柱层析法纯化且人肿瘤坏死因子α及其抑瘤作用

半合成人肿瘤坏死因子ＴＮＦ－α在大肠杆菌中高表达，发酵后收集菌体经超声破碎，然后在１２０００ｒ／ｍｉｎ４℃离心１０ｍｉｎ，上清经６０℃热处理３０ｍｉｎ，离心上清用６０％饱和度的硫酸铵沉淀，再依次经过ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５，ＤＥＡＥ－５２纤维素和Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ－７５柱层析，得到的纯化ｒｈＴＮｆ－ａ比活性为２×１０＾７ｕ／ｍｇ，回收率为２４％，经过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳和ＨＰＬＣ鉴定，纯度达９５     

一步法免疫亲和层析纯化重组人肿瘤坏死因子

提出一种简便的免疫亲和层析方法，有效地分离纯化重组人肿瘤坏死因子（ｒＨＴＮＦ），此法不需预先分离纯化单克隆抗体．用交联刘ｄｉｍｅｔｈｙｌｓｕｂｅｒｉｍｉｄａｔｅ使抗ＴＮＦ的单克隆重抗体和ｐｒｏｔｅｉｎＡ—ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ共价结合，成为稳定的免疫基质，制备免疫亲和层析柱，将重组ＴＮＦ粗制品一步纯化为均一组份．     

γ-干扰素和β-肿瘤坏死因子对人肿瘤细胞株协同抗增殖作用的研究

本文以三个人肿瘤细胞株为模型，分析了顺序、剂量和时间等因素对γ-干扰素和β-肿瘤坏死因子联合抗肿瘤细胞增殖的影响．结果表明：（1）γ-干扰素和β-肿瘤坏死因子同时处理细胞具有很好的协同抗增殖作用；（2）一个因子继以另一因子的处理效果不及双因子同时处理，以先用β-肿瘤坏死因子处理，再用γ-干扰素处理的效果相对最差；（3）坑增殖效应与处理时间和作用剂量直接相关；（4）每次lh，隔日一次，每周三次的间歇性处理与24h连续处理同样有效本文结果为临床设计肿瘤的治疗方案提供了一定的实验依据．     

重组人肿瘤坏死因子蛋白TNF-α的纯化与功能鉴定

 串联亲和纯化系统（TAP）是近年来广泛使用的一种可在接近于生理条件下探究蛋白间相互作用的生化纯化方法。目前许多关于TAP 的研究报道均使用细胞内转录因子为目标蛋白,探索细胞内与其相互作用的蛋白分子。本文尝试建立一种细胞外配体-受体刺激介导的信号转导初始复合体的纯化体系,为此选择了一种多功能的免疫分子配体蛋白--肿瘤坏死因子蛋白超家族（TNFSF）中的核心成员TNF-α。TNF-α 是一个强效促炎因子,可介导炎症反应、细胞凋亡和激活等生理效应,是至今研究最多的TNFSF 成员。利用原核表达系统纯化出了一种带有多个标签的重组人源TNF-α 蛋白,通过检测其受体下游信号通路鉴定该蛋白与天然TNF-α 蛋白的生理活性相似,从而证明该蛋白可以用于胞外TAP 系统探究TNFR 下游信号通路,为配体-受体刺激介导的信号转导初始复合体的胞外串联亲和纯化系统的建立奠定了基础。     

人肿瘤坏死因子α在鱼腥藻7120中的表达

通过三亲结合转移方式,将含人肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）ｃＤＮＡ和ｐｓｂＡ启动子的鱼腥藻－大肠杆菌穿梭质粒ＰＤＣ－ＴＮＦ导入单细胞丝状鱼腹藻７１２０中。     

牦牛肥胖基因和肿瘤坏死因子α基因的序列分析

肥胖基因(ob gene)是近年来刚被克隆的新基因，该基因的表达产物瘦蛋白(Leptin)具有调节体重、影响动物生长和繁殖率等一系列生物学功能．肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α，TNF-α)是一种主要由活化单核巨噬细胞和T淋巴细胞产生的多效性细胞因子，时TNF-α基因的基础及应用研究已成为近年来动物抗病育种的研究热点之一，本文克隆及测序分析了牦牛上述两个基因的部分片段。结果表明：ob基因大小为1773bp，TNF-α基因为1160bp，通过genebank中的blastn比较分析牦牛ob基因和TNF—α基因与普通牛种的相应基因同源性都高达98％。     

重组人肿瘤坏死因子粗提取工艺的研究

通过研究重组人肿瘤坏死因子α(rhTNF-α)的粗提取工艺中各操作条件对目标蛋白纯化的影响,发展了一条纯化rhTNF-α的集成化工艺.该工艺组合细胞破碎,热变性与硫酸铵分级沉淀,有效节省离心步骤,缩短工艺流程,所得粗提物中目标蛋白占总蛋白含量的57%,目标蛋白回收率为90.3%,活性回收率为85.8%,各项指标均比未集成的工艺有较大程度的提高.     

