耐盐碱链霉菌的聚类分析与分类鉴定

通过对２１株分离自云南省盐碱土样的耐盐碱链霉菌的５７项分类特征的聚类分析，将它们在８７％Ｓｓｍ相似水平上分为７个群。根据孢子丝形态，培养特征和生理学特性的差异分别定名为紫边链霉菌（Ｓ．ｖｉｏｌａｃｅｏｌａｔｕｓ），灰肉红链霉菌（Ｓ．ｇｉｒｓｅｏｉｎｃａｒｎａｔｕｓ），黄杀菌素链霉菌（Ｓ．ｘａｎｔｈｏｃｉｄｉｃｕｓ），微白色链霉菌（Ｓ．ａｌｂｉｄｕｓ），白色链霉菌（Ｓ．ａｌｂｕｓ），白长链霉菌（Ｓ．ａｌｂｏｌｏｎｇｎｓ），唐德链霉菌（Ｓ．ｔｅｎｄａｅ），它们都能在ｐＨ１０．０，４％ＮａＣｌ中正常生长，为耐盐碱放线菌。     

论鼢鼠属Eospalax亚属的分类及系统演化

研究了鼢鼠属Ｅｏｓｐａｌａｘ亚属的分类及其系统演化．根据大量标本的研究，本亚属应包含６个种：中华鼢鼠（Ｍｙｏｓｐａｌａｘｆｏｎｔａｎｉｅｒｉ）、甘肃鼢鼠（Ｍ．ｃａｎｓｕｓ）、罗氏鼢鼠（Ｍ．ｒｏｔｈｓｃｈｉｌｄｉ）、高原鼢鼠（Ｍ．ｂａｉｌｅｙｉ）、斯氏鼢鼠（Ｍ．ｓｍｉｔｈｉ）以及秦岭鼢鼠（Ｍ．ｒｕｆｅｓｃｅｎｓ）．通过化石、地质资料以及现生种特征的对比分析，初步建立了鼢鼠属Ｍｙｏｓｐａｌａｘ的系统演化树，并认为该属中Ｅｏｓｐａｌａｘ亚属的发生中心在华北地区，演化中心则在秦岭腹地     

蓝细菌新质粒载体pPRS－1的构建

以蓝细菌Ｐｌｅｃｔｃｎｅｍａｂｏｒｙａｎｕｍ内源小质粒ｐＰｂｓ（１．５ｋｂ）和Ｅ。ｃｏｌｉ质粒载体ｐＢＲ３２２（４．３ｋｂ）为材料，用限制性内切核酸酶ＣｌａⅠ分别消化，经Ｔ＿４ＤＮＡ连接酶连接，转化Ｅ．ｃｏｌｉＨＢ１０１感受态细胞，在含Ａｍｐ（Ａｐ）和含Ｔｅｔ（Ｔｃ）的ＬＢ琼脂培养基上筛选出Ａｍｐ￣ｒＴｅｔ￣ｓ的转化子，提取转化子的质粒，用ＣｌａⅠ消化，得１．５ｋｂ和４．３ｋｂ两片段，表明转化子所含质粒是ｐＰｂｓ和ｐＢＲ３２２的重组质粒，定名为ｐＰＲＳ－１。     

蓝细菌新质粒载体pPRS—1的构建

以蓝细胞Ｐｌｅｃｔｏｎｅｍａ ｂｏｒｙａｎｕｍ内源小质粒ｐＰｂｓ（１．５ｋｂ）和Ｅ．ｃａｌｉ质粒载体ｐＢＲ３２２（４．３ｋｂ）为材料，用限制性内切核酸酶ＣｌａＩ分别消化，经Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接，转化Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ１０１感受态细胞，在含Ａｍｐ（Ａｐ）和含Ｔｅｔ（Ｔｃ）的ＬＢ琼脂培养基上筛选出Ａｍｐ＾ｒＴｅｔ＾ｓ的转化子，提取转化子的质粒，用ＣｌａＩ消化，得１．５ｋｂ和４．３ｋｂ两片段，表明转化子     

人工繁殖恒河猴血清酯酶、乳酸脱氢酶、淀粉酶、碱性磷酸酶生化位点遗传多态性研究

本文采用聚丙烯酰胺不连续垂直凝胶电泳方法研究了人工饲养恒河猴（Ｍａｃａｃａｍｕｌａｔｔａ）的血清乳酸脱氢酶（ＬＤＨ），醋酶（Ｅｓ），碱性磷酸酶（ＡＫＰ），淀粉酶（Ａｍｙ）等生化位点多态性的分布，结果表明，四种同工酶生化基因位点均具有遗传多态性。ＬＤＨ多态性表现在ＬＤＨ４和ＬＤＨ５有差异，醋酶图谱发现五种酯酶带，其中Ｅｓ－１，Ｅｓ－３、Ｅｓ－５无差异，而Ｅｓ－２和Ｅｓ－４具多态性。     

