Aspergillus sp.1-13菌株β-木糖苷酶的提纯和部分性质

通过80 %饱和度硫酸铵沉淀、DEAE -SephadexA -50离子交换柱层析和SephadexG -100凝胶过滤柱层析等方法从Aspergillussp .1 -13菌株的白酒丢糟固体培养物的抽提液中分离纯化到一种 β-木糖苷酶。通过SDS -PAGE分析测定其分子量为110.9KD。该酶最适反应pH值为3.2～3.8之间,最适反应温度为70℃。该酶具有较宽的 pH稳定性 ,并且在60℃以下较稳定。     

5-甲氧基水杨醛对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用

酪氨酸酶是生物体合成黑色素的关键酶.实验发现:5-甲氧基水杨醛对酪氨酸酶的单酚酶和二酚酶活力均有抑制作用;5-甲氧基水杨醛对酪氨酸酶单酚酶活力的影响表现为对酶稳态活力的抑制作用,和对迟滞时间的延长作用,2.0mmol/L的5-甲氧基水杨醛使得单酚酶的稳态酶活力下降68%,并使迟滞时间从107 s延长到160 s;对二酚酶的抑制作用为可逆效应,半抑制率(IC50)为2.45 mmol/L,抑制类型表现为混合型机理,其抑制常数KI和KIS分别为1.426和7.766 mmol/L.通过研究5-甲氧基水杨醛对酪氨酸酶的抑制作用机理,为进一步研究设计新型酪氨酸酶抑制剂奠定基础.     

红豆中几丁质酶的纯化与表征

利用硫酸铵沉降、离子交换色谱CM-Sephadex C-50、凝胶过滤色谱Sephadex G-75以及高效液相色谱(HPLC)Poros HS-20,从红豆种子中分离纯化出一种具有抗真菌活性的几丁质酶.SDS-PAGE显示还原与非还原状态下该蛋白分子质量分别为27.7和22.7 kDa,这表明该几丁质酶分子内含有二硫键.该酶比活为14.57 U/mg,最适反应pH为5.4,最适反应温度为50℃.它对棉花枯萎病菌、甜瓜枯萎病菌与瓜果腐霉病菌等真菌有明显的抑制作用.     

产纤溶酶菌种的鉴定及纤溶酶的分离纯化

为了获得纯纤溶酶并探讨其酶学性质,从广泛收集的豆豉中筛选到一株具有高产纤溶酶能力的菌株,经鉴定为枯草芽孢杆菌.将该菌突变株DC-12N8的发酵液经离心除菌、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow和CM-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-75凝胶过滤,获得电泳纯的豆豉纤溶酶,每升发酵液可得到4.5mg活性酶蛋白,每克酶蛋白活力达1.18mol/s,纯度为发酵原液的53.6倍,回收率为11.7%.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳表明,该酶是单链蛋白质,其分子质量约为28ku.     

南日鲍β-葡萄糖苷酶分离纯化及表征

采用硫酸铵分段盐析、透析、DEAE-纤维素离子交换层析和葡聚糖Sephadex G-100凝胶层析,从南日鲍内脏中分离纯化得到一种β-葡萄糖苷酶.SDS-PAGE分析表明,所纯化的β-葡萄糖苷酶为单聚体,分子量约为90 kDa,N-端8个氨基酸残基序列为AGMLYPRV.β-葡萄糖苷酶的最适温度为50℃,最适pH值为5.0,Mn2+、Cu2+、Ba2+和Zn2+对酶活力有显著的促进作用,而Al3+对酶有明显的抑制作用,SDS则使酶变性失活;pNPG与β-葡萄糖苷酶之间的亲和程度最高,纤维二糖和京尼平苷次之,水杨苷最差.     

红酵母苯丙氨酸解氨酶的分离纯化及性质研究

采用玻珠破壁 ,硫酸铵分级沉淀 ,凝胶过滤和离子交换等方法 ,从L 苯丙氨酸工业生产菌株红酵母中分离纯化苯丙氨酸解氨酶 (PAL) ,纯化倍数为 1 39,收率为 1 2 6%,纯化到的酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳均为单一蛋白带 ,其亚基分子量约为79.4kD该酶最适反应温度为 40℃ ,最适反应pH为 8.5 ,以L Phe为底物 ,40℃ ,pH 8.5的Km值为 3 87× 1 0 - 4 mol/L 除了Mg2 +和Na+,其它金属离子如Fe3+,Cu2 +,Co2 +,Hg2 +等对其都有明显的抑制作用 .     

