牛酪蛋白cDNA基因克隆的改建

牛酪蛋白全长ｃＤＮＡ克隆ｐＢａＳ１ｃ１８４Ｘ ＧＬⅢ和ＣＯｒＩ双酶切，回收基中的酪蛋白基因编码片段，与经ＢａｍＨＩ，ＳｍａＩ双酶切的植物表达载体ｐＢＩ１２．１２分两步连接；第一步载体的ＢａｍＨＩ末端与酪蛋白基因的ＢｇｌⅡ粘性末端连接；第二步用Ｔ４ＤＮＡ多聚酶补平酪蛋白基因的ＥｃｏＴＲⅠ末端，再与载体ＳｍａⅠ进行平末端连接而环化。     

高产聚β－羟基丁酸菌的分离与检测

用野外采回的土样进行菌种分离，得一株编号为Ｂ８的菌株，经初步鉴定该菌株是固氮菌属（ＡｚｏｔｏｂａｃｔｅｒＢｅｉｊｅｒｉｎｃｋ）的一株固氮菌。Ｂ８菌株可利用淀粉在细胞内积累大量的聚β－羟基丁酸（ＰＨＢ），从Ｂ８菌株细胞中提取出的ＰＨＢ，经元素分析、核磁共振及红外光谱检测，结果与Ｓｉｇｍａ产品的性质和其纯度完全一致。经小型发酵试验测定，Ｂ８菌株产ＰＨＢ的量达细胞干重的４１．５％。     

应用Digoxigenin标记的cDNA探针检测香蕉束顶病毒

用非放射性的Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记的１１－ｄＵＴＰ取代３２Ｐ标记的ｄＡＴＰ或ｄＣＴＰ，标记克隆的ＢＢＴＶｃＤＮＡ－１０．５ｋｂｃＤＮＡ，制备成探针．通过核酸斑点杂交对粗提取的ＢＢＴＶ，ＢＢＴＶ－ＤＮＡ，感染ＢＢＴＶ的香蕉植物的拟茎，球茎处的组织，新生叶片以及成熟后的叶片进行了检测．结果表明：ＢＢＴＶｃＤＮＡ－１ｃＤＮＡ探针特异性强，不与ＣＭＶ—ＲＮＡ、无毒香蕉组培苗提取的核酸发生杂交反应；仅与粗提ＢＢＴＶ、ＢＢＴＶ－ＤＮＡ、ＢＢＴＶ侵染的香蕉组织的核酸提取物发生杂交反应．此探针灵敏度高，可检出含有ＢＢＴＶｃＤＮＡ－１０．５ｋｂ的质粒ＤＮＡ的最小量为１０ｐｇ；测定感病香蕉植株的拟茎汁液的最高稀释度可达１∶１２８，相当于０．４ｍｇ病蕉组织中的病毒含量．测定同一病株不同部位的结果表明，ＢＢＴＶ在植物体内的分布不均匀，拟茎处组织中病毒含量最高，球茎处的组织以及新生叶片中的病毒含量次之，成熟后的叶片中的病毒含量最低     

棘孢小单胞菌原生质体的融合育种

以小诺霉素（Ｍｉｃｒｏｎｏｍｉｃｉｎ,ＭＣＲ）产生棘孢小单胞菌（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｓｐｏｒａｅｃｈｉｎｏｓｐｏｒａ）为出发菌株,诱变筛选得到一株链霉素抗性菌株,抗性菌株的原生质体分别用紫外线照射和热处理致死,通过单亲致死原生质体融合,以链霉素为选择条件选出融合株,以摇瓶发酵并结合薄层层析扫描（Ｔｈｉｎ Ｌａｙｅｒ Ｃｈｒｏｍａｔｏ－ｇｒａｐｈｙ,ＴＬＣ）分析,筛得４株ＭＣＲ百分含量高于亲株的融合子,     

