菌药物的药敏试验.结果表明受试菌株对头孢噻肟、四环素、氨苄西林、诺氟沙星、阿米卡星、氯霉素和环丙沙星有较高耐药率,分别为88.89%、77.78%、69.44%、61.11%、58.33%、47.22%和47.22%.大部分受试菌株普遍存在多重耐药性,耐药谱集中在3耐、5耐、6耐和7耐,特别是5耐以上的耐药菌株占到72.1%.菌株对氯霉素、庆大霉素、四环素和氨苄西林的耐药性随时间推移有上升趋势,并推测携带eae A毒力基因型的大肠杆菌与AMK、CTX、AZT、TET和AMP耐药性之间具有一定关联性,携带aggR毒力基因型的大肠杆菌与TET、CTX、NOR、AMP和CIP耐药性之间具有一定关联性.研究结果揭示了成都市动物性食品源大肠杆菌耐药性普遍和严重,为成都市大肠杆菌耐药性的安全评价提供依据.     

规模化鸡场中产CMY-2大肠杆菌耐药基因与毒力基因的调查及共转移研究

调查规模化鸡场中产CMY-2大肠杆菌耐药基因与毒力基因的流行现状及共转移情况,对549株来源于鸡场粪样和苍蝇的大肠杆菌进行blaCMY-2PCR检测;K-B法检测耐药表型;PCR扩增19种相关耐药基因和14种毒力基因;接合试验和质粒复制子分型研究耐药基因与毒力基因的共转移.结果显示:6.0%(33/549)大肠杆菌呈CMY-2阳性,且均为多重耐药;检测到15种耐药基因和4种毒力基因,其中floR,blaTEM-1,sul2,sul1,traT,VagC检出率较高;63.6%产CMY-2大肠杆菌中blaCMY-2基因可通过lncA/C或lncI1质粒与耐药基因和(或)毒力基因共转移.本研究表明规模化鸡场粪样和苍蝇源产CMY-2大肠杆菌已成为耐药基因和毒力基因的重要储存库,携带二者质粒的转移导致耐药与毒力的传播扩散.     

重庆市水产品中副溶血性弧菌分离株的毒力基因研究

目的:了解重庆市副溶血性弧菌分离株的毒力基因、血清型以及耐药性,为防治副溶血性弧菌引起的食源性疾病提供依据.方法:采用PCR方法检测溶血素基因,并结合药敏试验以及血清分型进行综合分析.结果:323份水产品样品中共分离出的35株副溶血性弧菌,其tdh和trh基因携带率分别为14.29%、2.86%,血清群主要为:O3群、O5群、O1群;14株临床分离株主要为O1群、O3群.两组不同来源的菌株均对头孢噻肟、环丙沙星、诺氟沙星敏感,对氨苄西林均有较强的耐药性.结论:重庆地区水产品中副溶血性弧菌的毒力基因携带率较低,但是血清型呈现多样性,且耐药性较严重,因此存在发生副溶血性弧菌食物中毒的潜在危险.     

针对不同来源金黄色葡萄球菌分离菌株的agr Ⅰ-Ⅳ分型初探

目的:金黄色葡萄球菌附属基因调节子(agr)位点是一个全面的群集感应系统并且控制着毒力因子的产生,本研究旨在针对不同来源的金黄色葡萄球菌分离菌株进行agr Ⅰ-Ⅳ基因分型研究.方法:根据金黄色葡萄球菌agrⅠ-Ⅳ基因组别类型的引物,对五种不同来源的169株金黄色葡萄球菌DNA模板进行多重PCR扩增,获得目的基因,以判断agr基因型.结果:169株分离菌株中,agrⅡ型的检出率为19%(32/169),agrⅢ型检出率为12%(20/169),agrⅣ型检出率为8%(14/169),五种不同来源的金黄色葡萄球菌均有检出agrⅡ型,均未检出agrⅠ型,并且都含有未能分型的agr阴性菌株.研究结果表明不同来源金黄色葡萄球菌分离菌株中agr Ⅰ-Ⅳ基因型的流行情况.该方法对于金黄色葡萄球菌菌株分子分型有一定的借鉴意义,也为金黄色葡萄球菌菌株分子流行病学调查奠定一定的基础.     