地衣芽胞杆菌产纤溶酶的分离、纯化及其酶学性质研究

以地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)WBL-3进行固体发酵生产纤溶酶.通过生理盐水浸提、离心去除菌体、硫酸铵分级盐析、透析、离子交换层析和凝胶过滤层析对酶进行分离纯化,SDS-PAGE电泳检测酶的分子量大小,并对该纤溶酶的酶学性质进行研究.结果表明:经凝胶过滤层析后,纯化倍数为33.19,回收率12.39％;SDS-PAGE电泳检测为单一蛋白条带;酶学性质分析表明:酶的最适反应温度为55℃,稳定性随着温度的升高而降低;最适反应pH为8.5,pH7-10范围内酶活稳定性较高;Mg2+对该酶有微弱的激活作用,Cu2+、Ag+、Fe3+、Hg2+、Pb2+对酶有较强的抑制作用.本研究为开发新的溶栓药物提供了新的选择.     

高纯度烟草过氧化物酶的酶学特性研究

从K326的烟叶中采用除植物褐色素新技术，经分离纯化，得到单一过氧化物酶I（TOP I），该酶是一种以血红素为辅基的含铁蛋白质。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDITOF－MS）测得TOP I分子量为21888．5Da，等电点pI为3．5；酶反应的最适pH为6．0，最适温度为45℃，70℃保温15min残余活力为50％，具有良好的热稳定性，动力学分析表明：烟草中的过氧化物酶I与愈创木酚（一元酚）结合力最强，邻苯二酚（二元酚）次之，焦性没食子酸（三元酚）作用较小。TOP I和Km(愈创木酚）为0．132mmol/L;Km(H2O2)为0．598mmol/L.N3^-,CN^-1,Fe^3 ,Fe^2 和Sn^2对酶有较强烈的抑制作用，重金属离子Ag^ ,Pb^2 ,Cu^2 对该酶的活性有激活作用，而NO2^-、Hg^2 ,Cr^3 对酶活力无显著影响。     

罗氏沼虾肝胰腺几丁质酶分离纯化及部分性质

报道罗氏沼虾（Macrobrachium rosenbergii)经抽提,再生几丁质亲和层析,Sephadex G-100凝胶过滤,CM－Sephadex C-25凝胶离子交换层析,获得了聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的酶制品,SDS－聚丙酰胺凝胶电泳法测得其分子量约为38kDa,等电聚焦测得其等电点为5.7,该酶的最适pH值为4,在pH3.0-8.0间表现稳定。最适温度55℃,高于65℃稳定性降低。     

花生几丁质酶的纯化及酶学性质研究

本课题利用亲和色谱和凝胶过滤色谱法从花生种子中分离得到了几丁质酶.经SDS-PAGE鉴定,该酶蛋白已达电泳纯,分子量约34.4 kD.在还原和非还原状态下均显示单一区带,表明其为单体蛋白.此外,通过等电聚焦法可测得该酶等电点为5.1.而酶学性质的相关研究则表明:该酶最适pH为5.4,最适反应温度为40～50℃.     

猪心肌细胞质苹果酸脱氢酶的制备

用匀浆提取，９０％硫酸铵沉淀和ＣＭ－纤维素、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｂｅｘＡ－５０、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱层析的方法从猪心肌中分离纯化了细胞质苹果酸脱氨酶。酶制品达到了ＩＦＣＣ规定的标准。     

中华芦荟多酚氧化酶的分离纯化

采用丙酮粉沉淀抽滤法从中华芦荟中提取多酚氧化酶.提取的粗酶液经30%~80%硫酸铵分级沉淀,透析除盐,DEAE-Sephadex A-50阴离子交换柱层析,后经PEG 6000浓缩,得到纯化的多酚氧化酶,其纯化倍数为13.28.纯化后的酶液经SDS-PAGE电泳分析,采用考马斯亮蓝R-250染色显示为单一蛋白带,分子量约为54.1 KD.     

