人羊膜间充质细胞的生物学特征研究进展

人羊膜位于胎膜的最内层,由人羊膜间充质细胞(hAMCs)和人羊膜上皮细胞(hAECs)组成,hAMCs来源于原条的胚外中胚层,而hAECs来源于胚胎外胚层.越来越多的研究证实,hAMCs和hAECs具有干细胞的特征.文中对hAMCs的生物学研究进展进行综述,主要内容包括羊膜及羊膜细胞的结构和功能、hAMCs的增殖活性、多分化潜能及其免疫学特点.     

“去细胞”羊膜基质与人脐静脉内皮细胞相容性的实验研究

测定“去细胞”羊膜基质（human acellular amniotic membrane，HAAM）与人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endotholica lcell，HUVEC）的相容性，为提高内皮细胞在血管支架上的粘附率提供新的途径。     

新鲜羊膜移植对碱烧伤早期角膜及房水中超氧化物歧化酶活力，丙二醛含量的影响

目的：探讨新鲜羊膜移植在早期角膜碱烧伤治疗中与自由基反应的关系，方法：以48只新西兰大白兔耕作角膜碱烧伤模型，烧伤兔被分为新鲜羊膜移植组，保存羊膜移植组及对照组，烧伤后24h分别实施手术，分别于术后14，30d处死实验兔取材房水及角膜组织，检测其超氧化物歧化酶活力及丙二醛含量，结果：新鲜羊膜移植组，保存羊膜移植组丙二醛含量均代于对照组（P＜0．01），超氧化物歧化酶活力均高于对照组（P＜0．01），术后14天新鲜羊膜移植组角膜超氧化物歧化酶活力高于保存羊膜组（P＜0．05），术后30d新鲜羊膜组角膜及房水丙二醛含量的均低于保存羊膜组（P＜0．05），结论：新鲜羊膜移植在早期角碱烧伤治疗中能减轻自由反应对眼组织的损伤，其效果优于保存羊膜移植。     

胃印戒细胞癌中CD44v6，Survivin与PTEN的表达及临床病理学意义

探讨黏附相关因子变异体CD44v6、凋亡抑制基因Survivin和抑癌基因FIEN在胃印戒细胞癌组织中的表达与其临床病理特征之间的关系,及三者的关系。表明应用免疫组织化学SP法,检测CD44v6、Survivin和FIEN蛋白在73例胃印戒细胞癌组织中的表达。结果胃印戒细胞癌中CD44v6、Survivin和PIEN蛋白的阳性表达率分别为78．1％（57／73）、63．0％（46／73）、34．2％（25／73）。CD44v6随胃印戒细胞癌浸润深度加深、淋巴结的转移逐渐上升（P〈0．05）;随浸润深度加深、淋巴结的转移、器官转移、临床分期增加Survivin蛋白的阳性表达率逐渐上升（P〈0．01）,而FTEN基因的阳性表达率逐渐降低（P〈0．05）。在胃印戒细胞癌组织中CD44v6与PFEN蛋白的表达呈负相关（相关系数r=-0．214,P〈0．05）,Survivin与PTEN的表达呈负相关（r=-0．404,P〈0．01）,CD44v6与Survivin的表达呈正相关（r=0．28,P〈0．01）。因此可知,CD44v6、Survivin和PIEN基因的异常表达与胃印戒细胞癌临床病理特征有关,PIEN和Survivin基因表达可以作为判断胃印戒细胞癌生物学行为的指标;CD44v6与Survivin的协同作用,以及两者与PTEN拮抗作用共同参与胃印细胞癌的发生发展过程。     

特异性iRNA应用时机、种类与伤鼠免疫功能变化关系的实验研究

目的探讨伤后免疫核糖核酸（iRNA）应用时机、种类与伤鼠免疫功能变化的关系。方法：将烫伤大鼠随机分成两批9组,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法和3H－TdR掺入法,分别测定各组烫伤大鼠伤后10天时IL-2活性,NK细胞活性和T、B淋巴细胞增殖反应能力的变化。结果：（1）伤后三种iRNA联合用药组NK细胞活性和B细胞增殖反应能力恢复较快,至伤后第10天时分别达到正常的102．0％和95．7％,明显优于单用一种和合用二种组;（2）伤后早期（第1天开始）应用iRNA组IL-2活性和T细胞增殖反应能力恢复较理想,至伤后第10天时分别达到正常的95．8％和98．8％,明显优于伤后2、3、5天开始用药组。结论：伤后尽早联合应用三种iRNA对防止和／或纠正伤鼠免疫功能失常具有重要作用。     

