日本对虾肝胰腺的细胞培养

实验采用199培养基,并在其基础上添加胎牛血清和葡萄糖,渗透压用NaCl,CaCl2,MgCl2,NaHCO3等调节.分别在3种pH值、3种渗透压及3种Zn2+浓度下原代培养日本对虾肝胰腺细胞,并以RNA/DNA值为指标来评定其生长状况.实验结果表明,培养日本对虾肝胰腺细胞的适宜pH值为7.6、渗透压为730 μmol/g,培养基中添加Zn2+浓度为80μg/L时,细胞生长较好.     

KK-42对日本沼虾蜕皮前期外骨骼结构及NAGase活力的影响

近期研究发现,适宜浓度的KK-42处理能显著缩短日本沼虾幼虾蜕皮周期.新旧表皮的更替是蜕皮的重要事件,蜕皮前期是表皮外骨骼结构变化最剧烈的时期.据此,从组织学水平观察了幼虾头胸甲外骨骼结构以及KK-42的影响,定量分析了肝胰腺N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)在KK-42处理后不同时间的活力.将处于蜕皮前期(D1-4)、体长(3.3±0.5)cm的日本沼虾随机分为两组,分别用1.95×10-4 mol·L-1的KK-42溶液(实验组)或不含KK-42的溶液(对照组)浸泡处理1min,处理后不同时间,组织学方法观察头胸甲外骨骼结构,分光光度法测定肝胰腺NAGase活力.结果显示,KK-42处理后第3d,D3期和D4期幼虾头胸甲表皮厚度与对照组相比分别提高29.76%和35.23%(P0.01);KK-42处理后12h,D3期和D4期肝胰腺NAGase活力显著高于对照组.结果表明,KK-42处理可显著增加蜕皮前期日本沼虾头胸甲表皮外骨骼的厚度,并对肝胰腺NAGase活力具有诱导作用.     

Cu2+对日本沼虾幼虾的急性致毒研究

Cu2+浓度为0.000 5 mg/L、0.005 mg/L、0.05 mg/L时,日本沼虾幼体在54 h内均能够正常存活;Cu2+浓度为0.1 mg/L时,只有部分沼虾幼体中毒致死.而当Cu2+浓度超过0.25 mg/L时,日本沼虾幼虾在48 h内致死,并出现鳃变兰、肝脏变黑的现象.随着Cu2+浓度增大,日本沼虾幼虾存活的时间变短,肝脏和鳃的中毒颜色变深.日本沼虾幼虾48 h的半致死浓度为0.268 mg/L,其安全浓度为0.026 8 mg/L.     

日本沼虾体内RNA/DNA比值与其生长关系的研究

测定了白洋淀野生日本沼虾不同生长阶段的体长、体重以及肝胰腺和肌肉中RNA/DNA比值,通过回归分析拟合得到体重与体长、RNA/DNA比值与体长关系的数学方程.结果显示,体重与体长的关系可用幂方程(W=0.004 5L3.985 9,R2=0.98,P<0.01)来表示,而肝胰腺和肌肉中RNA/DNA比值与体长的关系则为指数式方程(RL=-0.225 3e0.74L,R2=0.968,P<0.01;RM=0.051 2e1.195 1L,R2=0.974,P<0.01),与体重关系为RL=1.592 4e0.821 5w(R2=0.969 9,P<0.01)和RM=1.198 9e1.330 5w(R2=0.981 3,P<0.01).RNA/DNA比值能较好指示日本沼虾的生长状况,为日本沼虾的生物学研究提供了重要的参考指标.     

