导向溶栓分子scFv-UK32中连接肽的引入和在昆虫细胞中的表达

为了提高重组导向溶栓分子scFv-UK32的溶纤活性,通过重组PCR方法在编码scFv与UK32的碱基之间引入编码KLGGGG连接肽的碱基序列,并克隆到转移载体pBacPAK9上,通过与线性病毒DNA BacPAK6/Bsu36I digest共转染到昆虫细胞Sf 9内,进行表达.表达产物分泌到上清中,共转染后第5d(天)用纤维平板法测得Sf 9细胞上清溶纤活性达到107 IU/mL,比未引入连接肽的scFv-UK32的表达活性(25 IU/mL)高.ELISA实验表明共转染上清具有明显对活化血小板特异结合能力.Western Blotting实验表明共转染上清可与Pro-UK的单抗特异结合.     

导向溶栓分子scFv-UK32中连接肽的引入和在昆虫细胞中的表达

为了提高重组导向溶栓分子scFv-UK32的溶纤活性,通过重组PCR方法在编码scFv与UK32的碱基之间引入编码KLGGGG连接肽的碱基序列,并克隆到转移载体pBacPAK9上,通过与线性病毒DNA BacPAK6/Bsu36I digest共转染到昆虫细胞Sf 9内,进行表达。表达产物分泌到上清中,共转染后第5d(天)用纤维平板法测得Sf 9细胞上清溶纤活性达到107 IU/mL,比未引入连接肽的scFv-UK32的表达活性(25 IU/mL)高。ELISA实验表明共转染上清具有明显对活化血小板特异结合能力。Western Blotting实验表明共转染上清可与Pro-UK的单抗特异结合。     

抗B.t.制剂昆虫细胞品系的选择及其酯酶同工酶的初步研究

逐代以９０％的选择压力选择对Ｂ．ｔ．抗性的昆虫细胞品系,结果表明：５Ｂ１细胞对Ｂ．ｔ．抗性的发展是相当缓慢的．第２３代选择细胞的抗性水平突然由原来的３倍上升到１０倍以上,此后抗性在８～１０倍间波动,一直到第３２代．被选择细胞（Ｒ５Ｂ１）和正常细胞（Ｓ５Ｂ１）酯酶同工酶的分析结果表明两种品系细胞有３条共同的酶带．另外,二者也分别拥有２条特异性酶带．被选择细胞（Ｒ５Ｂ１）的细胞酯酶同工酶有些酶带的活力明显高于正常细胞（Ｓ５Ｂ１）的酯酶同工酶活力,证明了抗性细胞品系在生理和代谢上已经发生了一些变化．     

球孢白僵菌毒素对昆虫体外培养细胞的超微结构和细？…

用吸附法从球孢白僵菌的代谢产物中提取毒素，并将毒素作用于草地夜蛾体外培养细胞Ｓｆ－２１细胞株，以研究球孢白僵菌毒素的昆虫致病机理，扫描和透射电镜观察结果表明，在毒素作用下，培养细胞的细胞膜，细胞核，线粒体和核糖体均有很大程度的损伤。     

抗B.t.制剂昆虫细胞品系的选择及其酯酶同工酶的初？…

逐代以９０％的选择压力选择对Ｂ．ｔ．抗性的昆虫细胞品系，结果表明：５Ｂ１细胞对Ｂ．ｔ．抗性的发展是相当缓慢的，第２３代选择细胞的抗性水平突然由原来的３倍上升到１０倍以上，此后抗性在８～１０倍间波动，一直到第３２代，被选择细胞（Ｒ５Ｂ１）和正常细胞（Ｓ５Ｂ１）酯酶同工酶的分析结果表明两种品系细胞有３条共同的酶带，另外，二者也分别拥有２条特异性酶带，被选择细胞（Ｒ５Ｂ１）的细胞酯酶同工酶有此酶带的活力     