针对不同来源金黄色葡萄球菌分离菌株的agr I-IV分型初探

目的: 金黄色葡萄球菌附属基因调节子(agr)位点是一个全面的群集感应系统并且控制着毒力因子的产生, 本研究旨在针对不同来源的金黄色葡萄球菌分离菌株进行agr I-IV基因分型研究. 方法: 根据金黄色葡萄球菌agrI-IV基因组别类型的引物, 对五种不同来源的169株金黄色葡萄球菌DNA模板进行多重PCR扩增, 获得目的基因, 以判断agr基因型. 结果:169株分离菌株中, agrⅡ型的检出率为19%(32/169), agrⅢ型检出率为12%(20/169), agrⅣ型检出率为8%(14/169), 五种不同来源的金黄色葡萄球菌均有检出agrⅡ型, 均未检出agrⅠ型, 并且都含有未能分型的agr阴性菌株. 研究结果表明不同来源金黄色葡萄球菌分离菌株中agr I-IV基因型的流行情况, 该方法对于金黄色葡萄球菌菌株分子分型有一定的借鉴意义, 也为金黄色葡萄球菌菌株分子流行病学调查奠定一定的基础.     

成都地区骨科患者伤口金黄色葡萄球菌感染的分子流行病学及耐药性分析

目的:分析四川成都地区骨科伤口感染金黄色葡萄球菌的分子流行病学特征与耐药现状.方法:收集2016年9月至2019年9月成都地区西部战区总医院骨科分离自伤口分泌物的金黄色葡萄球菌,进行耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)鉴定及其SCCmec分型、各菌株MLST分型和spa分型.聚合酶链式反应(PCR)检测20种金黄色葡萄球菌常见毒力因子,并对12种常用抗菌药物进行药敏分析.所有结果同时进行MRSA与甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)菌株间的比较.结果:195株细菌MRSA检出率为21.0%,MRSA以SCCmecⅠ(41.5%)、Ⅳ(36.6%)型为主, MLST型别主要为ST59 (58.5%)和ST630 (17.1%),spa型别主要为t437 (43.9%);MSSA的MLST主要型别为ST188 (22.1%)和ST6 (13.6%),spa型别主要为t189 (19.5%)和t701 (10.4%).MRSA菌株hlb(P0.01)和seb(P0.01)基因携带率较高,而cna(P0.01)和ebpS(P0.05)基因携带率较低,且这一结果与分子分型相关.耐药分析提示某些抗生素可在经验性抗金黄色葡萄球菌中优先选择.结论:成都地区骨科伤口感染金黄色葡萄球菌主要为ST59/ST630-t437-MRSA-SCCmecⅠ/Ⅳ和ST188-t189-MSSA.分子分型结果与毒力因子携带情况密切相关,本研究结果对本地区抗菌策略的制定有一定参考作用.     

鸭致病性大肠杆菌中耶尔森菌强毒力岛的分子流行病学调查

为了解耶尔森菌强毒力岛(HPI)在鸭致病性大肠杆菌中的流行情况,根据HPI结构基因irp2和fyuA参考序列设计了引物,用PCR方法对从成都等地分离的64株鸭致病性大肠杆菌和28株健康雏鸭泄殖腔拭子分离的大肠杆菌基因进行了扩增和检测,并对5个菌株相关基因进行了克隆和序列分析.结果表明,irp2和fyuA携带率在鸭大肠杆菌病分离株分别为40.6%(26/64)和39.1%(25/64),在健康鸭泄殖腔大肠杆菌分离株分别25.0%(7/28)和21.4%(6/28).鸭大肠杆菌病分离株携带fyuA和irp2的阳性率显著高于健康鸭大肠杆菌分离株(P<0.05),HPI毒力岛的携带率与菌株的致病性呈明显的正相关.分析表明相关基因与GenBank中参考序列的同源性高达98%以上.     

应用多重PCR法鉴定产志贺样毒素大肠杆菌毒力基因

目的：从各种来源的标本中快速鉴定STEC毒力基因，并了解其在菌株中的分布情况．方法：采用多重PCR的方法鉴定STEC的特征性毒力因子stx1，six2，eaeA和hlyA．结果：各种标本中鉴定出产志贺毒素的大肠杆菌共46株，38株(82．6％)携带stx1基因，30株(65．2％)具有six2基因，22株(47．8％)同时检测到2种基因．36株(78．3％)检测到hlyA基因，24株(52．2％)有eaeA基因．4种毒力基因即six1 stx2 eaeA hlyA的有19株(41．3％)，而且血清型均为O157．结论：产志贺样毒素大肠埃希菌毒力基因图谱是一个重要的分子流行病学标志，应用多重PCR可简便、快速、敏感、特异性地鉴定出STEC的特征性毒力基因，并依照毒力基因存在情况判定其致病性能．     