人肿瘤坏死因子Gln102—Glu107缺失型的构建…

基于对有关肿瘤坏死因子结构和功能关系研究资料的分析，设计了一种缺失了Ｇｌｎ １０２－Ｇｌｕ１０７位共６个氨基酸的新型肿瘤坏死因子，首先，利用ＰＣＲ技术分析扩增出Ｖａｌｌ－Ｇｙｓ１０１和Ｇｌｙ１０８－Ｌｅｕ１５７基因片段，连接后再克隆到表达载体ｐＪＬＡ５０３中，转化大肠杆菌，发酵时进行４２℃诱导表达，得到了新型肿瘤坏死因子ＣＧ－ｈＴＮＦ的产物。经过对ｐＣＧ－ｈＴＮＦ中克隆的基因进行ＤＮＡ测序鉴定，证     

人肿瘤坏死因子穿梭表达载体的构建

应用ＤＮＡ重组技术,将人肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦ）ｃＤＮＡ插到质粒ＰＲＬ４３９的ＰｐｓｂＡ启动子下游,得到中间载体ＰＲＬ＿ＴＮＦ;再把ＰＲＬ＿ＴＮＦ上含ＰｐｓｂＡ和（ｒｈＴＮＦ）ｃＤＮＡ的片段连到穿梭载体ＰＤＣ＿８上,构建成穿梭表达载体ＰＤＣ＿ＴＮＦ．转化大肠杆菌ＴＧ１后,进行发酵培养．ＳＤＳ＿ＰＡＧＥ分析和免疫印迹检测结果显示ｒｈＴＮＦ获稳定表达,分子量为１７ｋｕ．本研究结果为ｒｈＴＮＦ在蓝藻中的表达提供了技术基础．     

慢性充血性心力衰竭过程中的肿瘤坏死因子及其受体

慢性充血性心力衰竭病人血清中TNFα水平升高，当其≥10^-8mol/L时，可能作为内分泌激素，通过与其受体(膜结合型及可溶型)结合，直接损伤心肌纤维，影响心肌细胞凋亡过程，引起或促进心功能不全的发生。TNF途径成为充血心衰发病机制中的新内容。可考虑应用TNFr拮杭剂治疗心衰。     

与肿瘤坏死因子—α—有关的抑制物（综述）

与肿瘤坏死因子－α有关的抑制物（综述）唐海兰（暨南大学医学院组织胚胎学教研室，５１０６３２，广州）关键词：肿瘤坏死因子；免疫；抑制中图分类号：Ｒ３４－２肿瘤坏死因子－α（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ－α）是机体免疫系统中产生的最重要的细胞因...     

LRRC19识别肿瘤坏死因子α等炎症因子参与肾脏的免疫应答

研究一个已鉴定的富亮氨酸重复结构(LRR)蛋白家族成员LRRC19,确定其组织分布及在肾组织中的表达和定位,并对其功能进行初步研究.通过RT-PCR技术检测LRRC19 mRNA在小鼠各组织中的分布;利用特异性探针mRNA杂交技术对该基因在肾组织中的表达进行精确定位;免疫荧光实验分析该蛋白的亚细胞定位;通过分泌型碱性磷...     

核转录因子κB与肿瘤坏死因子-α对子宫内膜异位的影响

目的:检测核转录因子(NF-κB)在子宫内膜异位症(EM)患者异位内膜及在位内膜组织中的表达,以及其血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的变化,探讨NF-κB与TNF-α在EM发病机制中的作用。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定TNF-α的表达,免疫组化SP法检测NF-κB的表达情况。结果:子宫内膜异位症(EM)组血清TNF-α含量显著高于对照组(P<0.01),且表达量随病情加重有上升趋势(P<0.05)。EM患者中异位内膜组NF-κB表达强度显著高于在位组及对照组(P<0.01)。结论:NF-κB与TNF-α在EM患者异位内膜中的异常高表达与EM的发病有密切关系。     