液泡前体蛋白质的双向电泳分离和质谱分析

该文通过改进双向电泳方法克服了膜蛋白由于有疏水性而很难进入双向电泳第一相——等电聚焦电泳凝胶,以及由于从蔗糖密度梯度离心中分离得到的液泡前体富含干扰等电聚焦电泳效果的蔗糖等两大难点,成功地分离了通过蔗糖密度梯度离心分离得到的液泡前体蛋白,并使膜蛋白进入了双向电泳凝胶.双向电泳后分离到约200余个蛋白质点,用基质辅助激光解吸/电离飞行时间串联质谱(MS/MS)进行肽质量指纹谱分析,并通过数据库检索进行蛋白质鉴定与功能预测,分析的23个蛋白中有13个在数据库中没有找到相对应的吻合蛋白,查询到的10个吻合蛋白中有6个功能未知.     

溢油分散剂对原油指纹影响的t检验分析

以海鸥4号分散剂和华北原油的混合物为对象,采用t检验比较法研究基于诊断比值的油指纹鉴别,旨在考察溢油分散剂对原油指纹的影响。首先,对分散剂及4个油样的GC-FID气相谱图进行比较,表明分散剂的加入会影响原油的谱图;然后,对油样中正构烷烃(包括姥鲛烷和植烷)的相对含量分布进行研究,结果显示分散剂的加入改变了原油中正构烷烃(包括姥鲛烷和植烷)相对含量的分布,且影响明显;最后,采用t检验法对两两油样进行鉴别比较,发现添加不同量分散剂的原油与初始原油之间及它们彼此之间的指纹均不一致。诊断比C17/Pr和C18/Ph受分散剂的影响最大,Pr/Ph和C17/C18受分散剂影响较小,而(C23+C25+C27+C29)/(C24+C26+C28+C30)和(C19+C20)/(C19+C20+C21+C22)受分散剂影响最小。因此,溢油指纹鉴定需要考虑分散剂的影响。     

子细胞表面张力对胞质分裂中细胞间桥变形的影响

为了研究胞质分裂过程中子细胞表面张力与细胞间桥变形之间的联系,采用微管吸吮实验测定了正常大鼠肾上皮细胞(NRK)在细胞松弛素D(即CD)或blebbistatin作用下细胞表面张力的变化,并且采用局部施加CD的方法分析了两极子细胞表面张力非平衡状态下细胞间桥的变形曲线.研究结果认为,CD和blebbistatin均可以大幅降低细胞表面张力;整体施加blebbista-tin抑制细胞主动性收缩会导致细胞间桥变形完全受到子细胞表面张力的调控,细胞间桥变形过程反映出细胞调节整体表面张力的进程.     

牡蛎低分子活性肽对人肺腺癌A549细胞形态与超微结构变化的影响

以牡蛎（Saccostrea cucullata）体内分离提取出的牡蛎天然低分子活性多肽（BPO-L，Bioactive Peptides of Oyster in Peak L）为效应物，观察研究BPO-L对人肺腺癌细胞形态和超微结构的影响．光镜观察显示经0．1mg／mL BPO-L处理后的A549细胞体积增大，趋于扁平铺展状态，细胞核质比例变小，核仁数量减少．透射电镜观察显示经0．1mg／mL BPO-L处理后的A549细胞核形态较规则，细胞核内异染色质减少，常染色质增多；细胞质内线粒体数量增多，结构较为一致，高尔基体呈较为典型发达状态，并出现粗面内质网增多和多聚核糖体减少等变化．结果表明，BPO-L能有效改变人肺腺癌细胞的恶性形态与超微结构特征，对肺癌细胞具有一定的诱导分化作用．     