葡萄糖异构酶的纯化和性质

从国产玫瑰红链霉菌336菌体,经制成丙酮干粉、抽提、DEAE-52纤维索柱层析、硫酸铵分级、DEAE-Sephadex A-50柱层析、Sephadex G-200柱层析后得到电泳纯酶。对纯化酶的分子量、氨基酸组成、热稳定性等性质进行了研究。     

棒束孢霉胞外多糖的纯化

棒束孢霉发酵上清液经减压浓缩、醇析、蛋白酶法与Ｓｅｖａｇ法结合脱蛋白、逆向流水透析和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０柱层析等步骤，获得了胞外纯多糖。用ＴＬＣ、ＧＣ及ＩＲ分析表明，该多糖链由Ｄ－甘露醇和Ｄ－半乳糖组成。     

木素生物降解酶活力的表面活性剂头基效应研究

用分光光度技术研究了木素生物降解关键酶木素过氧化物酶(LiP)和锰过氧化物酶(MnP)在不同类型表面活性剂存在下,催化氧化木素模型化合物藜芦醇(VA)、2,6-二甲氧基苯酚(DMP)和丁香醛连氮的活力.表面活性剂选择了非离子型、阴离子型和阳离子型中具有代表性的曲拉通-100(TX-100)、十二烷基硫酸钠(SDS)、琥珀酸二辛酯磺酸钠(AOT)、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB).结果表明非离子型表面活性剂TX-100对MnP和LiP有激活作用,而离子型表面活性剂对两种酶均有抑制作用,且阴离子表面活性剂的抑制作用远大于阳离子表面活性剂.此外,就MnP而言,表面活性剂对酶促反应的影响大小还与底物性质有关.TX-100对高疏水性底物丁香醛连氮的激活作用要比低疏水性底物DMP大.     

短裙竹荪（Dictyophora duplicata）多糖的研究（Ⅰ）──Dd多糖的分离、纯化及其部分理化性质

竹荪子实体经热水提取，乙醇沉淀，蛋白酶法和Ｓｅｖａｇ法相结合去蛋白，再通过ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００柱层析纯化，得到竹荪多糖（简称Ｄｄ）纯品。经凝胶过滤法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定表明，Ｄｄ多糖为均一的物质。Ｄｄ经紫外扫描，无核酸和蛋白质的特征吸收峰，ＩＲ－４００扫描表明有典型多糖吸收峰，Ｄｄ的相对分子质量约为１９６０００。     

火菇素cDNA的初步免疫学筛选

火菇素是一种具有抗癌活性的简单蛋白，从金针菇中分离纯化火菇素的方法如下：金针菇子实体经乙酸液浸提、硫酸铵和乙醇分级沉淀后，通过DEAE-Sephadex A-50除去色素和部分杂蛋白，最后经CM．Sephadex C-50离子交换柱层析分离，得到了电泳均一的纯化蛋白．以火菇素为抗原制备的抗血清为探针对构建的金针菇cDNA表达文库进行免疫印记筛选，对获得的阳性克隆进行PCR、酶切以及在大肠杆菌中诱导表达等初步鉴定，为进一步确证、克隆火菇素基因打下了基础．     

当归多糖APS-bII的结构特征及体外抗肿瘤作用

从当归(Angelica sinensis(Oliv)Diels)中提取粗多糖,经阴离子交换纤维素柱和Sephadex G-100凝胶柱色谱分离纯化,得白色粉末状多糖APS-bII。采用高效尺寸排阻色谱、红外光谱、高效液相色谱等方法进行了结构的初步分析;采用四甲基偶氮唑蓝比色法观察APS-bII对多种肿瘤细胞的生长抑制作用。结果表明APS-bII为均一组分,分子量为1.3×104Da,由葡萄糖-半乳糖-木糖-阿拉伯糖(8.4:2.7:1.8:1.0)构成,是首次从当归中分离出的杂多糖。APS-bII对多种肿瘤细胞的增殖有抑制作用。     

甲酸法绿色分离缅甸黄花梨中木质素和纤维素的研究

采用甲酸法处理缅甸黄花梨生物质,分离木质素和纤维素,探究了甲酸浓度、反应温度和时间对木质素分离效果的影响,结果表明最佳工艺参数为：甲酸质量分数88%,反应温度110 ℃,反应时间2 h。在此条件下的纤维素得率为89.56%,木质素含量（质量分数）为90%。傅里叶转换红外光谱（FT-IR）和高效液相色谱（HPLC）的分析表明,经过甲酸处理得到的纤维素和木质素都发生了不同程度的甲酰化修饰改性。X射线衍射（XRD）结果显示,经甲酸法处理后,纤维素的结晶度增大。以上结果可为生物质组分分离及其功能性材料制备提供技术支撑。