黑曲霉糖化酶的纯化及特性鉴定

采用硫酸铵高饱和度一步沉淀,Sephadex G-25脱盐,DEAE—Toyopearl离子交换层析,Sepharose S—100 HR凝胶过滤法,从黑曲霉糖化酶粗酶液中纯化出电泳均一的糖化酶。其分子量为73～75Kd,等电点为pH3.3,最适pH为4.2,最适反应温度为60℃,对可溶性淀粉的K_m值为7.56。该糖化酶的含糖量为17.9％,此外还测定了其氨基酸组成及含量。     

比色法快速测定糖化酶活力新方法

本文介绍比色法测定糖化酶活力新方法。糖化酶水解淀粉产生葡萄糖，生成的葡萄糖与３，５—二硝基水杨酸钠盐（ＤＮＳ）作用，发生颜色改变，颜色变化的多少与葡萄糖含量成正比。因此糖化酶水解液与ＤＮＳ反应后，在５５０ｎｍ处测定吸光度，由吸光度看出葡萄糖含量，并计算出糖化酶的活力。比色法简单、快速，准确度和标准法相当，是仪器分析测定糖化酶活力的理想方法。     

比色法快速测定糖化酶活力的新方法

本文介绍了比色法测定糖化酶活力新方法。糖化酶水解淀粉产生葡萄糖，生成的葡萄８糖与３，５－二硝基水杨酸钠盐（ＤＮＳ）作用，发生颜色改变，颜色变化的多少与葡萄糖含量成正比。因此糖化酶水解液与ＤＮＳ反应后，在５５０ｎｍ处测定吸光度，由吸光度看出葡萄糖含量，并计算出糖化酶的活力。比色法简单、快速、准确度和标准法相当，是仪器分析测定糖化酶活力的理想方法。     

葡萄糖酶电极的制备和测试

以自制的铂电极为基础,制备了葡萄糖酶电极,并测试了淀粉-糖化酶水解液中的葡萄糖,测定的范围为2×10~(-6)～5×10~(-3)mol/L。     

生淀粉糖化酶产生菌1—16的选育研究

对生淀粉糖化酶产生菌黑曲霉进行了初步诱变选育，得到一株具有较高生淀粉糖化酶生产能力的１－１６菌株，其生淀粉糖化酶平均发酵单位较原菌株提高了３９％。     

淀粉聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定耐热糖化酶组分

采用微波诱变筛选出一突变株,该突变株粗酶液的最适作用温度比出发株的高20℃;建立了一种Starch-PAGE检测粗酶液中具有糖化酶活性组分的方法,测定出突变株含有4个糖化酶组分;并建立了SDS-Starch-PAGE检测耐热糖化酶组分的方法,鉴定出突变株含有3个耐热糖化酶组分.     

凝胶组成和结构对淀粉糖化酶固定化效果的影响

以凝胶作为酶的固定化载体,淀粉糖化酶为模型酶,考查不同组成和结构的凝胶对淀粉糖化酶的固定化效果.测定结果表明,聚丙烯酰胺凝胶中引入环氧基团和微粒复合结构可提高酶的固定量并改善固定化酶重复使用中的稳定性.具有复合结构的聚丙烯酰胺凝胶比小分子交联剂共价交联的常规凝胶有利于提高淀粉糖化酶的固定量和重复使用活性.     

SBA—50型葡萄糖生物传感分析仪测定麦芽糖的研究

本文研究了用ＳＢＡ－５０型葡萄糖生物传感分析仪测定麦芽糖的方法。麦芽糖的测定范围为０￣２００ｍｇ／ｄＬ,测定回收率平均为９９．６９％,将麦芽糖溶液中加一定量的葡萄糖糖化酶,６０℃水解５ｍｉｎ,取水解液２５μＬ,注入ＳＢＡ－５０型葡萄糖生物传感分析仅中,２０ｓ即可得到结果。该方法简便,快速,准确度高。     

