饲用植物多序岩黄芪酸性多糖测定及提取工艺技术研究

主要采用水提醇沉法提取红芪多糖,将该粗多糖中酸性多糖进行含量测定,以及用DEAE - Sepharose Fast Flow阴离子交换柱和732阴离子交换层析柱进行红芪酸性多糖的分离工艺研究,将不同层析方法得到的酸性多糖再经Sepharose 6B Fast Flow凝胶层析纯度分析.实验结果表明,DEAE- Sepharose Fast Flow阴离子交换柱和732阴离子交换层析柱可用于红芪酸性多糖的分离.     

重组人脑利钠肽制备中内毒素的去除工艺

在重组人脑利钠肽(BNP)的分离纯化过程中去除内毒素,选用Chelating Sepharose FF亲和柱层析、Q Sepharose FF阴离子交换柱层析、Source 15反相柱层析、SP Sepharose FF阳离子交换柱层析组合的方法对BNP进行分离纯化。按照2015版药典中鲎试剂法检测各层析柱纯化阶段得到蛋白溶液中的内毒素含量;用HPLC方法检测各阶段所得蛋白的浓度和纯度。BNP制备过程中每一步层析在内毒素去除方面都有良好的效果,内毒素去除率超过90%;最终纯化所得BNP原液内毒素含量降至0.34 EU/0.5 mg,去除率高于99.99%,蛋白纯度高于98%。所设计的四步层析纯化分离方法在纯化重组人脑利钠肽的同时也能高效的去除蛋白溶液中内毒素,所得原液内毒素的含量远远低于国家药典对注射剂内毒素含量的最低限制,为重组人脑利钠肽的工业化生产奠定了基础。     

NF—1菌胞外多糖的制备及其结构初步分析

报道了NF－1菌胞外多糖的分离纯化工艺，并对其结构做了初步分析，即反复用水溶、乙醇沉淀法得到粗多糖，然后经两根Sepharose CL-4B凝胶层析柱分离纯化，所得多糖纯度用蒽酮比色法测定。红外光谱分析表明，该多糖呈β－糖苷链连接。     

重组人脑利钠肽制备中内毒素去除工艺研究

[目的]在重组人脑利钠肽(BNP)的分离纯化过程中去除内毒素。[方法]选用Chelating Sepharose FF亲和柱层析、Q Sepharose FF阴离子交换柱层析、Source 15反相柱层析、SP Sepharose FF阳离子交换柱层析组合的方法对BNP进行分离纯化;按照2010版药典中鲎试剂法检测各层析柱纯化阶段得到蛋白溶液中的内毒素含量;并用HPLC方法检测各阶段所得蛋白的浓度和纯度。[结果]BNP制备过程中每一步层析在内毒素去除方面都有良好的效果,内毒素去除率超过90%;最终纯化所得BNP原液内毒素含量降至0.34EU/0.5mg,去除率高于99.99%,蛋白纯度高于98%;[结论]所设计的四步层析纯化分离方法在纯化重组人脑利钠肽的同时也能高效的去除蛋白溶液中内毒素,所得原液内毒素的含量远远低于国家药典对注射剂内毒素含量的最低限制,为重组脑利钠肽的工业化生产奠定了基础。     

一株假单胞杆菌（Pseudomonas sp.）中D—海因酶的分离纯化

菌体经超声波处理后,上清液首先用热变性作为纯化的第一步,后经硫酸铵沉淀和Q－Sepharose fast flow阴离子交换柱,Phenyl-Sepharose fast flow疏水层析,Superose12凝胶排阻层析等步骤,从Pseudomonas2262菌体中获得电泳纯的海因酶,酶活力回收15．6％,比活为18．37U／mg,提纯倍数为59．3。     

疏水吸附分离酵母 S.Cerevisiae 中的 L-天门冬氨酸酶的研究(英文)

研究了疏水柱吸附分离工业酵母（Ｓ．Ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）中的Ｌ－天门冬氨酸酶．考察了三种疏水吸附剂ＴｓｋｇｅｌＢｕｔｙ＿Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ,ＴｓｋｇｅｌＰｈｅｎｙｌ＿Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ和ＴｓＫｇｅｌＥｔｈｅｒ＿Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ６５０Ｃ的吸附性能．研究表明,通过选择控制流动相的ｐＨ值和离子强度,一次吸附过程中Ｌ－天门冬氨酸酶的分离纯化纯度可提高１４倍并保持较高的活性。实验还考察了吸附等温线类型和温度等因素的影响．结果表明,酵母中分子的电荷和疏水性是疏水柱吸附的重要影响因素．     