低氧胁迫对日本沼虾呼吸代谢和抗氧化能力的影响

为阐明低氧胁迫对日本沼虾呼吸代谢和氧化代谢的影响,并初步探讨其作用机制及日本沼虾的抗氧化响应机制,将日本沼虾暴露于低氧((2±0.2)mg/L,8 h)而后恢复常氧水平((7±0.2)mg/L,2.5 h).结果显示:与对照组(保持常氧水平)相比,随着低氧暴露时间延长,日本沼虾肝胰腺和肌肉组织细胞色素氧化酶(CCO)和琥珀酸脱氢酶(SDH)活力显著下降(p0.05),延胡索酸还原酶(FRD)和乳酸脱氢酶(LDH)活力显著上升(p0.05);总抗氧化能力(T-AOC)和过氧化氢酶(CAT)活力显著上升(p0.05),超氧化物歧化酶(SOD)活力显著下降(p0.05).恢复常氧阶段,CCO,SDH,FRD,LDH,CAT和SOD活力逐渐恢复到正常水平,T-AOC在恢复常氧1 h时显著降低(p0.05),而后恢复到正常水平.低氧胁迫使得有氧代谢减弱,无氧代谢增强,以维持机体能量需求;T-AOC和CAT活力增加而SOD活力降低,是日本沼虾适应低氧环境所采取的一种抗氧化策略.     

低氧胁迫对日本沼虾能量代谢和抗氧化代谢的影响

本实验对日本沼虾进行低氧(2±0.5mg/L,8h)胁迫和常氧恢复(7±0.5mg/L,2.5h)处理,通过测定能量代谢及抗氧化体系的相关酶活及其中间代谢产物的浓度,讨论低氧胁迫对日本沼虾能量代谢的影响机理及其抗氧化响应机制。结果显示:随着低氧胁迫时间的延长,肌肉乳酸含量显著高于对照组(7±0.2mg/L);肝胰腺和肌肉中糖原含量及精氨酸激酶(AK)活力则显著低于对照组(P0.05);肝胰腺和肌肉组织谷胱甘肽S-转移酶(GST)活力显著升高(P0.05)。恢复常氧阶段,肌肉中乳酸含量逐渐降低至常氧水平;肝胰腺和肌肉组织糖原含量及精氨酸激酶活力与对照组相比仍显著降低(P0.05);肝胰腺和肌肉组织GST活力逐渐下降,接近正常水平。结果表明:除进行氧代谢外,低氧胁迫和常氧恢复状态的机体也需要进行无氧酵解和磷酸精氨酸代谢为自身供能。日本沼虾抗氧化系统受到低氧胁迫的影响,机体脂质过氧化程度升高,说明机体受到氧化损伤。     

pH对日本沼虾耗氧率及鳃组织CAT、SOD活力的影响

在水温24.0±0.2℃条件下,采用静水停食法开展了pH对日本沼虾存活、耗氧率及鳃组织CAT、SOD活力的影响实验。结果表明：（1）日本沼虾对碱性环境的耐受性略强于酸性环境,其pH耐受范围为5.5～8.5,该范围内日本沼虾组内耗氧率均呈夜均显著高于昼均（P〈0.05）,组间昼均和夜均耗氧率均无显著差异（P〉0.05）,且鳃组织SOD、CAT活力均呈先降后升走势;（2）日本沼虾pH适宜范围为6.5～8.5,该范围内日本沼虾鳃组织SOD低谷期均比pH 5.5实验组后延24 h,各观测时段CAT活力均显著低于pH 5.5实验组（P〈0.05）;（3）日本沼虾pH最适宜区间为6.5～8.5的中央区域,本研究所设实验梯度中pH 7.5实验组日本沼虾鳃组织SOD、CAT活力最为稳定。     

饥饿对日本沼虾代谢及SOD活性的影响

在20℃条件下,对日本沼虾进行了不同时间的饥饿处理,研究饥饿对日本沼虾代谢及免疫水平的影响,探讨日本沼虾对饥饿的适应对策.结果表明,日本沼虾代谢率在饥饿处理的2~4 d和8~10 d分别出现2个相对的代谢稳定区,即饥饿适应代谢区和饥饿存活代谢区,SOD比活力在饥饿处理期间显著下降.     

日本对虾( Penaeus japonicus )血细胞的培养

在日本对虾血细胞原代培养的基础上,测定培养细胞的RNA/DNA值进行不同pH值培养基的比较,同时利用倒置显微镜和透射电子显微镜对血细胞的形态和结构进行观察.发现血细胞于pH 7.2时生长最好.     