黄浆水与木薯粉混合发酵高浓度乙醇的发酵条件

以黄浆水与木薯粉混合同步糖化发酵高浓度乙醇,应用Plackett—Burman设计对底物浓度、尿素、糖化酶、液化酶、MgSOa、pH值、CaCl2、KH2PO4,8个因素进行2水平12次试验,研究发酵的最佳条件。结果发现,底物浓度、尿素、糖化酶和KH。PO。的添加量是影响发酵的重要因素,最佳发酵条件是底物浓度38％、尿素0．15％、糖化酶1．45AGU／g、KH2PO4 0．07％。在最佳发酵条件下,乙醇浓度达到17．21％（v／v）。     

黄原胶修饰糖化酶的性质研究

为更好地应用修饰糖化酶 ,对经黄原胶修饰的糖化酶基本性质进行了研究 ,结果表明修饰糖化酶的最适作用温度与对照酶基本相同 ,为65℃.但随着温度的升高修饰糖化酶对热的抗性增强 而修饰酶的 pH稳定范围有所变宽 ,对酸具有一定的抗性 修饰酶的米氏常数Km值变小 ,为0.788×10-2,而对照酶的Km值为1.17×10-2,表明修饰酶对底物的亲和力增强 在相同条件下 ,修饰酶催化反应的淀粉糖化DE值较高     

α-淀粉酶和糖化酶的表达及酿酒酵母工程菌的构建

将切除了５′端非编码区５０碱基对片段的黑曲霉糖化酶ＧＡＩｃＤＮＡ与大麦α淀粉酶基因重组进大肠杆菌酵母穿梭载体,构建重组表达质粒ｐＭＡＧ１１,转化酿酒酵母ＧＲＦ１８,获得含α淀粉酶和糖化酶双基因的酵母工程菌ＧＲＦ１８（ｐＭＡＧ１１）．在酵母ＰＧＫ基因启动子和终止信号的调控下,α淀粉酶和糖化酶基因获得高效表达,９９％的表达产物分泌至胞外．在含ｗ＝１５％的可溶性淀粉的ＹＰＳ培养基中培养４４ｈ,淀粉水解率达到９９％,并能发酵产生酒精     

家蝇幼虫对糖化饲料转化利用的研究

测定了家蝇幼虫对糖化饲料的转化利用情况。通过对幼虫生物量的比较，筛选出了糖化处理饲料的优化方案为：加入糖化酶糖化，用量为０．１２５ｇ／５０ｇ麦麸，糖化时间为零，饲料中加入糖化酶可提高幼虫生物量、饲料效率、饲料效率、粗蛋白及粗脂肪的转化率。初步估算了用糖化酶糖化处理饲料的经济效益。     

添加糖化酶与HAADY对小曲米酒出酒率及洒质影响的研究

在小曲米酒酿造过程中添加糖化酶及HAADY可提高出酒率492％～9.55％,并可提高酒的总酸、总酯含量     

麸曲糖化酶活力测定方法探讨

糖化酶活力是制曲过程中的一个重要指标。建立了3,5-二硝基水杨酸(DNS)结合连续流动化学分析仪(API)检测麸曲糖化酶活力的方法。结果表明:通过t检验,次碘酸盐法、DNS法和DNS优化法测定糖化酶活力均无显著性系统误差,DNS优化法的误差值最低为13.1 U/g,RSD值为1.97%。通过F-检验双样本方差分析,DNS优化法较快速滴定法、DNS法测定麸曲糖化酶活力的精密度均有显著性提高,且具有简便、快捷的特点。     

黑曲霉糖化酶基因在酿酒酵母中的表达

从黑曲霉eDNA文库中筛选出糖化酶基因,并在酿酒酵母中进行表达．阳性克隆在发酵培养基中培养60h后,产生的糖化酶酶活力达到峰值为4．3U／mL．测定结果显示其糖化酶大小为1908bp,编码636个氨基酸残基组成的蛋白质．酶学性质分析显示该酶的最适反应温度为50℃,pH为5．0．经柱分离纯化其发酵上清液后,SDS-PAGE电泳方法,测得它的分子量大约为70kD,且条带清晰．     