脐带血T淋巴细胞集落培养和亚群的关系

应用细胞培养和间接免疫荧光法测定脐带血，成人外周血，成人骨髓的Ｔ淋巴细胞集落形成情况及培养前后淋巴细胞亚群的变化。结果表明：脐带血的ＣＦＵ－ＴＬ显低于成人外周血（Ｐ〈０．０１），略低地成人骨髓（Ｐ〈０．０５）；培养前脐带因的ＣＯ３、Ｃ含量均显低于成人外周血（Ｐ〈０．０１），成成人骨髓相近似。脐带血的ＣＤ８细胞含量与成人外周血和成人骨髓相似（Ｐ〈０．０５）；培养后的ＣＦＵ－ＴＬ中的ＣＴ３细胞含量     

人羊膜上皮细胞的体外培养及诱导分化

人羊膜上皮细胞由外胚层发育而来,属于成体干细胞,具有来源广泛、免疫原性低、非致瘤性、不存在医学伦理道德限制等优点.研究目的:建立人羊膜上皮细胞的体外分离培养的方法,检测其向三胚层诱导分化培养潜能.在无菌条件下机械分离羊膜,使用胰蛋白酶分步消化法收集人羊膜上皮细胞,体外培养,观察其细胞形态与生长规律;并通过免疫细胞化学法,RTPCR及三胚层定向诱导等方法对其进行鉴定.结果:成功从人羊膜中分离得到纯度较高的人羊膜上皮细胞.免疫细胞化学法鉴定结果显示,分离到的羊膜上皮细胞内的角蛋白19呈阳性;RT-PCR鉴定干细胞标志基因REX1、Oct-4和Nanog,在mRNA水平均有表达;定向诱导条件下,人羊膜上皮细胞可向成脂、成神经和成肝样细胞分化.结论:人羊膜上皮细胞可在体外分离培养,具有干细胞特性,可以定向诱导分化成内胚层、中胚层、和三胚层三个胚层组织与细胞.     

大鼠肝库普弗细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析

按Higgins等方法制作大鼠2／3肝切除（partial hepatectomy,PH）模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60％Percoll梯度离心结合免疫磁珠方法分离库普弗细胞（Kupffer cell,KC）,用外胚层发育不良抗原2（ectodermal dysplasia antigen2,ED2）和溶菌酶（lysozyme,LYZ）的免疫组织化学方法定性、定位再生肝（regenerating liver,RL）、分散的肝脏细胞及分离的库普弗细胞,用RT—PCR定量库普弗细胞的ED2和LYZmRNA,用蛋白免疫印迹方法定量库普弗细胞的ED2和LYZ蛋白．初步证实,分离的肝库普弗细胞中ED2和LYZ阳性细胞占96％以上,从PH后各时间点分离的库普弗细胞ED2和LYZmRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定。表明改进的分离库普弗细胞方法具有收率和纯度高、活性好等优点,值得采用．     

实验性免疫应激雏鸡胸腺T细胞研究

用ND（新城疫）I系疫苗大剂量肌肉注射2周龄雏鸡的方法建立实验性免疫应激模型，检测胸腺中CIM＋、CD8＋T细胞动态变化以及超微结构变化．结果显示：免疫应激前期（1—5d）表现为CIM＋T细胞数目减少，CD8＋T细胞数目增加的趋势；部分T细胞发生凋亡，并且是一个逐渐加剧的过程，呈现从凋亡到坏死的病理学变化过程．     

大鼠肝陷窝细胞分离、鉴定及纯度、活性分析

按Higgins等方法制作大鼠2／3肝切除（parital hepatectomy,PH）模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60％ Percoll梯度离心结合免疫磁珠方法分离陷窝细胞（pit cell）,用分化抗原簇8（cluster of differentiation 8,CD8）和分化抗原簇56（cluster of differentiation 56,CD56）的免疫组织化学方法定性、定位再生肝（regenerating liver,RD、分散的肝脏细胞及分离的肝陷窝细胞,用RT—PCR定量肝陷窝细胞的CD8和CD56mRNA,用蛋白免疫印迹定量肝陷窝细胞的CD8和CD56蛋白．初步证实,分离的肝陷窝细胞中,CD8和CD56阳性细胞占95％以上;PH后各时间点分离的陷窝细胞的CD8和CD56的mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定．表明改进的分离陷窝细胞方法具有收率和纯度高、活性好等特点,值得采用．     

