Phylogenetic relationships of host insects of Cordyceps sinensis inferred from mitochondrial Cytochrome b sequences

This study used the sequence of the mitochondrial Cytochrome b(Cytb)to estimate phylogenetic relationships among host Hepialidae insects of Cordyceps sinensis.Genome DNA of host insect was extracted from the dead larva head part of 18 cordyceps populations and 2 species of Hepialus,and the Cytb fragment of host insect was amplified with PCR technique.The nucleotide sequence alignments and their homologous sequences of 24 species host Hepialidae insects of Cordyceps sinensis were obtained from GenBank and were used to construct phylogenetic trees based on neighbor-joining method.The results showed that genus Bipectilus diverged earlier than genus Hepialus and Hepialiscus.Hepialus host insects of Cordyceps sinensis have multitudinous species with different morphological characteristics and geographical distributions.The interspecific genetic differentiations are obvious in Hepialus.Thus,the genus Hepialus might be considered as polyphyletic origin.Cytb sequences have abundant variations among the host insects of Cordyceps sinensis on spe- cific and generic level.The divergence rate of Cytb sequences among the species in Hepialus ranged from 0.23% to 9.24%,except that Hepialus pratensis and Hepialus jinshaensis have the same sequence.Cytb sequence can be used for species identification of host insects of Cordyceps sinensis,but further confirmation in more host insect species is needed.To obtain the Cytb sequence of host insect by ampli- fying DNA extracted from the head part of dead larva in cordyceps turns out to be an effective and accurate approach,which will be useful for studies on phylogeny and genetic structure of host insects of cordyceps populations,especially for analyzing relationships between C. sinensis and its host insects.     

Phylogenetic relationships of host insects of Cordyceps sinensis inferred from mitochondrial Cytochrome b sequences

This study used the sequence of the mitochondrial Cytochrome b (Cytb) to estimate phylogenetic relationships among host Hepialidae insects of Cordyceps sinensis. Genome DNA of host insect was extracted from the dead larva head part of 18 cordyceps populations and 2 species of Hepialus, and the Cytb fragment of host insect was amplified with PCR technique. The nucleotide sequence alignments and their homologous sequences of 24 species host Hepialidae insects of Cordyceps sinensis were obtained from GenBank and were used to construct phylogenetic trees based on neighbor-joining method. The results showed that genus Bipectilus diverged earlier than genus Hepialus and Hepialiscus. Hepialus host insects of Cordyceps sinensis have multitudinous species with different morphological characteristics and geographical distributions. The interspecific genetic differentiations are obvious in Hepialus. Thus, the genus Hepialus might be considered as polyphyletic origin. Cytb sequences have abundant variations among the host insects of Cordyceps sinensis on specific and generic level. The divergence rate of Cytb sequences among the species in Hepialus ranged from 0.23% to 9.24%, except that Hepialus pratensis and Hepialus jinshaensis have the same sequence. Cytb sequence can be used for species identification of host insects of Cordyceps sinensis, but further confirmation in more host insect species is needed. To obtain the Cytb sequence of host insect by amplifying DNA extracted from the head part of dead larva in cordyceps turns out to be an effective and accurate approach, which will be useful for studies on phylogeny and genetic structure of host insects of cordyceps populations, especially for analyzing relationships between C. sinensis and its host insects.     

实验室条件下西藏冬虫夏草幼虫生理机制变化研究

为研究实验室条件下西藏冬虫夏草幼虫对温度、湿度、病害等条件的生理反应以及西藏冬虫夏草幼虫的食性情况,文章对西藏冬虫夏草幼虫的外部形态及其对温度和湿度的反应及食性等方面进行观察,并绘制出西藏冬虫夏草幼虫生长曲线。结果表明：①实验室中培养西藏冬虫夏草幼虫的最佳温度范围为12℃-14℃;②西藏冬虫夏草幼虫最喜啃食红萝卜,其次为土豆和莴笋;③西藏冬虫夏草幼虫对温度具有很高的敏感性,当温度达到20℃时,幼虫完全失去活动的能力,并且此时幼虫身体表面容易感染病菌。     

冬虫夏草无性型的分子鉴别

采用分子生物学手段,以ｒＤＮＡＩＴＳ区为分子指标,对冬虫夏草Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓｓｉｎｅｎｓｉｓ的有性和无性阶段进行比较分析,从分子水平证明冬虫夏草的无性阶段是中国被子毛孢Ｈｉｒｓｕｔｅｌａｓｉｎｅｎｓｉｓ．     

冬虫夏草体外溶出度研究

依据《药典》中的溶出度测定法进行冬虫夏草纳米粉胶囊、冬虫夏草粗粉胶囊及冬虫夏草药材的体外溶出实验.实验显示,冬虫夏草药材在10 min时溶出最多,冬虫夏草纳米粉胶囊及冬虫夏草粗粉胶囊都在40min时达到溶出最高点,而纳米粉溶出度高达100%.结果表明,装入胶囊的冬虫夏草粉比未装入胶囊的冬虫夏草药材,溶出度稳定,且冬虫夏草纳米粉溶出度最高.     

