热休克蛋白及其在生殖中的作用

本文简述了热休克蛋白的发现分类和调节以及其在生殖中的作用。     

营养元素调控热休克蛋白研究进展

热休克蛋白(Heat Shock Protein,HSP)是生物体在受热或其他不利环境因素刺激下应激合成的一组特殊蛋白质.HSP的生物学功能广泛,不仅表现在热应激条件下参与细胞的抗损伤、修复和热耐受过程,保护细胞生命活动,而且在蛋白质折叠、跨膜运输、细胞骨架及核骨架稳定等方面发挥重要作用.由于机体的营养状况与应激能力密切相关,本文主要综述了营养元素对HSP合成的调控作用.     

SPC-A-1 70KD热休克蛋白抗原肽复合物的提纯及抗瘤免疫研究

目的探讨人肺腺癌细胞(SPC-A-1)70 KD热休克蛋白的提取方法及体外抗肿瘤作用.方法 SPC-A-1培养至对数生长期,43 ℃加热处理12 h,超声破碎细胞离心取上清、盐析沉淀、30 KD分子筛滤过、SDS-PAGE分离鉴定,MTT法测定其体外细胞毒活性.结果提取产物经SDS-PAGE分析,其电泳区带在70 KD位置处,细胞毒性试验表明,此复合物能够加强脐血有核细胞的抗肿瘤效果.结论该提取方法流程简便、实用,有助于临床广泛开展热休克蛋白的应用.     

热休克蛋白的研究进展

在不利的环境中,各种有机体都有其共同对应的分子反应,即正常基因的表达抑制和一组特殊基因——热休克基因的激活和表达,导致热休克蛋白的大量产生,热休克蛋白主要作为分子伴侣而参与蛋白质的折叠、转运及组装等过程,能恢复或加速清除细胞内已变性的蛋白质而稳定细胞结构,细胞产生热耐受。随着对热休克蛋白研究的不断深入,在生物工程和医学等方面的应用前景十分广阔。     

融合聚精氨酸九肽的小热休克蛋白 原核表达及蛋白纯化

目的构建小热休克蛋白-聚精氨酸九肽融合蛋白的原核表达载体,表达纯化融合蛋白.方法在小热休克蛋白表达载体的基础上利用点突变方法引入聚精氨酸九肽对应序列,转入BL21大肠杆菌感受态细胞进行原核表达,利用亲和层析方法对表达蛋白进行纯化.结果成功构建了融合聚精氨酸九肽的HSP16. 5融合蛋白表达载体,并对其在大肠杆菌细胞中的原核表达进行条件优化,研究显示:在诱导剂IPTG浓度为0. 5 mmol、37℃条件下诱导4 h目的蛋白产量较高.结论此实验成功构建了小热休克蛋白-聚精氨酸九肽融合蛋白的原核表达载体,得到了高纯度的小热休克蛋白-聚精氨酸九肽融合蛋白,为进一步研究其功能奠定基础.     

热休克蛋白70的生物学功能研究进展

热休克蛋白是熟休克反应中转录合成的一组特殊糖蛋白.其中HSP70是最保守和最重要的一种蛋白质,HSP70具有多种生物学功能,包括分子伴侣功能,参与肿瘤免疫,抗细胞凋亡功能,提高细胞的应激耐受性,促进细胞增殖等等.本文着重对HSP70生物学功能研究的进展作一综述.     

热休克蛋白(HSPs)基因家族在涡虫中的研究进展

热休克蛋白(HSPs)广泛存在于从细菌到人类的各种有机体中,在生物生命活动中具有重要生理功能,如作为分子伴侣参与细胞增殖和分化以及免疫应答等;同时某些HSPs表达水平的高低可作为衡量环境污染或者人类恶性肿瘤疗效和预后的重要指标.涡虫是扁形动物门的代表动物,因其在动物系统演化中的特殊地位和极强的再生能力而作为研究发育和再生的模式动物之一.概述了HSPs基因家族成员在涡虫抗逆和再生研究中的主要成果和最新进展,并对目前存在的问题及未来的发展方向进行了总结和展望.以期为揭示HSPs在高等动物中的作用机制提供参考.     

卡介苗Hsp16.3基因突变株对小鼠巨噬细胞RAW 264.7自噬的影响*

构建及鉴定卡介苗(BCG)Hsp16.3基因突变株,观察该突变株对小鼠巨噬细胞自噬功能的影响。通过聚合酶链反应(PCR)的方法扩增Hsp16.3基因两侧分子量分别为663 bp和684 bp的两个DNA片段,并将这两个目的片段分别插入p KO载体上相应的位点。通过硫酸卡那霉素筛选,利用双酶切以及测序的方法,获得阳性重组质粒p KO-Hsp16.3。将阳性重组质粒p KO-Hsp16.3电转入BCG感受态细胞中,经过硫酸卡那霉素和蔗糖两次筛选,得到BCG Hsp16.3基因突变株。将筛选培养的BCG Hsp16.3突变株用于小鼠巨噬细胞的感染实验,并通过Western Blot和细胞免疫荧光技术对自噬相关蛋白的表达水平的变化进行观察及分析。成功获得重组质粒p KO-Hsp16.3的阳性克隆;电转化该重组质粒,并经过硫酸卡那霉素筛选和蔗糖反筛选,成功得到BCG Hsp16.3基因突变株。通过Western Blot以及免疫荧光分析发现,BCG Hsp16.3基因的突变株促进了小鼠巨噬细胞自噬的发生。     

药材甲热激蛋白基因SpHsp60的克隆及温度胁迫下的表达

本研究采用RT-PCR技术克隆了药材甲热激蛋白60(Heat shock protein 60,Hsp60)基因的cDNA全长序列,命名为SpHsp60(GenBank登录号:KX778623).氨基酸序列分析表明SpHsp60具有Hsp60基因家族高度保守的基序,实时定量PCR技术检测了不同温度胁迫后该基因的表达量,结果表明:-5℃和0℃低温处理2h,药材甲成虫体内的SpHsp60的表达量均显著高于对照组,且42℃高温处理2h后的表达量也显著高于对照组.说明SpHSP60与药材甲应对极端温度胁迫相关.     

