用大孔明胶微载体培养Vero细胞

用自制在孔明胶微载体与实心微载体ＣＴ－３在转瓶中培养Ｖｅｒｏ细胞，在培养后期许多细胞从ＣＴ－３上胶落下来，细胞密度降低，而大孔微载体上的细胞密度一直保护在较高水平（８×１０＾８ｃｅｌｌｓ／Ｌ以上），表明大孔微载体能够延长细胞活性期，用大孔明胶微载全反应器中培养Ｖｅｒｏ细胞，最大活细胞密度达５．６×１０＾９ｃｅｌｌｓ／Ｌ。     

甲壳胺微载体培养Vero细胞实验

采用以甲壳胺为基质合成的CX－1型微载体，进行Vero细胞悬浮培养实验，结果表明，在1mg/ml甲壳胺微载体浓度下，使用RPMI1640培养基，添加10％新生牛血清，37℃培养3h，传代Vero细胞能够快速贴附于微载体上，悬浮培养24h时，细胞浓度达到2.26×10^5个／ml；培养72h时，细胞浓度达到6.89×10^5个／ml；培养120h时，细胞浓度达到7.12×10^5个／ml。电镜观察表明细胞在微载体上长势良好。说明甲壳胺微载体适合Vero细胞高密度悬浮培养。     

细胞培养用琼脂微球的制备与初步应用

用4%的琼脂溶液作为水相,环己烷为油相,司盘-80为乳化剂,采用乳化分散法制备了琼脂微球,再通过化学交联法固化.用DEAE-HCl修饰了微球表面的电荷密度,并通过正交试验优化了改性工艺,最终制得细胞培养用琼脂微球.通过对比研究了Cytodex1微载体与琼脂微球的表征及细胞培养效果.结果显示,最优改性工艺为:加入微球2倍体积4.5 mol/L的Na OH溶液,再加入微球2倍体积2.5 mol/L的DEAE-HCl溶液,在搅拌状态下加热至60℃,密闭反应4 h.最终制得琼脂微球表面电荷密度为4.00 mmol/100 g,与Cytodex1微载体的4.05 mmol/100g几乎相当.静置培养时,四种细胞在两种微球上的贴壁率和伸展性各有优劣.悬浮培养BHK-21细胞时,Cytodex1微载体表面出现一定程度的"空球"现象,而琼脂微球表面细胞较均匀地伸展.培养至120 h时,两种微球表面的细胞均达到4.5×107cells.继续培养,Cytodex1表面的细胞数开始下降,而琼脂微球表面仍增殖至168 h时才开始下降.综上所述,自制琼脂微球具备作为细胞培养用材料的条件.     

BHK21细胞在新型微载体培养系统生长条件优化

目的：使用BelloCell-500AP生物反应器和BioNOC-II微载体,对BHK21细胞在此新型高密度培养生物反应器中的生长特性进行研究。方法：首先将1.5×108个BHK21细胞悬液加入含有微载体的生物反应器内,按生物反应器厂家推荐参数进行培养,每天取载体计数观察BHK21的生长特性。然后调整细胞浓度和微载体培养系统运行参数。结果：BHK21细胞经过6 d培养载体中细胞总数达到峰值,细胞密度是起始接入数量的31倍为4.41×109个;经过培养过程参数优化,确定适于BHK21细胞高密度培养参数。试验成...     

微载体培养Vero细胞工艺条件初探

本文研究了细胞生长过程中微载体的种类,浓度及细胞的接种量、溶解氧水平对培养Vero细胞的影响。在pH为7.0～7.4,液解氧水平为30%～50%空气饱和浓度,搅拌速度为25～35r/min,温度为37℃时,在1.5升Celligen~(TM)系统中,连续培养7天,可使细胞浓度达到2.5×10~6 Cells/ml,为接种量的12倍,细胞生长旺盛,形态正常。     

微载体在组织工程中的应用

微载体是跨越组织工程诸多学科的一个通用工具,它可以作为大量扩增种子细胞的良好载体,也可以作为组织工程中细胞转运传递的支架.微载体培养技术作为一种新兴的大规模细胞培养技术,在组织工程学中主要应用于种子细胞的扩增培养.目前,利用微载体进行组织工程细胞的大规模培养受到生物、医学科研人员的青睐.     