锥体虫,果蝇基因编码区的密码子使用,碱基间关联与基…

用自洽信息聚类方法预测了锥体虫（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａｂｒｕｃｅｉ）（８１个基因）和果蝇（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）（１２４个基因）的基因表达水平，高表达基因同义密码子的使用规律，求出描述基因表达水平的参数ＩＥ值和ＣＡＩ值，在此基础上，用我们提出的基因表达增强网络（ＥＥＮ）理论研究了基因编码区的碱基构成，密码子内和密码子之间的碱基关联与基因表达水平的关系，结果表明，其增强网络位点数目比Ｅ．ｃｏｌｉ和Ｙ     

林可链霉菌噬菌体φSL60启动子的克隆与鉴定

以启动子探针质粒ｐＩＪ４８６为载体,变铅青链霉菌（Ｓ．ｌｉｖｉｄａｎｓ）ＴＫ２３作受体,克隆了林可链霉菌噬菌体ＳＬ６０ＤＮＡ上的启动子活性片段。以ｐＵＣ１８为载体构建ＳＬ６０ＤＮＡ之ＫｐｎＩ片段的基因文库,从中筛选出两个片段,分别克隆于ｐＩＪ４８６中获得ｐＵＩＳ２９和ｐＵＩＳ１９８,在ＭＭ培养基上,两者的转化子对卡那霉素的抗性均仅为１０ｍｇ／Ｌ。噬菌体ＳＬ６０ＤＮＡ的ＢｇｌＩ片段直接克隆入ｐＩＪ４８６的ＢａｍＨＩ位点,获得重组质粒ｐＭＭＳ１,其转化子的卡那霉素抗性在ＭＭ培养基上可达２５０ｍｇ／Ｌ。分析表明ｐＭＭＳ１上的插入片段约为９２０ｂｐ,含有一个ＳｓｔＩ位点,四个ＭｂｏＩ位点。该片段用ＭｂｏＩ部分酶解缩小到６００ｂｐ,亚克隆入ｐＩＪ４８６中得到重组质粒ｐＭＳＢ１４,其转化子对卡那酶素的抗性水平提高到３００ｍｇ／Ｌ。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,ｐＭＳＢ１４中的ｎｅｏ基因可以表达出氨基糖苷磷酸转移酶（ＡＰＨＩ蛋白）。这些结果表明ｐＭＳＢ１４中的插入片段可能具有较强的启动子活性。     

链霉菌对假高粱防治效果的初步探讨

链霉菌属一种（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）对假高粱具有防治作用。在所试验的该菌发酵液上清液的三个浓度中，以浓度为０．０４％的菌液表现出良好的防治效果。     

锥体虫、果蝇基因编码区的密码子使用、碱基间关联与基因表达水平的关系研究

用自洽信息聚类方法预测了锥体虫（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａｂｒｕｃｅｉ）（８１个基因）和果蝇（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）（１２４个基因）的基因表达水平、高表达基因同义密码子的使用规律，求出了描述基因表达水平的参数ＩＥ值和ＣＡＩ值；在此基础之上，用我们提出的基因表达增强网络（ＥＥＮ）理论研究了基因编码区的碱基构成、密码子内和密码子之间的碱基关联与基因表达水平的关系，结果表明，其增强网络位点数目比Ｅ．ｃｏｌｉ和Ｙｅａｓｔ要多，说明生物越高级，编码区内的碱基关联越强．     

火腿螨害防治途径研究：Ⅰ火腿螨及S—368链霉菌的生物学特征

宣威或金华火腿上的螨类主要是粉螨科（Ａｃａｒｉｄａｅ）酪螨属（Ｔｙｒｏｐｈａｇｕｓ）中的腐食酪螨（Ｔｐｕｔｒｅｓｃｅｎｔｉａｔ）．其它种类还有肉食螨等．防治火腿螨较为有效的Ｓ－３６８链霉菌属金色链霉菌     

猪带绦虫抗原基因TS76真核表达的研究

将猪囊尾蚴抗原基因TS76亚克隆至VR1020真核表达载体中,用菌浇原位杂交法筛选重组质粒,将其转染Cos7细胞,用Northern Blot鉴定插入片段的mRNA转录,用ELISA检测其表达产物。结果表现：VTS76在真核细胞中能够转录TS76基因;表面产物被兔抗猪囊尾蚴高免血清所识别,在转染真核细胞后24h,即可检测到正确表达的猪囊尾蚴抗原蛋白。     

甘薯储藏蛋白(sporamin)A基因在大肠杆菌中的表达研究

利用基因重组技术,将ＰＣＲ扩增获得的甘薯储藏蛋白Ａ基因的成熟肽编码区序列,插入到高效表达载体ｐＴｒｃＨｉｓＢ中,构建成重组表达质粒ｐＴＨＳＰＯ－Ａ,用限制酶切和ＰＣＲ分析均表明重组质粒与预期结果相符,用ＩＰＴＧ诱导重组质粒转化的大肠杆菌ＴＯＰ１０。菌体总蛋白经１２％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析,可观察到一个大小为１０ｋＤ的蛋白质带,其分子量比预期值小。     