日本沼虾基因片段PCR扩增的条件优化

以日本沼虾肌肉组织为材料,提取其基因组DNA,研究了该虾16S rRNA基因片段扩增的PCR反应条件.经对扩增反应体系中各因子和扩增程序的梯度实验,确定优化反应条件为: 在25μL反应体系中,10×Buffer 2.5 μL,DNA模板200～300 ng,4×dNTP 0.2 mmol/L,Mg²⁺1.5 mmol/L,引物0.4μmol/L,Taq DNA聚合酶1 U,95 ℃预变性5 min;接着35个循环包括95 ℃变性1 min,56 ℃复性50 s,72 ℃延伸1 min;最后72 ℃延伸10 min.应用此优化体系扩增日本沼虾18S rRNA,细胞色素氧化酶亚基I (cytochrome oxidase subunit I, COI),NADH脱氢酶亚基V (NADH dehydrogenase subunit 5, ND5)等基因片段均获得了稳定而理想的效果.研究结果为深入探讨日本沼虾种群的遗传和变异,以及开展其种质鉴定和分子标记等研究提供了参考.     

乳酸对海水鱼类细胞系CHSE生长和代谢的影响

在鲑鱼胚胎细胞(CHSE)培养中,低乳酸浓度(1．1～6．14mmol／L,相应渗透压为644～673kPa)对细胞生长无明显影响,主要的代谢特征基本不变;在高乳酸浓度(13．1～41,58mmol／L,相应渗透压为701～944kPa)下培养,细胞生长受到抑制,代谢发生明显变化。乳酸对cHsE细胞生长的抑制作用主要由乳酸导致培养基pH下降和渗透压增加引起。在CHSE细胞批培养中,维持正常的pH,7mmol／L的乳酸浓度,不会明显抑制CHSE细胞的生长。     

四季樱草叶肉原生质体植株再生

以四季樱草为材料，用国产纤维素酶一步法分离叶肉原生质体。用液体浅层静置培养的方法培养原生质体。培养基为Ｂ５基本培养基附加ＺＴ０．５ｍｇ／Ｌ、２，４－Ｄ２ｍｇ／Ｌ和甘露醇０．６５ｍｏｌ／Ｌ。细胞分裂旺盛，培养２天后观察到第一次细胞分裂，１０天后形成小细胞团，１５天左右添加一次新鲜的不含甘露醇的培养液，使渗透压减半。将形成直径为１－２毫米的小愈僵组织转到分化培养基上，再生成完整植株，而后将苗移栽到花盆     

红豆杉细胞植板方法的研究

在红豆杉细胞植板中,适宜的培养基是优化的ＭＳ培养基,其中ＮＡＡ浓度为０．５ｍｇ／Ｌ,６ＢＡ浓度为０．５ｍｇ／Ｌ;培养细胞生长周期约４０ｄ;培养基中最优碳源浓度是：蔗糖３０ｇ／Ｌ、葡萄糖１０ｇ／Ｌ．无机盐最佳浓度是：ＮＨ＋４１０ｍｍｏｌ／Ｌ,ＮＯ－３４０ｍｍｏｌ／Ｌ,ＰＯ３－４１．２５ｍｍｏｌ／Ｌ．研究表明,培养基的ｐＨ值与植板率密切相关．氨基酸及维生素等有机成分能明显促进细胞生长．来自细胞悬浮培养物的条件培养基能显著地促进红豆杉培养细胞的单细胞在低密度植板时的克隆形成     

黄伞原生质体制备与再生条件研究

探讨了渗稳剂种类、酶种类和浓度、酶解时间、酶解温度、菌龄等因素对黄伞原生质体制备和再生的影响．结果表明,其原生质体制备和再生的最佳条件是菌龄为7d,2％溶壁酶处理2．5h,酶解温度25℃,0．6mol／L KCl为制备时的渗稳剂及0．6mol／L甘露醇为再生时的渗稳剂,其原生质体的产率为2．16×10^7个／mL,再生率为0．52％．     

乙酰丙酮铟的制备

介绍ITO薄膜重要原料乙酰丙酮铟的制备方法,制备条件:有机多元酸浓度8.2×10-2mol/L,乙酰丙酮0.5mol/L,pH值为9.1,制得的乙酰丙酮铟一次合成产率99.8%,产品纯度99.95%.实验添加有机多元酸与锢络合物作为合成反应的中间体,解决了铟盐水解对合成反应的有害影响.     