秋茄和木榄耐盐内生细菌筛选及鉴定

为了改良和利用盐碱地,以秋茄(Ｋａｎｄｅｌｉａ ｏｂｏｖａｔａ)和木榄(Ｂｒｕｇｕｉｅｒａ ｇｙｍｎｏｒｈｉｚａ)为原材料,对耐盐内生细菌进行分离 并鉴定。 结果表明:从 ２ 种植物的根、茎、叶中初步分离出耐盐的内生细菌 ９６ 株,均为革兰氏阳性菌;提取各菌株的 ＤＮＡ 并扩 增其 １６Ｓ ｒＤＮＡ 序列,以 ＨｉｎｆⅠ、ＨａｅⅢ、ＭｓｐⅠ和 ＴａｑⅠ４ 种酶进行酶切,并统计遗传型,选取不同组合类型的代表菌株进行 １６Ｓ ｒＤＮＡ序列测定,通过 ＢＬＡＳＴ 比对分析并利用 ＭＥＧＡ 软件建立发育树等分子鉴定手段初步推断,所分离的内生细菌分别 为越南芽孢杆菌(Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｖｉｅｔｎａｍｅｎｓｉｓ)、阿耶波多氏芽孢杆菌(Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｒｙａｂｈａｔｔａｉ)、芽孢杆菌属(Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ.)、白翎芽孢杆菌 (Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｂａｅｋｒｙｕｎｇｅｎｓｉｓ)和巴氏葡萄球菌(Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｐａｓｔｅｕｒｉ);对这 ５ 种菌的脱氨酶活性进行测定,越南芽孢杆菌的值最高。     

红曲霉酶系及生理活性物质的研究Ⅲ——红曲霉发酵生产 Monacolin K 初步研究

采用薄层层析与高压液相色谱法测定发酵产物ＭｏｎａｃｏｌｉｎＫ。初步确定采用选定的发酵培养基，初始ｐＨ６．０～６．５，质量分数为５％的接种量，２８℃下培养１２ｄ，可获最大产物量（Ｍｏｎａｃｏｌ－ｉｎＫ）１２．５ｍｇ／Ｌ。     

t-PA在昆虫细胞中的表达

将含完整阅读框架的人ｔ－ＰＡ（ｔｉｓｓｕｅ－ｙｔｐｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ,ｔ－ＰＡ）ｃＤＮＡ克隆至昆虫细胞表达转移载体ｐＢａｃＰＡＫ８中,获得重组质粒ｐＢａｃ－ｔＰＡ。应用脂质体共转染法,将ｐＢａｃ－ｔＰＡ和线性化杆状病毒ＢａｃＰＡＫ６ ＤＮＡ共转染Ｔｎ－５Ｂ－１昆虫细胞。经空斑筛选获得１１株重组病毒。经ＰＣＲ鉴定与生物活性测定,获得一株高效表达ｔ－ＰＡ的重且病毒ＢａｃｔＰ     

紫云英根瘤菌5个互补结瘤菌株所分离到的重组质粒外源片 …

对来源于紫云英根瘤菌７６５３Ｒ总ＤＮＡ基因文库的５个互补结瘤菌株所分离到的重组质粒ｐＮＲ１０２，ｐＮＲ１０３，ｐＮＲ１０８，ｐＮＲ２０３和ｐＮＲ２１３，ＥｃｏＲＩ酶切表明它们分别携带有一个４．６８，５．０１，５．０４，５．１０或９．３８ｋｂ的外源ＤＮＡ片段。选用１１种内切酶进行单、双酶切分析，建立了重组质粒外源片段的酶切图谱，５个质粒都具有１．７ｋｂ的ＥｃｏＲＩ－ＢｇｌⅡ片段和１．９ｋｂ的ＥｃｏＲ     

兰属植物DNA指纹图的研究

采用ＬＺＦ－１寡核苷酸探针和限制性内切酶Ｈｉｎｆ１,检测兰属２３样株和石斛属１样株的ＤＮＡ酶解片段,获得了清晰易读的由６－１５条带组成有特异性的遗传指纹图谱。表明：（１）ＬＺＦ－１探针能与兰属及石斛属植物基因组ＤＮＡ中的酶解片段中简单重复序列形成杂交分子,证实近缘植物基因组中存在同源ＤＮＡ片段;（２）在介于１－２４ｋｂ的谱带中,大红朱砂（Ａ）１５条,３株红蝉（Ｂ）皆１２条,Ａ＊ＢＦ１２ｎ＝４０两株     

利用抗自身代谢物特性进行西索霉素菌种选育

经过诱变处理西索霉素产生菌，利用菌株抗自身代谢物特征，在添加高浓度的西索霉素的分离培养基上选育获得产生西索霉素比出发菌株单位高的突变株ＭＥ９７，经过薄层层析，生物效价测定，该突变株所产抗生素主要组份是西索霉素，总有抗生素效价提高，并且其它发酵特征也发生了改变。     

棘孢小单胞菌原生质体的融合育种

以小诺霉素（Ｍｉｃｒｏｎｏｍｉｃｉｎ,ＭＣＲ）产生棘孢小单胞菌（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａｅｃｈｉｎｏｓｐｏｒａ）为出发菌株,诱变筛选得到一株链霉素抗性菌株,抗性菌株的原生质体分别用紫外线照射和热处理致死,通过单亲致死原生质体融合,以链霉素为选择条件选出融合株,经摇瓶发酵并结合薄层层析扫描（ＴｈｉｎＬａｙｅｒＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ,ＴＬＣ）分析,筛得４株ＭＣＲ百分含量高于亲株的融合子,ＭＣＲ百分含量达到９０％,效价１０７６ｕ／ｍｌ,分别比亲株提高１５％和１１％,     