免疫亲和层析法从兔杂交瘤培养上清液中纯化兔抗烟草花叶病毒的单克隆抗体

报道一种较为简易的免疫亲和层析技术,从兔杂交瘤培养上清中分离纯化单克隆抗体。先用过碘酸钠活化层析柱填料Sepharose4B,然后加入碱性碳酸钠缓冲液与羊抗兔IgG于4℃偶联过夜,冲洗后加硼氢化钠使偶联稳定,经1％BSA-PBS溶液封闭,冲洗后即得到免疫亲和层析柱。将兔抗烟草花叶病毒（TMV）杂交瘤细胞2E2和3C6的培养上清加入亲和柱中,37℃下吸附1h,冲洗后用pH3稀盐酸溶液洗脱,洗脱液用Tris溶液调至pH中性,供SDS-PAGE分析和Westernblot实验。洗脱液中存在分子量约为60000与52000的二条蛋白条带。Westernblot结果显示,纯化抗体对纯化TMV样品,以及TMV侵染的烟草病叶中的TMV都具有非常好的识别能力。利用所报道的免疫亲和层析技术,从兔杂交瘤培养上清中成功分离纯化到兔抗TMV的单克隆抗体。     

牛初乳中IgG1、IgG2的制备色谱分离与纯化

以二甲基十二烷基苄基溴化胺为预处理物质，采用DEAE Sepharose F.F离子交换色谱和Sephacryl S-200HR凝胶过滤色谱分离纯化了牛初乳中的IgG1和IgG2用亲和高效液相色谱法测定了IgG1、IgG2的含量。     

地衣芽孢杆菌α-乙酰乳酸脱羧酶的纯化及酶学性质

地衣芽孢杆菌（Bacillus licheni formis）AS10106α－乙酰乳酸脱酸酶经硫酸沉淀，聚乙二醇沉淀，DEAE－Sepharose Fast Flow离子交换，Gigapite K-100S柱层及SephadexG－100分子凝胶过滤柱等分离纯化步骤，得到SDS－PAGE电泳纯，α－乙酰乳酸脱羧酶的比活提高了53．5倍。对该酶性质的研究表明，酶单亚基分子量为32Kda，等电点为4．5；该酶的最适反应温度为40℃，最适反应pH为6．0，对热（40℃以上）敏感。在pH5．0－6．5之间稳定。酶活不需要金属阳离子，Cu^2 、Co^2 强烈抑制酶的活性。摇瓶实验表明，纯化的地衣芽孢杆菌α－乙酰乳酸脱羧酶能明显降低双乙酰的形成并缩短其还原时间。     

N-糖酰胺酶F(PNGase F)在大肠杆菌中的表达纯化及其脱糖基化作用鉴定

N-糖酰胺酶F(PNGase F)是由革兰氏阴性菌——脑膜炎脓杆菌分泌的一种分子量为34.8 kDa的去糖基化酶.本研究通过PCR技术扩增出945 bp的N-糖酰胺酶F基因,经酶切、连接,构建了大肠杆菌表达载体pET28a-PNGase F.将pET28a-PNGase F转入大肠杆菌BL21中,16℃诱导表达及Ni柱纯化后,SDS-PAGE鉴定,获得超过95%纯度的可溶性表达的N-糖酰胺酶F.对Na+依赖的中性氨基酸转运蛋白1(SNAT1)和2(SNAT2)进行脱糖基化作用检测,结果证明:纯化的N-糖酰胺酶F对SNAT1和SNAT2具有高效的脱糖基化作用.     

离子交换层析分离纯化重组人血清白蛋白

通过层析实验，比较了几种阴离子交换剂在不同温度、pH值、离子强度、进样流速、进样浓度下对人血清白蛋白的吸队与脱附性能，研究了它们对人血清白蛋白和卵清蛋白的分离能力，并考察了桩层析过程中吸附载体对重组人血清白蛋白和杂蛋白的分离选择性，实验结果表明：版号为DEAE Sepharose FF的载体不仅对重组人血清白蛋白具有良好的分离度，而且有较高的回收率。     

Study on the purification of OPV produced on vero cells with Q-Sepharose F. F.

Q-Sepharose Fast Flow (Q-Sepharose F. F.) was adopted to purify the suspensions of type I, II, III oral poliovaccine (OPV), which is prepared from Vero cells. After clarification and concentration by ultrafiltration, the recovery of virus infected titre may attain above 85%. Using column chromatography on Q-Sepharose F. F. to purify the concentrated virus suspensions, the purified viruses attain 100% recovery of virus infectivity. Dot membrane hybrization was used to detect DNA with the probe of Vero cell genome DNA which was labeled with α-P³² dATP, the contents of residual substrate DNA was less than 100 Pg/dose. The process of downstream had no significant influence on some biological characters of purified viruses, such as virus morphology, tumorigenicity, rct/40 character and capsid protein. This downstream reseach indicates that Q-Sepharose F. F. is an ideal chromatography material for purifying OPV prepared from Vero cells. Biography: LIAO Guo-yang (1962-), Ph D Candidate.     