T细胞共刺激信号系统研究进展

T细胞是获得性免疫应答的主要识别和效应细胞．T细胞的活化需要两种信号同时存在（即双信号模型，two-signal model）：一是由T细胞受体（TCR）与MHC-抗原肽复合物介导的第一信号，该信号决定了T细胞抗原应答的特异性；二是由表达于T细胞表面的膜蛋白分子及其配体介导的共刺激信号，该信号对于T细胞识别抗原后的完全活化是必须的．共刺激分子的发现为调控T细胞活化及其介导的免疫反应提供了新策略．     

T细胞共刺激信号系统研究进展

T细胞是获得性免疫应答的主要识别和效应细胞．T细胞的活化需要两种信号同时存在（即双信号模型，two-signal model）：一是由T细胞受体（TCR）与MHC-抗原肽复合物介导的第一信号，该信号决定了T细胞抗原应答的特异性；二是由表达于T细胞表面的膜蛋白分子及其配体介导的共刺激信号，该信号对于T细胞识别抗原后的完全活化是必须的．共刺激分子的发现为调控T细胞活化及其介导的免疫反应提供了新策略．     

大鼠肝星形细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析

按Higgins等方法制作大鼠2／3肝切除（pafital hepatectomy，PH）模型，用两步灌流法分散肝脏细胞，用60％Percoll梯度离心和免疫磁珠相结合分离肝星形细胞，用结蛋白（desmin，DES）和波形蛋白（vimentin，vIM）的免疫组织化学定性、定位再生肝（regenerating liver，RD、分散的肝脏细胞及分离的肝星形细胞，用RT—PCR定量肝星形细胞的DES和VIM mRNA，用蛋白免疫印迹定量肝星形细胞DES和VIM．初步证实，分离的肝星形细胞中DES和VIM阳性细胞占95％以上，从PH后各时间点分离的肝星形细胞的DES和VIM mRNA量稳定，相应的蛋白量亦稳定．表明改进的分离肝星形细胞方法具有收率和纯度高、活性好等特点，值得采用．     

孕酮和脂多糖对人羊膜细胞β-防御素-4(HBD-4)表达的影响

研究了孕酮(P4)和脂多糖(LPS)对人羊膜细胞内β-防御素-1(HBD-1) mRNA和β-防御素-4(HBD-4) mRNA表达的影响.使用10~(-9)M孕酮、0.5μg/mL脂多糖处理无血清羊膜细胞4 h、8 h、12 h、24 h,各时间点设无孕酮、无脂多糖添加的对照组(Control),然后使用10~(-9)M孕酮+0.5μg/mL脂多糖(P4+LPS)处理无血清羊膜细胞4 h、8 h、12 h、24 h,各时间点设0.5μg/mL脂多糖处理组(LPS)为对照组,并利用RT-qPCR技术检测各处理组中羊膜细胞内HBD-1、HBD-4 mRNA的表达变化.与对照组比较,孕酮和脂多糖对羊膜细胞HBD-1 mRNA的表达均无显著性影响.脂多糖可上调人羊膜细胞中HBD-4 mRNA的表达(P0.05),而只添加孕酮对羊膜细胞中HBD-4 mRNA的表达量无显著影响,但在孕酮与脂多糖共同诱导下可上调人羊膜细胞中HBD-4 mRNA的表达(P0.05).孕酮和脂多糖对羊膜细胞内HBD-1的表达无显著调节作用.羊膜细胞分泌的HBD-4是妊娠期羊膜腔天然免疫的重要组成部分,羊膜及羊膜腔感染时缺少孕激素将会影响羊膜细胞中HBD-4的表达,从而易引起抗菌能力降低而危及母亲和胎儿健康.     

乙型肝炎病毒(HBV)DNA免疫的初步研究

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增了编码ＨＢＶｓＡｇ的基因序列,将其插入到ｐｃＤＮＡ３载体中,位于人巨细胞病毒（ＣＭＶ）早期启动子下游．重组质粒ｐｃＤＮＡ３－ｓＡｇ转染细胞后检测到ＨＢｓＡｇ表达．用纯化后的重组质粒直接注射到ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨骼肌内,诱发实验小鼠产生了抗ＨＢｓＡｇ特异性抗体．ＰＣＲ扩增未检测到注射部位及肝脏细胞染色体中有外源ＨＢＶＤＮＡ整合     