球孢白僵菌毒素对昆虫体外培养细胞胞内同功酶和代谢水平的影响

用吸附法从球孢白僵菌（Beauveriabassiana）的代谢产物中提取毒素，并将毒素作用于草地夜蛾（Spodopterafrugiperda）体外培养细胞，以研究球孢白僵菌的昆虫致病机理．同功酶特异性染色结果表明，细胞中毒后，细胞内的乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、酯酶等同功酶在种类和含量上都有所减少．并发现其细胞代谢紊乱，当毒素质量浓度在0～500mg·L(－1)时，培养液中的葡萄糖和蛋白的质量浓度均随细胞中毒加深而升高．     

菜青虫细胞体外诱导产生抗菌肽初报

利用灭活的大肠杆菌诱导昆虫离体细胞Pr-49和Tn-5B1细胞,对诱导产物进行抑菌试验,结果显示形成了明显的抑菌圈,Tricine-SDS-PAGE分析,Pr-49细胞诱导后多出了1条分子量约7000新的蛋白带,而且至少有3条加强蛋白带.诱导Tn-5B1细胞发现多出2条蛋白带,其中1条分子量为已证实的7 691,通过直接取浓缩上清诱导物对比浓缩上清和细胞混合物的电泳分析,新的蛋白条带为分泌型物质.初步断定离体培养的Pr-49细胞和Tn-5B1细胞经灭活的大肠杆菌诱导分泌了具有抗菌活性的物质.     

利用双向电泳-质谱技术鉴定牦牛和犏牛睾丸中 的差异表达蛋白质

比较了牦牛和犏牛睾丸组织中蛋白质的表达差异; 应用双向电泳-质谱技术, 对牦牛和犏牛的睾丸组织中差异蛋白质进行分离和鉴定; 对获得的22个差异表达点进行质谱鉴定和数据库搜索, 获得了19个蛋白质, 其中有3种分子伴侣可能与犏牛雄性不育有关; 研究结果表明, 牦牛和犏牛睾丸组织中存在差异表达蛋白, 并可利用双向凝胶电泳进行分离, 为进一步分析犏牛雄性不育的原因提供了线索.     

利用双向电泳-质谱技术鉴定牦牛和犏牛睾丸中的差异表达蛋白质

比较了牦牛和犏牛睾丸组织中蛋白质的表达差异;应用双向电泳-质谱技术,对牦牛和犏牛的睾丸组织中差异蛋白质进行分离和鉴定;对获得的22个差异表达点进行质谱鉴定和数据库搜索,获得了19个蛋白质,其中有3种分子伴侣可能与犏牛雄性不育有关;研究结果表明,牦牛和犏牛睾丸组织中存在差异表达蛋白,并可利用双向凝胶电泳进行分离,为进一步分析犏牛雄性不育的原因提供了线索.     

Proteomics of a toxic dinoflagellate Alexandrium catenella DH01: Detection and identification of cell surface proteins using fluorescent labeling

Alexandrium catenella DH01 is a toxic dinoflagellate species that is able to not only produce paralytic shellfish toxins,but also cause harmful algal blooms along the coast of China.In this study,we presented a new protocol for specific labeling and detection of the cell surface proteins(CSPs) of A.catenella DH01 cells using CyDye difference gel electrophoresis(DIGE) fluor minimal dyes.CSPs were identified using two-dimensional gel electrophoresis(2-DE) and MALDI TOF-TOF mass spectrometry(MS).The results showed that the fluorescent cyanine dye Cy3 could specifically label the CSPs of A.catenella DH01,with minimal labeling of intracellular proteins.Among three protein extraction methods evaluated,the Trizol method was the most efficient to extract CSPs with respect to protein spot number and resolution.Forty-one CSPs were separated and identified from A.catenella DH01 by 2-DE,in which 14 were identified in the protein database using MALDI TOF-TOF MS analysis.This work represents the first attempt to investigate the CSPs of A.catenella using the CyDye DIGE fluor dyeing method that provides a potentially important tool for future comprehensive characterization of CSPs and elucidation of the physiological functions of CSPs in dinoflagellates.