Nuc和mecA基因在金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性检测中的初步应用

目的为获得金黄色葡萄球菌对甲氧西林的耐药信息,评估通过PCR扩增nuc基因、mecA基因检测金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性的可行性。方法收集获得63株临床分离鉴定的金黄色葡萄球菌,采用传统药敏检测方法进行菌株药敏测试;再用PCR方法检测菌株是否携带nuc基因和mecA基因,以传统药敏检测结果为参照,评估用PCR扩增技术检测金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性的可行性。结果 1.样本菌株中有24株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphyococcus aureus,MRSA),39株为甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(Methicillin-sensitive Staphyococcus aureus,MSSA)。来自重症医学科的分离株中MRSA数量较多。2.样本菌株nuc基因携带率为85.7%,其中nuc基因在MRSA菌株中的携带率为87.50%,在MSSA菌株中携带率为84.62%;3.样本菌株mecA基因的携带率为19.05%,其中MRSA菌株的mecA基因携带率为50.0%,MSSA中均不携带mecA基因。来自重症医学科的MRSA中同时携带mecA基因和nuc基因的比例为77.78%。结论用PCR技术检测nuc基因、mecA基因来快速鉴定金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性可能存在一定比例的误诊结果。     

MIRU技术在石河子地区部分结核杆菌基因分型聚类分析中的初步应用

目的采用结核杆菌散在分布重复单位(mycobacterial interspersed repetitive units,MIRU)分型技术,对石河子地区结核杆菌临床分离株进行基因分型及聚类分析,初步筛选可用于石河子地区结核杆菌临床分离株基因分型的MIRU位点。方法以本实验室保存的结核杆菌临床分离株基因组DNA为模板,采用PCR技术与核酸凝胶电泳技术,分别对7个MIRU位点进行检测,计算分辨指数,应用ntsys2.10e软件对菌株基因型进行聚类分析。结果石河子市33株临床分离株有22种基因型,均与结核杆菌标准株(H37Rv)不同;在石河子地区结核杆菌临床分离株的7个MIRU位点中,分辨率高的位点有1个(MIRU26);中等有2个(MIRU10,MIRU16);低的有3个(MIRU23,MIRU39,MIRU40);有一个位点分辨率为0(MIRU27);石河子地区分离株总HGI指数为:0.966。结论本实验选取的7个MIRU位点中有3个(MIRU26,MIRU10和MIRU16)可用于石河子地区结核杆菌临床分离株初步基因分型。     

耐碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的分离鉴定及生物学特性分析

以临床尿路感染患者尿液为研究对象,通过分离培养及16s rDNA进行肺炎克雷伯菌的分离鉴定;采用Kirby-Bauer纸片法进行药敏实验,并对分离株进行碳青霉烯酶表型筛选;通过PCR检测常见的碳青霉烯酶耐药基因、荚膜血清型和毒力基因分布情况;对分离的肺炎克雷伯菌株进行了生物被膜形成能力及其对小鼠致病力的分析。本研究从采取的86例尿液标本中分离检出11株耐碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌,分离率为12.79%。耐碳青霉烯酶基因PCR检测结果显示,blaNDM、blaVIM、blaIMP和blaKPC基因在分离株中均呈现不同程度的分布。耐药性分析发现11株肺炎克雷伯菌对氨苄西林耐药率为90.91%,对头孢噻肟耐药率为63.64%,对链霉素、庆大霉素、氯霉素和诺氟沙星的耐药率较低。耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌荚膜分型结果显示,分离的11株细菌中10株均为强毒力型菌株（90.9%）,其中K57血清型4株（36.4%）,K1血清型1株（9.1%）,K2血清型1株（9.1%）,K5血清型1株（9.1%）,K20血清型3株（27.3%）,提示该批分离株具有较强的致病力。此外,毒力因子分布结果显示,其毒力因子rmpA（54.5%）、Aerobactin F（54.5%）在菌株中分布较为广泛。生物被膜形成能力检测及小鼠致病性试验结果显示,9株分离株均有较强的生物被膜形成能力,菌株致病力可能与荚膜血清型及生物被膜形成能力相关。综上所述,临床分离的致尿路感染病原肺炎克雷伯菌呈现多重耐药特征,强毒力菌株以K57荚膜型为主,K1、K2均有分布,提示对尿路感染病原应加强耐药监测,合理使用抗菌药物,有效防控多重耐药和强毒力菌株的感染与流行。     

应用PCR技术快速检测葡萄球菌耐药基因的初步研究

根据上述抗生素抗性基因的保守序列,设计合成其特异的引物,PCR扩增检测成都地区临床分离的86株葡萄球菌的相应耐药基因,并与临床药敏试验比较,追踪调查其预后情况.结果55株耐甲氧西林分离株中mecA基因检测阳性的为48株,基因型与表型符合率87.3%;59株红霉素耐药菌株中ermA和(或)ermC基因阳性的为54株,基因型与表型符合率91.5%.而30株甲氧西林敏感的分离株中mecA基因检测阴性的为22株,基因型与表型符合率73.3%;26株红霉素敏感菌株中ermA和ermC基因阴性的为15株,基因型与表型符合率57.76%.mecA、ermA、ermC基因检测均阳性的患者死亡率(66.7%,26/39)与上述基因均阴性的患者死亡率(21.4%,3/14)存在显著性差异(p＜0.01).