亚香棒虫草药用价值初探

用产于山西省的亚香棒虫草为研究材料,通过对原寄生昆虫种类的鉴定和亚香棒虫草体内氨基酸组成和含量分析,主要微量元素及含量测定与冬虫夏草进行对比,结果发现三种亚香棒虫草的１８种氨基酸的总含量均高于冬虫夏草,其平均值分别高于冬虫夏草０．１１３ｍｇ／ｇ、０．１９８ｍｇ／ｇ、０．１１８ｍｇ／ｇ。微量元素的数值相近似,因此其药用价值是可以肯定的,这表明亚香棒虫草作为冬虫夏草的代用品是有着良好的前景     

西藏冬虫夏草无性型5.8S rDNA,ITS间区系统发育分析

 采用相对较低的培养温度(5~12℃),从西藏那曲当年产风干冬虫夏草[Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.]分离得到菌株C21,综合其菌丝形态学特征及5.8S rDNA和ITS间区的系统发育分析结果,证实菌株C21为冬虫夏草菌的无性型,即中国被毛孢(Hirsutella sinensis).     

冬虫夏草人工菌丝对卷烟烟雾诱发遗传损伤的保护作用

以微核试验和精子畸形试验为指标,评价冬虫夏草人工菌丝对卷烟烟雾诱发小鼠遗传物质损伤的保护作用。结果表明,卷烟烟雾处理1,2及4周的各组,均显示潜在的遗传毒性。冬虫夏草具有明显的保护作用,两周的抑制率可达55%。两个烟雾处理组间,精子畸形百分率无显著性差异(P>0.05)。提示虫草人工菌丝对烟雾诱发精子畸形的保护作用不够明显。     

虫草属多元起源的分子生物学证据

测定了虫草属 (Cordyceps)代表种及其相关无性型菌 (anamorphicstate )核糖体rDNAITS区序列 ,并从国际分子生物学数据库中调取相关序列 ,以Phylip35分析软件构建序列距离矩阵和分子系统发育树图 ,结果表明 :虫草属各个种之间ITS区序列差别比较大 ,不能形成一个单系的类群 .冬虫夏草 ,古尼虫草 ,蛹虫草 ,大团囊虫草在系统发育上分别与丝孢纲(Hyphomycetes) ,束梗孢目 (Stilbelaes)的中国被毛孢 ,丝孢目 (Hyphomycetales)的黄绿绿僵菌 ,丝孢目 (Hyphomycetales)的球孢白僵菌 ,担子菌纲的Cyphomyrmexminutus非常接近 ,在树图上分别处于相对独立的分支 ;说明形态学上划分的虫草属并非一自然发生的类群 ,也说明了虫生真菌形态与基因水平进化的不一致性 .     

野生冬虫夏草红外分析与鉴别

运用FT-IR法对野生虫草进行了分析,得到了野生虫草的特征吸收峰,分别为1746,1656 cm-1和1549,1155 cm-1及1082,1023 cm-1,它们分别代表脂类、蛋白质和多糖.另外,运用二阶导数谱进一步增强了特征吸收峰的分辨率,丰富了其红外信息,运用这些特征峰对伪品虫草进行了鉴别,这为野生虫草的真伪鉴别提供了一套快速而有效的方法.     

冬虫夏草与虫草菌丝有效成分分析比较

对冬虫夏草及其无性型（ＴｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍｓｉｎｅｎｓｅＣ．Ｌ．Ｌｉ．）的虫草多糖。红外光谱、甘露糖、氨基酸、微量元素等作了分析和比较。发现二者成分比较近似,通过急性毒性实验Ａｍｅｓ实验,微核实验表明虫草菌丝安全无毒。     

SS-GF-AAS法测定冬虫夏草中的铜元素

目的研究冬虫夏草中铜的含量。方法利用石墨炉原子吸收法,采取固体直接进样（solidsampling—graphitefurnace-atomicabsorptionspectrometry,SS-GF—AAS）对冬虫夏草发酵茵丝体粉中的铜元素进行分析测定。结果SS_GF—AAS实验结果显示,冬虫夏草发酵茵丝体粉中的铜元素含量在6．45～7．24mg／kg之间,平行样品的重复性相对偏差（RSD）为0．63％～5．37％,样品的日间重现性RSD为4．43％,此方法的回收率范围为91．19％～110．62％。结论该方法重现性良好,其测定结果的精密度及重现性可以同常用的液体原子吸收分光光度法相媲美。     