生物反应器微载体系统大规模培养草鱼细胞及病毒

采用微载体GT-2在细胞培养生物反应器中悬浮培养草鱼细胞和草鱼出血病病毒。合适的工艺条件为:温度26℃,pH6.8～7.2(生长期),7.2～7.4(接毒后),搅拌转速40 r/min,溶氧(DO)40%空气饱和度。GT-2是一种较适合于草鱼细胞贴壁生长的微载体。细胞密度可达7.4×10~6 Cells/mL,病毒滴度可达8.00。     

影响Px细胞微载体培养因素的研究

研究了细胞生长过程中微载体的种类、浓度及细胞接种量对培养Ｐｘ细胞的影响。以ＧＴ－３为微载体，当细胞接种量为２．０×１０＾５细胞／ｍＬ，微载体浓度为２．０ｍｇ／ｍＬ，温度为２８℃时，第６天细胞密度可达１．０×１０＾６细胞／ｍＬ，为接种量的５倍，细胞生长旺盛，形态正常。     

大孔明胶微载体的制备

以明胶为原料，用悬浮成球、甲苯制孔的方法制备大孔明胶微载体。考察了表面活性剂及其配比、油水比、明胶浓度、制备方式和表面修饰等对载体性能的影响。优化了制备大孔明胶微载体的条件，制得了直径为１００－３００μｍ，孔径为１０－３０μｍ的大孔明胶微载体。     

无血清微载体培养MDCK细胞和甲型流感病毒H1N1的条件优化

 血清微载体培养MDCK细胞,并接种流感病毒H1N1,优化培养条件,为细胞流感疫苗的工艺研发奠定基础.采用不同的细胞接种量在50mL无血清微载体搅拌瓶中培养MDCK细胞,并接种甲型流感病毒H1N1,检测不同pH值和TPCK-胰酶含量的病毒培养液,不同病毒接种量,补加TPCK-胰酶,以及不同收毒时间对血凝效价的影响.以1.0×10⁵mL^-1的MDCK细胞数量接种到无血清微载体上,病毒培养液pH值为7.2~7.4范围内,TPCK-胰酶质量浓度为1.0μg/mL,接种后不补加胰酶,病毒接种量MOI=1.0,并在72h收获,最高血凝效价达到512.由此获得了在无血清为载体上培养MDCK细胞和甲型流感病毒H1N1的适宜条件.     

生物反应罐Vero细胞微载体灌流培养

用7L生物反应罐,3g/L Cytoedx 1,φ＝50％溶解氧,40－50r/min搅拌速度进行细胞培养,培养48h开始灌流。连续动态测定葡萄糖含量、渗透压变化及pH值,同时观察细胞形态、增殖情况。连续3批7L规模灌流培养表明,细胞贴附率高,增殖速度快,细胞形态良好,细胞群体倍增数达4．7。结果表明生物反应罐灌流培养法是一种快速、规模化制备细胞的有效方法。     

Increased production of recombinant prourokinase with porous microcarrier cell culture by periodic pressure oscillation in a stirred tank reactor

0 IntroductionIn microbiological fermentation and plant cell cul-ture ,there are manyexamples of applying“periodic oper-ation”to enhance productivity[1-3],although the mecha-nismof this effect remains obscure .In animal cell cul-ture ,applying intermittent hydrostatic pressure could in-crease cell proliferation[4-6]orincrease enzyme activity[7].Process parameters such as temperature , pressure , pH,light intensity and nutrients concentration may be chosentointroduce physical stimuli .Cytopo…     

鸡胚细胞的培养

研究了鸡胚细胞的生长规律，葡萄糖的利用和乳酸、氨等代谢产物的积累规律，比较了培养基对细胞生长的促进作用，筛选了合适的微载体，初步探讨了用微载体培养鸡胚细胞的方法。实验结果表明，鸡胚细胞在DMEM培养基中生长良好，最适合的微载体为胶原型微载体，如GT-2，Gytodex-3。     

动物细胞培养反应器的流体循环和氧传递规律

本文研究了Celligen细胞培养反应器的循环性能和氧传递规律,发现按几何比例放大,循环性能仅与转速有关。氧的传递速率受转速影响很小,是搅拌器丝网面积和通气量的函数。根据实验数据,建立了提升筒中的流动、氧的传递的关联式。