一种改进的人工免疫网络优化算法及其性能分析

基于人工免疫网络算法（aiNet）,借鉴禁忌搜索算法的机制,提出一种禁忌人工免疫网络算法（TS—aiNet）．在算法中引入禁忌表,禁忌那些在网络迭代中亲和度不再增加的细胞,并通过特赦准则赦免一些被禁忌的优良状态;增加一个记忆表,用于保存成熟的记忆细胞;重新定义了Gauss变异方式,保证多样化的有效搜索．利用Markov链证明了算法全局收敛性,分析了算法的复杂度,通过对多个典型系统仿真分析该方法的性能,并与克隆选择算法和aiNet算法进行比较研究．结果表明,该算法在多模态搜索空间中具有更好的全局收敛性、稳定性和寻找极值点能力,能够克服早熟现象,是一种有效的全局优化搜索方法．     

短蛸消化系统粘液细胞的类型与分布

采用阿新兰和过碘酸雪夫氏反应（AB-PAS）染色法对短蛸（Octopus ocellatus）消化系统各器官中粘液细胞的类型和分布进行了研究．将粘液细胞分为红色（Ⅰ）、蓝色（Ⅱ）、紫红色（Ⅲ）和蓝紫色（Ⅳ）4种类型．短蛸口膜、口球、胃盲囊、肠、直肠、肛门侧瓣、前唾液腺和后唾液腺均有粘液细胞分布，而食道、嗉囊、胃和肝胰脏没有粘液细胞分布．口膜外上皮内粘液细胞较多，多为Ⅱ型；口球中副舌腺内含大量粘液细胞，多为Ⅱ型．胃盲囊侧褶基部粘液细胞较多，其中Ⅰ型最多，Ⅱ型次之，Ⅲ型和Ⅳ型很少；侧褶中部小褶上的粘液细胞全为Ⅱ型；侧褶游离端粘液细胞全为Ⅰ型．肠、直肠和肛门侧瓣粘膜上皮内均有大量粘液细胞，多为Ⅱ型．前、后唾液腺内均存在大量粘液细胞，其中前唾液腺中多为Ⅰ型和Ⅲ型，后唾液腺中Ⅳ型最多，Ⅱ型次之，Ⅰ型和Ⅲ型较少．     

人凝血Ⅸ因子乳腺特异性表达载体在离体细胞和小鼠乳腺组织中表达的初步研究

以小鼠MAR（matrixattachmentregion）元件,牛β－酪蛋白（β－casein）基因5＇端2．0kb调控顺序,人凝血Ⅸ因子小基因（hFIXminigene）构建乳腺组织特异性表达载体,表达载体和质粒pSV－neo共转染中国仓鼠卵巢细胞（CHO）,兔皮肤纤维细胞（RSF）和人胚肾上皮细胞（293细胞）．发现hFIX基因在CHO细胞中获得低水平表达,最高表达量为7．2ng／ml．在皮肤成纤维细胞中的表达量低于2ng／ml．在293细胞中没有表达．表达载体用stearylamine（SA）脂质体包埋后尾静脉注射哺乳期小鼠,hFIX蛋白在小鼠乳汁中表达水平高达87．34ng／ml．     

链佐菌素对大鼠胰岛损伤的病理形态免疫组化研究

应用胰岛素,胰高血糖素和生长抑素抗血清,通过免疫组化染色对正常（对照组）和ＳＴＺ诱导的糖尿病大鼠（实验组）胰岛的病理形态进行了观察。结果显示：实验组胰岛Ｂ细胞发生明显变性坏死,对照组与实验组表达胰岛素呈阳性的胰岛分别为９２．４％,２３．３％,二者之间的显著性差异（Ｐ〈０．００１）,实验线胰岛素的表达胰岛胞具有直接损伤作用,Ａ细胞的增生可能与ＳＴＺ有关,并参与升高血糖和胰岛素含量降低效应。     

Survivin基因在胃癌组织中的表达及其与凋亡的相关性研究

目的研究胃癌组织中Survivin基因的表达及其与凋亡的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测30例正常胃粘膜及120例胃癌组织中Survivin基因的表达;采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）技术,检测其凋亡指数。结果30例正常胃粘膜组织Survivin基因均不表达,胃癌组织中Survivin阳性率为62．5％（75／120）,二者有显著性差异（P〈0．01）;Survivin基因表达与组织分化程度和TNM分期密切相关（P〈0．05）。胃癌组织凋亡指数（AI）和TNM分期、组织分化程度密切相关（P〈0．05）。Survivin基因表达水平与凋亡指数呈显著负相关（P〈0．01）。结论Survivin基因在胃癌的发生发展过程中可能起重要作用。Survivin基因的表达可抑制胃癌细胞凋亡、促进胃癌细胞增殖。