小白芸豆凝集素的分离纯化及性质研究

从小白芸豆中分离纯化出一种新的凝集素,对其部分理化性质和生物活性进行研究.小白芸豆经过去皮粉碎、浸提、硫酸铵分段盐析、SP Sepharose阳离子交换、Q Sepharose阴离子交换和Superdex 200凝胶过滤层析后可得到小白芸豆凝集素(Phaseolus vulgaris var.albuslectin,PVAL)纯品.测定了PVAL的表观分子质量、亚基分子质量、糖含量、等电点、氨基酸组成、酸碱稳定性以及抗癌性.PVAL的表观分子质量为136 ku,是由2种分子质量分别为36.2 ku和32.2 ku的亚基组成的四聚体,糖含量为4.93%,等电点分布在pH5.3~6.0之间.PVAL分子无半胱氨酸,也无二硫键,疏水性氨基酸质量分数约为37%.PVAL对酸碱的耐受性比较好,并且对肿瘤细胞MDA-MB-435S有较好的抗性.     

人胎肝金属硫蛋白的分离纯化及酶联免疫吸附检测

人胎肝经匀浆、离心、乙醇沉淀后,通过Sephadex G-75、DEAE-Sepharose Fast Flow柱层析分离,获得金属硫蛋白的两种亚型(MT-1和MT-2)。经氨基酸组成分析证明是均一的。MT-1为抗原免疫青紫兰兔制备了抗血清,以纯化的IgG建立了人MT的酶联免疫吸附检测(ELISA)方法,并给出了标准工作曲线。     

芽孢杆菌（Bacillus subtilis No.16A）苎麻脱胶聚半乳糖醛酸裂解酶的纯化及酶学性质

通过丙酮沉淀,阳离子交换层析,凝胶过滤,从苎麻脱胶菌Bacillus subtilis No.16A发酵液中纯化了聚半乳糖醛酸酶（PGase）.结果表明该酶分子量为30.2?ｋu,最适作用pH为9.0,最适作用温度为50?℃,在55?℃以下、中性pH（6.0～8.0）范围内稳定, Ca2+、Mg2+对该酶有激活作用, Cu2+、Mn2+、Co2+、Hg2+有抑制作用,酶解产物在235 nm处有强吸收峰,说明该酶是聚半乳糖醛酸裂解酶.     

Preparation of the selenomethionine derivative of tabtoxin resistance protein

In order to obtain phase information for the X-ray diffraction of tabtoxin resistance protein (TTR) crystal using the MAD phasing method, a selenomethionine (Se-Met) derivative of TTR was overexpressed in E. coli strain M15, with pQE-30 plasmid, through IPTG induction in M9 medium containing Se-Met. The product was purified to an estimated homogeneity of greater than 95% according to SDS-PAGE, by a Ni-NTA metal affinity followed by a Mono Q anion exchange column chromatography. The successful substitution of Se-Met for methionine (Met) was confirmed by MALDI-TOF and ESI-Quadrupole Mass Spectrometry analysis. The derivative crystal was obtained using similar conditions as those for the native.     

重组人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体的工业化制备与性质研究

将含有人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体(K2tPA)重组表达质粒的工程菌经10L种子罐培养及100L发酵,IPTG诱导表达,其表达量为占菌体总蛋白的20％,表达产物经体外变复性、TI—Sepharose亲和层析、SP-Sepharose离子交换层析,每100L发酵液得重组人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体(K2tPA)纯品4g,纯度达95％以上,比活大于500000IU／mg,内毒素及热源含量、宿主蛋白残留量、宿主DNA残留量等均达到临床使用标准．其分子量(质谱测定)、氨基酸组成、N、C-端氨基酸序列分析等均与理论值相符．同时进行了等电点测定及肽图分析等性质研究．     

双硫腙改性树脂富集金的研究

本文以苯乙烯和二乙烯苯聚合成的大孔羟基型阴离子交换树脂为母体，用双硫腙试剂合成了琉基改性离子交换树脂．通过柱层析法，进行了上柱酸度、淋洗速度、淋洗液选择及干扰离子影响等条件实验。并对金矿中的金进行测定，取得较满意的结果。     

气相色谱法测定水中苯系物

在环境监测工作中,国家环境监测分析方法采用填充柱气相色谱法测定苯系物.本文用毛细管气相色谱法和填充柱气相色谱法分别测定苯系物, 实验结果表明毛细管气相色谱法测定苯系物的灵敏度、精密度、准确度等均优于填充柱气相色谱法,完全能替代填充柱气相色谱法测定苯系物.