腐牛乳中产β-半乳糖苷酶酵母菌菌株的分离和筛选以及该酶的提纯与固定化

从腐牛乳中分离筛选出一产β-半乳糖苷酶(E.C.3.2.1.23)酵母菌菌株(No.47).摇瓶发酵获酵母细胞,利用甲笨-自溶法破碎细胞,抽提的β-半乳糖苷酶通过2次丙酮沉淀,DEAE-纤维素(DE52)柱层析、羟基磷灰石柱层析进行纯化。该酶仅以一种分子形式存在。巯基与酶的活性中心有关。此酶对金属离子敏感,能被多种金属离子及SDS、Urea、EDTA等抑制。纯化的酶固定在戊二醛交联的明胶颗粒上,残活力为14%。固定化酶最适pH为6.6,而自然酶最适pH为6.4;固定化酶与自然酶最适温度均为45℃;固定化酶pH稳定范围为6.8-9.2,自然酶为6.4-9.2,自然酶为6.4—8.0;固定化酶热稳定性优于自然酶;以邻硝基苯酚-β-D-吡喃型半乳糖苷(简称ONPG)为底物,固定化酶表观米氏常数为3.4mmol·dm~(-3),自然酶米氏常数为2.5mmol·dm~(-3)。     

熊猫豆β—D—半乳糖苷酶的基本性质研究

经硫酸铵分级分离,DEAE－cellulose 52,CM-cellulose 52和Sephacryl S 100HR凝胶过滤层析方法从熊猫豆黄化苗中获得了一种β－D－半乳糖苷酶,活性收率为8．0％,纯化倍数为245。经PAGE显示单一蛋白着色带,用IEF－PAGE测定其PI为4．1。SES－PAGE显示2条蛋白着色带,其相应分子量分别为40kD和29kD.Sephadex G200层析法测得表观分子量为68kD,以ONPG和PNPG为底物测得该酶的表观Km分别为3.02mmol/L和0．33mmol/L。最适pH为4．2,最适温度为52℃。以乳糖为底物测得表观Km为43mmol/L.HgCI2,DTNB,NEMI,半乳糖和乳糖对酶表现出不同的抑制作用。对某些金属离子和化学修饰剂对酶活性的影响也进行了探讨。     

β—半乳糖苷酶基因在HeLa细胞中瞬时表达的动态研究

本文研究了由ＳＶ４０早期启动子和增强子启动的β－半乳糖苷酶基因在ＨｅＬａ细胞瞬时表达的动态情况。外源β－半乳糖苷酶基因经磷酸钙方法导入受体细胞５０ｈ后其酶活性为６０ｍｉｌｌｉｕｎｉｔｓ，该酶活性维持一段时间后呈下降趋势，经转染２７０ｈ后，该酶活性降为０。此外本文结果还表明，携带有β－半乳糖苷酶基因的质粒对受体细胞ＨｅＬａ具有较高的转染效率。     

乳酸克鲁维酵母（Kluveromces lactis）β—半乳糖苷酶的稳定性 …

探讨了乳酸克鲁维酵母（Ｋ．Ｌａｃｔｉｃ）β－半乳糖苷酶金属离子稳定性和热稳定性。证明某些金属离子对β－半乳糖苷酶具激活作用,另一些金属离子对β－半乳糖苷酶活性影响不大,但是在高浓度的条件下均地酶活性不同程度的抑制作用。Ｃａ＾２＋对酶的抑制到盐,脱脂乳以及Ｍｇ＾２＋,Ｍｎ＾２＋所恢复。     

地衣芽孢杆菌NK-27菌株β-甘露糖苷酶的产酶条件及粗酶性质

地衣芽孢杆菌NK－27菌株可以产生胞外β－甘露聚糖酶和胞内β－甘露糖苷酶。β－甘露糖苷酶活力主要集中于细胞匀浆液中。以2．0％魔芋粉、1．0％（NH4）2SO4为碳、氮源地衣芽孢杆菌NK－27菌株经30℃振荡培养20－24h产生β－甘露糖苷酶酶活力最高。该酶于30－40℃、pH6.0时酶活力最高，在30－40℃、pH5．4－7．0酶稳定性较好。     

β—半乳糖苷酶基因在小鼠乳腺细胞表达的研究

构建了以乳清酸蛋白（ＷＡＰ）５′区２．６ｋｂ为调控序列,指导β－半乳糖苷酶基因的真核表达质粒,采用直接注射质粒于乳腺的方法在小鼠乳腺中表达出β－半乳糖苷酶活性,证实ＷＡＰ基因调控序列的功能正确性,可以用于转基因动物乳腺表达研究,同时证实该方法可以作为一种暂时性表达载体的验证方法．     

丝状真菌产生β—葡聚糖酶的研究Ⅰ.GCN平板的建立及产酶菌株的选育

本文报道适用于筛选丝状真菌产生β－葡聚糖酶的平板初筛法。即：β葡聚糖－刚果红营养平板法（ＧＣＮ）平板法。运用此法从分离源中初筛到产酶菌黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）Ａ２１，经ＵＶ和ＮＴＧ多次诱变，获得产酶能力高于亲株１．４６倍变异株Ａ２１４８。在初始ＰＨ６．８、温度２９℃和以碱产为主碳源培养基中，变株Ａ２１４８经８６ｈ培养产生β－葡聚糖酶１２８ｕ／ｍｌ，并伴有少量糖化酶、中性蛋白酶及     

转糖基β-半乳糖苷酶产生菌筛选和鉴定及酶催化生成低聚半乳糖

通过水解活性和转糖基活性筛选, 从实验室97株保存菌种中获得1株具有转糖基活性的β-半乳糖苷酶产生菌,克隆并序列分析了该菌株16SrDNA基因片断,GenBank收录号为DQ267829. 综合其形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列同源性分析结果, 将其鉴定为巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）2-37-4-1. 确定了该菌株β-半乳糖苷酶产酶培养基的碳源为乳糖1%,氮源为蛋白胨0.5%和酵母膏0.5%,培养条件为37℃摇床培养18?h;碳源实验证明,该菌株β 半乳糖苷酶产生为乳糖诱导型.利用薄层层析技术研究了pH值、乳糖底物浓度、反应温度和反应时间对该菌株β-半乳糖苷酶以乳糖为底物转糖基合成低聚半乳糖的影响, 确定最适反应条件为pH7.5、50mmol/L（磷酸缓冲液）配制的40%乳糖溶液, 55℃反应24h.转糖基反应产物高压液相色谱分析其组成为低聚半乳糖25.68%, 双糖（包括乳糖和转移二糖）33.02%, 葡萄糖26.37%和半乳糖14.92%.     

一株聚β—羟基丁酸高产菌株的分离与研究：Ⅱ.出发菌株的筛选？…

从城市生活污水中分离筛选到一菌株,具如下主要特征：杆菌,（０．８５－１．２）＊２．０－５．０）μｍ;革兰氏染色阴性;具衣鞘,细胞包在鞘里,丝状体很长,但无分枝;亚端生鞭毛;胞内具ＰＨＢ颗粒和异染颗粒;液化明胶微弱;菌落为光滑型和丝状两种。经鉴定该菌株为浮液球衣细菌。