A preliminary study on functional domains of small heat shock protein Hsp16.3

Hsp16.3, the small heat shock protein (sHSP) from Mycobacterium tuberculosis, was originally identified as an immunodominant antigen,which possesses three functional domains typical of sHSP family, namely the N-terminal hydrophobic region, α-crystallin domain and a short non-conserved C-terminal extension.To further understand the functional assignment of these independent regions, the three functional domains of Hsp16.3 were defined and the two N- or C-terminal truncated Hsp16.3 remnants were successfully cloned, expressed and purified.In the far and near circular dichroism analysis, the results showed that these remnants expressed similar secondary and tertiary structures to that of wild-type protein.During the reassembly of wild-type nonamer, the C-terminal truncated remnant could interact with the wild-type protein to form hetero-oligomers.When trypsin is used to digest the wild-type Hsp16.3, its α-crystallin domain could resist such degradation.Taken together, these results indicate that the stable secondary and tertiary structures of Hsp16.3 are mainly kept by its α-crystallin domain.     

氯胺酮相关性膀胱炎大鼠逼尿肌热休克蛋白27的表达及其意义

研究热休克蛋白27(HSP27)在氯胺酮诱导膀胱炎大鼠逼尿肌中的表达及临床意义.基于氯胺酮腹腔内注射诱导大鼠膀胱炎模型,选择不同时间通过尿流动力学检测膀胱收缩功能,收集大鼠膀胱组织,常规病理染色观察膀胱粘膜及逼尿肌结构,免疫组化法检测HSP27在逼尿肌中的表达水平.实验后观察结果表明,同对照组相比,实验组尿动力学表现为膀胱收缩频率显著增加及初感膀胱容量明显减小;对照组膀胱组织无明显病理及免疫表达变化,而实验组可观察到不同程度膀胱粘膜充血,炎症细胞浸润,HSP27表达水平的上升,且HSP27表达水平与诱导时间呈正相关.实验结果表明HSP27的表达水平可能与氯胺酮膀胱炎的逼尿肌收缩活动程度相关.     

Expression profile analysis of 9 heat shock protein genes throughout the life cycle and under abiotic stress in rice

Plant heat shock proteins (Hsps) facilitate protein folding or assembly under diverse developmental and adverse environmental conditions. Nine OsHsps were identified in our previous study from a proteomic analysis of rice cv. IRAT 109 leaf samples at the seedling stage under drought stress. To obtain additional information on the 9 OsHsp genes, this study focused on an expression profile analysis at different development stages throughout the life cycle of rice, and under different abiotic stresses and phyto-hormone treatments. The 9 genes exhibited distinctive expression patterns in different organs or development stages. Five of the genes (OsHsp72.90, OsHsp72.57, OsHsp71.18, OsHsp24.15 and OsHsp18.03) showed high expression in the endosperm, indicating that OsHsp genes may play important roles in rice seed development. All 9 OsHsps were up-regulated under heat, polyethylene glycol, and abscisic acid treatment, whereas salt stress caused up-regulation of 6 genes (OsHsp93.04, OsHsp71.10, OsHsp71.18, OsHsp72.57, OsHsp24.15 and OsHsp18.03) and cold stress resulted in down-regulation of OsHsp93.04 and OsHsp72.57. These diverse expression profiles imply potential functional diversity of the Hsp gene family in rice.     

白芷悬浮培养细胞外21KD钙调素结合蛋白的鉴定及纯化

利用生物素－ＣａＭ凝胶覆盖技术，在白芷悬浮培养细胞外检测一个分子量为２１ＫＤ的钙调素结合蛋白（ＣａＭｂｐ），并用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤柱，ＣＭ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ阳离子交换柱层析将其纯化。     

粘附蛋白单抗对烧伤休克大鼠微循环的影响

探讨运用白细胞粘附分子ＬＦＡ－１单抗和血管内皮细胞粘附分子ＩＣＡＭ－１单抗防治烧伤休克、改善微循环的作用机理。方法：复帛蛎鼠烧伤休克模型,用红细胞跟踪相关仪和电视测微仪测量静脉血液流速、口径、流量;镜下观察细胞脉白细胞粘附数,并记录动物存活时间。     

黑豆中抗真菌蛋白的纯化及活性鉴定

利用硫酸铵分级沉降、亲和色谱Affi-gel和离子交换色谱SP-Toyopearl从黑豆种子中分离出一种抗菌蛋白,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定达到电泳纯.利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳标准蛋白迁移率与分子量对数的关系,计算出该抗菌蛋白的分子量为93.3 kDa,还原和非还原状态下均显示单一区带,说明该抗真菌蛋白为单倍体蛋白.抑菌试验结果表明,此纯化的蛋白对植物致病菌瓜果腐霉病菌、棉花枯萎病菌、苹果轮纹病菌、葡萄灰霉病菌和菜豆根腐病菌等5种真菌的生长具有不同的抑制作用.