添加维生素B12生产菌高密度培养褶皱臂尾轮虫的效果

阐述把维生素Ｂ１２生产菌添加到培养水中培养褶皱臂尾轮虫Ｂｒａｃｈｉｏｎｕｓ ｐｌｉｃａｔｉｌｉｓ的实验。共１８株细菌分离于轮虫培养池，有一株产维生素Ｂ１２的假单胞杆菌ＴＰ４对轮虫的生产繁殖有明显的促进作用。把ＴＰ４菌株培养后，加入到２Ｌ的烧杯和５００Ｌ的水槽中培养泰国Ｓ型轮虫时，在９ｄ（天）和６ｄ（天）中，轮虫密度从１２４－１３９和２４２－２８８个体／ｍｌ增殖到４，４１７－５，５４０和１，０１７－     

长爪沙鼠线粒休DNA限制物理图谱的研究

长爪沙鼠线粒体ＤＮＡ经分离提纯，采用ＢｚｍＨＩ，ＢｇｌⅡ，ＥｃｏＲⅠ和＊ＰｓｔⅠ四种内切酶对１３只长爪鼠ｍｔＤＭＡ进行了酶切分析。其中大多数长爪沙鼠酶切图谱相同，用上述四种酶切分别产生１、５、６、和３个片段，我们称之为Ａ型；另３只氏爪沙鼠经ＢｇｌⅡｉ和ＥｃｏＲ酶切后分别产生４个片段，称为Ｂ型。利用λ—ＤＮＡＨｉｎｄⅢ、ΦＸ—ｌ７４ＨＡＥⅢ、λ—ＤＮＡＢｓｔＥⅡ酶切片段作为标准，以琼脂糖凝胶电泳法测出长爪沙鼠ｍｔＤＮＡ内切片段大小，各种酶切片段分子量加起来均为１６．０５ｋｂ。经多次ＢａｍＨⅠ对ｍｔＤＮＡ单酶切，发现只有一个切点，以此切点为零点，分别与其它三种酶组合进行双酶切时，均未改变原来各酶单酶切片段大小，这说明另外三个酶均有一个切点接近零点。我们根据双酶解和不完全酶解片段的大小分析确定了各酶切片段之间的相对位置，绘制了ｍｔＤＮＡ的物理图谱。本次得到的长爪沙鼠的ｍｔＤＮＡ物理图谱是以ＢａｍＨⅠ酶切点为零点，ＰｓｔⅠ酶切片段ｃ→ａ为顺时针方向，由四种内切酶对ｍｔＤＮＡ的水解结果而得到的１５个片段组成，其中大部内切酶切点的相对位置是用双酶解结果来定位的，小部分切点（６个）则是利用不完全酶解结果定位的。１５个位点     

DNA聚合酶链反应鉴测梨树火疫病

对细菌Ｅ．ａｍｙｌｏｖｏｒａ，Ｅ．ｈｅｒｂｉｃｏｌａ和Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｙｒｉｎｇａｅ的ＤＮＡ提纯，并通过聚合酶链反应，发现引物Ｂ＿５等可用以有效地鉴别Ｅ．ａｍｙｌｏｖｏｒａ．对Ｅ．ａｍｙｌｏｖｏｒａ细胞培养液直接稀释，加清洁剂处理后进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）．据引物Ｂ＿５测定，得到清晰而强烈的相同的ＤＮＡ分子电泳光带，可有效反应测定５００个细菌细胞；用引物Ｂ＿５和Ｂ＿６进一步测定细菌Ｅ．ａｍｙｌｏｖｏｒａ。Ｅ．ｈｅｒｂｉｃｏｌａ和Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ，从Ｅ．ｈｅｒｂｉｃｏｄａ反应获得一个电泳光谱，从Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ获得３个泳谱；用引物Ｂ＿５和Ｂ＿７与细菌Ｅ．ａｍｙｌｏｖｏｒａ和Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ反应，从Ｅ．Ｅ．ａｍｙｌｏｖｏｒａ得到两条相同光带，从Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ反应获得了相似的带谱分布。     