插入Tn21质粒的分离和链霉素抗性基因质粒的组建

在携带R100.1和pSO101质粒的Lc2640细胞中分离到重组质粒pXZ2712,该质粒对链霉素、氯化汞、磺胺和四环索有抗性。用仅带有Tn21两个末端的质粒pXZ2作为探针进行分子杂交,发现两者有同源性,说明质粒pXZ2712是由Tn21插入质粒pSC101所组成的。以pXZ2712质粒中分离到的带有链霉素抗性基因的片段,组建了带有抗链霉素基因的pXZ6(14.5kb)、pYP1(9.7kb)、pYP22(9.1kb)和pYP4(4.0kb)等质粒载体。     

氧化硫硫杆菌重组质粒pSDT125的构建及其在大肠杆菌之间的转移

对氧化硫硫杆菌(Thiobacillus thiooxidans)隐蔽性质粒pTt12进行了限制性酶切分析,并绘出了限制性酶切图谱,其大小为13.7Kb.将pTt12质粒与pBR325质粒重组,得到了重组质粒pSDT125(Cm',Ap',Tc~s).氧化硫硫杆菌重组质粒pSDT125本身不具有接合转移能力,但它在广泛寄主范围的转移性质粒RP4的带动下以较高的频率在大肠杆菌(Escherichia coli)之间转移,表明在氧化硫硫杆菌质粒pTt12上存在着与接合转移有关的DNA序列.     

大麦黄矮病毒（BYDV）外壳蛋白基因在小麦原生质体中的稳定转化

实验采用ＰＥＧ介导法转化小麦，用ＧＵＳ基因作为标志，用荧光法测定Ａｃｔｌ－ＧＵＳ、Ｅｍｕ－ＧＵＳ、３５Ｓ－ＧＵＳ三种质粒转化小麦细胞后的瞬间表达强度，以比较Ａｃｔｌ、Ｅｍｕ、３５Ｓ三种启动子在小表中的表达强度．结果表明，Ａｃｔｌ和Ｅｍｕ的强度大致相等，均比３５Ｓ强．采用Ｅｍｕ为启动子带ＢＹＤＶＣＰ基因的质粒和经改造过的Ａｃｔ１为启动子带有抗潮霉素选择标记基因的质粒共转化小麦“济南１７７”的原生质体．转化６ｄ后，用潮霉素进行筛选，最后得到两块抗潮霉素的愈伤组织，转化后４个月，经ＰＣＲ检测，证明ＣＰ基因已整合进一块愈伤组织的细胞基因组中．     

大麦黄矮病毒抗性基因的Ti质粒构建

通过酶切、连接、转化等技术 ,将大麦黄矮病毒抗性基因复制酶基因ORF2插入Ti质粒pGA4 82的T DNA区 ,从而提供了新的目的基因转化小麦的农杆菌 /质粒系统 .     

用STM证实质粒pUC18DNA分子新构象的存在

用清高妥液法从大肠杆菌ＢＨ１０１细胞制备出的多拷贝质粒ＰＵＣ１８ＤＮＡ分子的构象具有复杂的多样性，我们在对其进行ＳＴＭ研究计，证实了一种不同于已知构象的新构象的存在。     

牛泡沫病毒BFV3026 gag基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

从牛泡沫病毒BFV3026感染的胎牛肺细胞中提取Hirt DNA,PCR扩增BFV3026　gag基因。序列分析确证后，将其克隆于原核表达载体pET32A，重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导，使Gag蛋白得以高效表达。SDS－PAGE及Western blot证实：表达蛋白占菌体总蛋白的40%，本工作的完成为Gag蛋白功能的研究奠定基础。     

人免疫缺陷病毒2型(HIV-2)穿膜蛋白基因片段克隆表达

以人免疫缺陷病毒２（ Ｈ Ｉ Ｖ２） 的原病毒基因组为模板,通过套式 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增得到了 Ｈ Ｉ Ｖ２ 的一段特异性膜抗原蛋白基因片段;随后将此片段克隆入诱导表达载体ｐ Ｇ Ｅ Ｘ５ Ｘ１ ,获得了重组表达质粒ｐ Ｇ Ｅ Ｘ３６ Ｅ Ｎ Ｖ． Ｉ Ｐ Ｔ Ｇ 对重组表达菌株诱导后, Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 结果显示重组菌株有特异性表达蛋白带产生     

牛酪蛋白基因导入大豆的研究

将带有牛酪蛋白基因caseinB的植物表达载体 pAS -2 ,在大豆自花授粉后 ,用注射法导入大豆受精子房中 .以质粒 pAS -2的 3 5S -Casein -Gus片段为模板 ,随机引物法标记探针 ,对 1 0 3株受体植株后代的DNA进行点杂交和Southern杂交 ,发现其中 1株在点杂交和Southern杂交中均呈阳性 .证明外源基因已整合到大豆基因组中 .