重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白生物仿制药对大鼠类风湿性关节炎的治疗作用

目的:评价重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(TNFR-Fc)生物仿制药对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用.方法:将大鼠随机分成6组:阴性对照组(生理盐水)、阳性药物组(Enbrel)和TNFR-Fc高、中、低质量分数组,空白组(无炎症),每组6只,弗氏完全佐剂(CFA)建立类风湿性关节炎模型.给药13 d后,分别测量大鼠体重、后足足垫厚度,关节炎指数评分,ELISA法测量细胞因子水平.结果:与阴性对照组相比,Enbrel组和TNFR-Fc大、中、小质量分数组的大鼠体质量明显增加(P0.05)、继发性足肿胀减弱(P0.05)、关节炎评分分值、IL-1β、TNF-α、IL-6含量均减小(P0.05),IL-10含量升高(P0.05).结论:TNFR-Fc通过降低炎性细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平以及升高IL-10水平来发挥治疗类风湿性关节炎的作用.     

黄芪多糖对脂肪细胞释放肿瘤坏死因子-α及白细胞介素-6的影响

目的:探讨黄芪多糖对脂肪细胞释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的抑制作用及机制.方法由3T3-L1细胞诱导分化成熟的脂肪细胞随机分为实验组和对照组.实验组脂肪细胞以0.1g·L-1黄芪多糖培养基干预,对照组脂肪细胞普通培养基培养.ELISA法测两组脂肪细胞及培养基中TNF-α、IL-6蛋白的含量,及逆转录-聚合酶链反应检测两组脂肪细胞TNF-α蛋白和IL-6蛋白mRNA水平.结果实验组脂肪细胞及培养基中TNF-α、IL-6蛋白的含量低于对照组(P=0.000),而且实验组脂肪细胞TNF-α蛋白和IL-6蛋白mRNA水平低于对照组(P=0.000).结论:黄芪多糖可抑制脂肪细胞释放炎症细胞因子,控制脂肪组织的慢性炎症反应.     

肿瘤坏死因子的来源及生物学功能简介

本文主要阐述了肿瘤坏死因子的来源及定位,以及在肿瘤的发生、一些重要疾病的发生过程以及卵巢发育过程中的生物学功能。     

人肿瘤坏死因子cDNA衍生物在大肠杆菌中的表达及活性测定

应用基因工程方法构建了含人肿瘤坏死因子ＣＤＮＡ衍生物的重组体．转化大肠杆菌后酶切鉴定．转化菌经摇瓶培养及温度调控，获得高效表达．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明，表达的ＴＮＦ分子量约为１７ｋＤ，蛋白量约为菌体可溶性蛋白的２０％．用Ｌ９２９细胞毒性测定法测得菌液ＴＮＦ的表达为２×１０８ｕ／ｍＬ．抗ＴＮＦ的单克隆抗体可以中和大肠杆菌表达的ＴＮＦ对Ｌ９２９细胞的细胞毒性．     

活性氧在肿瘤坏死因子信号传导中的作用

肿瘤坏死因子α(TNF-α)是最强的细胞内信号诱导剂之一。它通过对半胱氨酸蛋白酶家族(caspases)、丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)、c-jun N端激酶(JNK)、核转录因子AP-1和NF-κB的活化,可诱导细胞凋亡、分化和基因转录。此外,TNF也可通过调节细胞的还原状态,特别是内源性活性氧的改变来介导细胞内的信号。综述了ROS在TNF所诱导细胞内信号传导的相关内容,以阐述ROS介导TNF在细胞内信号传导及调节细胞的存活和凋亡中的作用。     

肿瘤坏死因子α基因-238G＞A及-857C＞T多态性与河南汉族群体原发性高血压

目的:探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因-238G＞A及-857C＞T多态性与河南汉族原发性高血压(EH)的相关性.方法:ELISA法检测260例高血压患者和394例健康对照者血浆TNF-α水平,采用限制性扩增片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法检测TNF-α基因-238G＞A及-857C＞T多态性.结果:与正常...     

人肿瘤坏死因子可溶性受体I cDNA的克隆及其在原核和真核细胞中的表达

以人的胎盘总ＲＮＡ为模板,用ＲＴ－ＰＣＲ的方法,获得人肿瘤坏死因子可溶性受体Ｉ（ｓｈＴＮＦＲ－Ｉ）的ｃＤＮＡ,并对其进行全序列分析,在此基础上构建了原核及真核的表达载体,进行真核瞬间表达及活性测定和原核表达及产物初步纯化