紫云英根瘤菌结瘤基因调控片段克隆和分析

通过对紫云英根瘤菌７６５３Ｒ及其Ｎｏｄ－突变株７６５３Ｒ－１侵染根毛试验证实,７６５３Ｒ菌株３１８×１０３ｂｐ大质粒决定早期结瘤功能,分子杂交结果显示,其ｎｏｄＤＡＢＣ定位于该质粒上．将７６５３Ｒ菌株的大质粒ＤＮＡ进行酶切并克隆到表达载体ｐＭＰ２２０上,构建ｌａｃＺ重组子文库,将ｌａｃＺ重组子文库导入７６５３Ｒ菌株,在加有Ｘ－ｇａｌ和种子浸提物的根瘤菌培养基上选择蓝色菌落．通过Ｍｉｌｅｒ试验测定它们的β－半乳糖苷酶活性,获得１株种子浸提物对其有诱导效应的菌株ＨＮ１８,对该菌株所含的重组质粒ｐＨＮ１８进行ｎｏｄＤＡＢＣ探针杂交,发现有１条１．７×１０３ｂｐ的阳性杂交带,说明在ｐＨＮ１８中克隆有结瘤基因启动子     

福建两个蛋鸭品种和常见野鸭线粒体DNA(mtDNA)限制性酶切图谱的比较

用７种限制性内切酶（ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅡ、ＥｃｏＲⅠ、ＥｏｃＲⅤ、ＰｓｔⅠ、ＳａｃⅠ、ＸｂａⅠ）分析了蛋鸭（金定鸭、莆田黑鸭）、野鸭（斑嘴鸭、绿头鸭）的ｍｔＤＮＡ限制性类型,并用双酶法构建了以上鸭类的ｍｔＤＮＡ限制性酶切图谱．结果表明,蛋鸭与野鸭在ｍｔＤＮＡ结构上发生了明显分岐．比较两种野鸭和金定鸭的图谱,发现金定鸭与绿头鸭的亲缘关系较近．     

黄曲霉毒素产毒菌株的快速筛选法

运用花生察氏培养基、花生葡萄糖硝酸铵培养基、筛选培养基,这三种培养基对从谷物、食品、饲料等环境中分离出的１２株黄曲霉菌株的产毒能力进行了筛选试验．根据黄曲霉毒素在紫外灯下能发出强烈荧光的特点进行试验,筛选出４株黄曲霉毒素产毒菌株．经过菌株产毒培养、毒素的抽提、薄层层析等一系列试验证明,这三种荧光筛选培养基能够对黄曲霉毒素产毒菌株进行快速有效的筛选．     

AcMNPV大立方形多角体突变株突变位点的证实

纯化了３株在共转染后形成正常多角体的病毒株,提取其病毒ＤＮＡ,并对其做了ＥｃｏＲⅠ、ＢｇｌⅡ酶切分析;克隆含多角体蛋白基因的ＥｃｏＲⅠＩ片段并进行序列测定,证实了此病毒株为回复突变株．     

中国人群DMD基因含外显子片段的限制性带型和RFLPs研究（Ⅰ）：Bgl…

采用ＤＭＤ基因的全长ｃＤＮＡ（１４ｋｂ）为杂交探针，分析了中国人群ＤＭＤ基因含外显子片（ｅｘｏｎ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｆｒａｇｍｅｎｔ）的ＢｇｌⅡ限制性片段和ＲＦＬＰｓ。新揭示出四个ＢｇｌⅡ片段，ＤＭＤ基因全长范围内含外显子的ＢｇｌⅡ限制性片段总数至少为５９个，这为制作ＤＭＤ基因的ＢｇｌⅡ部分限制图奠定了重要基础；另分析了四个ＢｇｌⅡＲＦＬＰｓ在中国人群中的等位频率，在ｃＤＮＡ２ｂ－３，ｃＤＮＡ     

河田鸡线粒体DNA物理图谱

运用差速离心法、蛋白酶Ｋ及ＲＮａｓｅ消化法制备并纯化河田鸡（ＧａｌｕｓｇａｌｕｓｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓＨｅｔｉａｎｂｒｅｅｄ）的线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）．用１１种限制酶对其进行单酶切分析,结果表明,ＡｖａＩ、ＢａｍＨＩ、ＢｇｌＩ、ＤｒａＩ、ＥｃｏＲＩ、ＨｐａＩ、ＰｖｕⅡ、ＳａｃＩ、ＳａｌＩ和ＳｔｕＩ在河田鸡ｍｔＤＮＡ上分别有５、２、４、５、１、３、４、３、３和＞９个酶切位点,Ｓｃａｌ在不同个体河田鸡ｍｔＤＮＡ上检测出两种限制性格局,分别有２和３个酶切位点．此外,还用ＢａｍＨＩ、ＢｇｌＩ、ＤｒａＩ、ＥｃｏＲＩ、ＨｐａＩ、ＰｖｕⅡ、ＳａｃＩ、ＳａｌＩ和ＳｃａＩ进行双酶切,构建了ｍｔＤＮＡ的物理图谱