不同活性炭对杂交鹅掌楸体胚发生的影响

活性炭在体胚发生过程中能够促进细胞的生长及发育。为进一步提高杂交鹅掌楸体胚发生效率,以两个基因型的杂交鹅掌楸愈伤组织为材料,在培养过程中添加磷酸碳、针剂碳和Sigma公司活性炭,通过统计体胚总数及子叶胚数量,测定培养基的pH和渗透压,分析活性炭的吸附性能等,以筛选适合杂交鹅掌楸体胚发生的活性炭类型,并探索不同活性炭影响杂交鹅掌楸体胚发生效率差异的原因。研究结果表明:针剂碳、磷酸碳处理下诱导获得的杂交鹅掌楸体胚总数和子叶胚数显著高于Sigma公司活性炭,且针剂碳的效果最佳。针剂碳的吸附性能适中,添加针剂碳的培养基高压灭菌后其pH和渗透压也适中,说明活性炭的吸附性能会影响培养基的pH和渗透压,从而影响杂交鹅掌楸的体胚发生。     

莠去津对雌性日本沼虾的毒性作用

研究莠去津对雌性日本沼虾的生殖毒性,为其养殖水体水质管理提供依据.以概率作图法计算日本沼虾24,48,72和96 h的半致死质量浓度,并观察各暴露组卵巢组织结构的变化.通过胁迫实验,研究莠去津对暴露4 d和8 d的日本沼虾卵巢乳酸脱氢酶(LDH)比活力的影响.结果表明:22℃时,莠去津对雌性日本沼虾24,48,72和96 h的半致死质量浓度分别为134.23,90.24,52.57和46.36 mg/L,安全质量浓度为4.64 mg/L;卵巢急性毒性实验切片显示,随莠去津质量浓度的增大,卵母细胞间隙增大,胞体膨大、变形.胁迫实验表明,低质量浓度莠去津在短时间内对卵巢LDH活力有诱导作用,当质量浓度高于0.46 mg/L时,LDH活力明显受到抑制.本研究提示,莠去津对雌性日本沼虾具有生殖毒性作用.     

条斑星鲽连续性鳍细胞系的建立与鉴定

为了建立条斑星鲽鳍细胞系,为其细胞工程及病毒学研究奠定基础,对经Ⅱ型胶原酶和透明质酸酶联合消化法所得鳍组织碎块分别用DMEM/F12、L-15和M199培养液(pH7.2)在18～26℃进行了鳍组织的体外培养,并在所筛选出的最适培养液和培养温度下通过添加羧甲基壳寡糖、碱性成纤维样生长因子(bFGF)和I型胰岛素样生长因子(IGF-I)启动了鳍细胞的原代培养。体外培养结果显示,条斑星鲽鳍细胞的最适培养液为DMEM/F12培养液,最适培养温度为22℃,原代培养鳍细胞的生长分裂状态旺盛,细胞形态主要为成纤维样,20d后便可形成汇合细胞单层,经过连续的继代培养已建立了条斑星鲽的连续性鳍细胞系,目前已传至第135代;生长特性检测结果显示,第60代鳍细胞系细胞的群体倍增时间为56.9h,其生长分裂状态依然十分旺盛;染色体分析结果显示,第60代鳍细胞系细胞虽然出现了染色体的非整倍性,但其特征性染色体数目仍为46条,并具有2sm+44t的正常二倍体核型,证明所建立的细胞系确为条斑星鲽连续性鳍细胞系。该细胞系为条斑星鲽的细胞工程育种和病毒-细胞相互作用提供了一个理想的体外研究体系,具有重要的理论意义和应用价值。     

New Equation of State for Osmotic Pressures in Aqueous Saline Solutions of Lysozyme

IntroductionIn the biotechnology industry,the separation andpurification of proteins from aqueous solutions isan increasingly important process. A goodunderstanding of the non- idealities and phasebehavior in aqueous electrolyte solutions ishelpful. Moon et al.[1] measured a series ofexperimental osmotic pressure data for hen- egg-write lysozyme concentrations from about4 2 2g/L in aqueous ( NH4) 2 SO4,( NH4) 2 C2 O4and( NH4) 2 HPO4solutions at ionic strength of1 3.5mol/kg and p H 4,7or …