酶制剂对浓香型白酒发酵过程中高级醇生成的影响

文章采用实验室模拟白酒固态发酵的方法,研究了酵母、糖化酶、蛋白酶和α-淀粉酶的添加量对高级醇生成量的影响。结果表明,适量添加糖化酶和干酵母可以降低高级醇产量,当酵母添加量(于投粮比)为0.8%时,高级醇产量降低了14.8%;糖化酶添加量为750 u/g时,高级醇降低了11.4%;但是,添加蛋白酶却反而增加了高级醇的产量,而添加α-淀粉酶却对高级醇产量没有明显影响。     

重组草酸青霉生淀粉糖化酶的酶学特性鉴定

【目的】了解在毕赤酵母中表达的来源于草酸青霉(Penicillium oxalicum)GXU20的重组生淀粉糖化酶的酶学特性。【方法】用3,5-二硝基水杨酸法测定pH值、温度、金属离子和化学试剂对纯化的重组生淀粉糖化酶的活力的影响,同时测定酶的底物特异性、酶对生淀粉的吸附能力以及酶对不同生淀粉的水解效率等,用高效液相色谱法对该酶水解生木薯淀粉的产物进行分析鉴定,用扫描电子显微镜观察重组酶对不同生淀粉颗粒的水解方式。【结果】重组生淀粉糖化酶rPoGA15A的最适pH值为4.5,最适温度为65℃,在pH值为2.0~10.0时,重组酶具有较好的pH耐受性,温度小于50℃时,酶的稳定性好。除Ag~+、Cu~(2+)和SDS之外,其他大部分金属离子和化学试剂对重组酶的酶活力影响不大。重组生淀粉糖化酶对大米和玉米生淀粉的活性较高,对木薯和马铃薯生淀粉的活性次之,重组生淀粉糖化酶rPoGA15A对不同生淀粉的吸附能力与其对相应不同生淀粉的水解活性大小呈正相关。扫描电子显微镜观察表明重组生淀粉糖化酶对不同生淀粉颗粒的降解作用明显,水解方式各有特点。高效液相色谱分析表明该重组生淀粉糖化酶水解生木薯淀粉的产物仅有葡萄糖。重组生淀粉糖化酶rPoGA15A在40℃下对大米和玉米生淀粉水解72h后水解率分别达到86.5%和71.9%。【结论】重组生淀粉糖化酶具有广泛的pH耐受性,对生淀粉具有高水解活性,在生淀粉的水解和生料同步糖化发酵生产酒精中有一定的应用潜力。     

响应面法优化木薯生料发酵酒精的工艺条件

以生木薯为原料,通过单因素实验和响应面实验,对37℃下酒精发酵工艺进行优化.结果表明:在生淀粉糖化酶用量为173.00U·g-1、pH值为4.60和发酵时间为68.90 h的最佳工艺条件下,酒精体积分数可达到9.95％,与常温发酵相比,酒精体积分数降低1％,但发酵时间缩短39h;影响酒精发酵的3大主要因素为生淀粉糖化酶...     

糖化酶固定化研究现状

本文论述了糖化酶的固定化方法,固定化糖化酶的稳定性的研究进展,指出了糖化酶的研究方向和发展趋势。以及糖化酶的研究趋势。     

“温度、pH对酶促反应速度的影响”实验的改进

以糖化酶为材料，设计了一个“温度、pH对酶促反应速度的影响”的定量实验，采用硫代硫酸钠滴定法精确测定不同条件下的糖化酶活力单位，代替原来的碘液法定性检测唾液淀粉酶对淀粉的水解程度，实验结果准确，方法易操作。学生能在一次实验课的时间内做出酶的温度、pH曲线，加深对理论知识的理解。