棒束孢霉胞外多糖的纯化

棒束孢霉发酵上清液经减压浓缩、醇析、蛋白酶法与Ｓｅｖａｇ法结合脱蛋白、逆向流水透析和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０柱层析等步骤，获得了胞外纯多糖。用ＴＬＣ、ＧＣ及ＩＲ分析表明，该多糖链由Ｄ－甘露醇和Ｄ－半乳糖组成。     

西藏虫草属真菌生物学特性研究及其无性型rRNA基因ITS间隔区系统发育分析

研究从新鲜冬虫夏草分离得到的菌株的形态学特征,并验证其对蝙蝠蛾幼虫的侵染能力。对菌株分化的两个亚型菌株进行了生物学特性研究,并对rRNA基因ITS片段进行了系统发育分析。结果表明：①菌株在18±4℃条件下培养两周后,产生乳白色突起,里面有淡黄色孢子,这种情况下的菌体在侵染蝙蝠蛾幼虫后,20天后长出了子实体;②菌株进一步分化成无性型的两个亚型菌株CC-1和CC-3,这两株菌在表观上差异不明显,但是其分生孢子形态上有显著差异。菌株CC-1的分生孢子为线型孢子,而CC-3的分生孢子却为镰刀型孢子,两菌株均存在有性生殖和无性生殖两种生殖方式;③对无性型两菌株CC-1和CC-3的rRNA基因ITS片段的系统发育分析表明,两株菌均与冬虫夏草非常相似。     

蛹虫草的研究Ⅳ．蛹虫草与冬虫夏草化学成分比较

人工蛹虫草与野生冬虫夏草的子实体经测定分析，二者都含有蛋白质、糖、脂肪、多种无机元素和维生素、１８种氨基酸、虫草菌素、虫草酸、虫草多糖和ＳＯＤ等化学成分，在含量上基本相似，有些成分含量高于冬虫夏草．蛹虫草可以替代冬虫夏草食用或药用     

虫草头孢菌CS-866菌株发酵条件的研究

对虫草头孢菌CS-866菌株的菌丝体发酵条件进行了研究,其适宜的培养基消前pH为5.0~7.0,培养温度为26~28℃,接种量为3%~5%,最佳种龄为3 d,发酵周期4 d,培养基消前加0.3%毛豆油消沫,发酵过程中对通气量的要求较高.虫草头孢菌丝体所含氨基酸与天然冬虫夏草相近,红外吸收光谱也表明两者所含的各类化学成分极为相似.     

1株蛹虫草的液体发酵试验及蛹虫草多糖的提取

冬虫夏草是一种名贵的强壮滋补中药,但由于其严格的寄生性和特殊的生长地理环境,天然虫草资源越来越少,冬虫夏草的开发利用只有走人工培养之路.经研究蛹虫草的培养时间与菌丝体生产量的关系,虫草多糖的提取以及虫草多糖的测定,结果显示培养6d的菌丝产量最高,发酵时间对菌丝生长量的研究有重要意义,它可以控制大规模发酵生产大周期.多糖含量的测定用硫酸-苯酚法.经实验显示2次浸提比1次浸提的得率要高,摇瓶菌丝体的粗多糖得率为25.0%,精多糖得率为10.15%,均比已报道的虫草多糖得率高,这为人工控制大规模发酵生产大周期提供科学依据.     

北虫草及其活性成分的研究与开发

冬虫夏草为非常珍贵的天然药材,资源严重缺乏,价格已超过黄金,无法满足社会需求。因北虫草的化学成分和药理功能与冬虫夏草非常相似,其主要功能活性物质含量高于天然冬虫夏草,被作为冬虫夏草的最佳替代品,受到广泛关注和重视,本文总结了近年来北虫草及其生物活性成分的研究与开发结果。     

冬虫夏草人工培育初探

通过采用周期性变压固态发酵技术来探讨其在人工培育冬虫夏草工艺中的可行性。实验中通过正交对比实验确定了最佳实验条件 :固体培养基为大米或大米 +麸皮 ,固液比为1∶ 1～ 1.3,温度为 2 8℃ ,p H值 7.5～ 8,时间为 (15～ 2 0 ) d。周期变压条件为 :高压 0 .15MPa(表压 )时间 :10 min,低压 :0 .0 0 MPa(表压 )时间 :10 min,菌丝体的生长时间缩短了 (5～ 10 ) d,虫草多糖的得率明显的提高。     

人工冬虫夏草多糖提取物对小鼠免疫功能的影响

 为研究人工冬虫夏草多糖提取物对小鼠免疫功能的影响,采用小鼠的体质量法,脾脏、胸腺质量法,迟发型变态反应试验法,及单核巨噬细胞吞噬功能试验法研究了多糖提取物对小鼠免疫影响。实验结果表明：人工虫草多糖提取物可以增加小鼠胸腺质量;改善DNFB诱发的小鼠迟发型变态反应;也能明显提高单核巨噬细胞的吞噬能力,但对小鼠体质量没有影响。因此人工冬虫夏草多糖具有增强小鼠免疫功能的作用。