虎纹蛙Sox基因的PCR扩增及SSCP分析

本文采用PCR技术,以特异扩增人SRY基因HMG－box保守区的一对引物,扩增了虎纹 蛙Sox基因（SRY－box gene）。并对扩增产物进行了SSCP分析。结果雌雄虎纹蛙个体均扩增 出一条带,大小为221 bp,表明虎纹蛙Sox基因在雌雄个性间无性别特异性。SSCP分析结果 显示虎纹蛙Sox基因雌雄个体片段的单链迁移率无差异,而与人的有较大差异。本文为探讨 虎纹蛙的性别决定机制及Sox基因的进行提供了分子资料。     

黑斑蛙Sox基因的PCR扩增

以特异扩增人SRY基因HMG -box保守区的一对引物 ,扩增了黑斑蛙的Sox基因 (SRY -boxgene) .结果表明 ,雌雄黑斑蛙个体均扩增出了两条带 ,大小分别为 4 50bp和 90 0bp ,显示了Sox基因在黑斑蛙雌雄个体间无性别特异性 ,且可能含有内含子 .本文为探讨黑斑蛙的性别决定机制及Sox基因的进化提供了分子资料 .     

利用SRY基因鉴定绵羊成纤维细胞性别的研究

SRY是哺乳动物性别决定的重要基因，利用绵羊SRY基因序列设计PCR引物，对绵羊胚胎来源的成纤维细胞提取总DNA进行PCR扩增，鉴定6个不同胚胎来源的成纤维细胞的性别．结果表明，3个有扩增带为雄性，3个无扩增带为雌性，为核移植选取雄性或雌性转基因成纤维细胞提供一项可行的方法．同时提取牛、山羊、小鼠的总DNA，利用绵羊SRY基因引物进行扩增，对SRY基因在哺乳动物中的保守性进行研究．结果表明，绵羊SRY基因保守区外的一对引物对雄性山羊、绵羊、牛及小鼠均能扩增出特异的DNA片段，说明SRY基因序列有很强的保守性．     

利用妊娠奶牛血液快速鉴定不同发育阶段的胚胎性别

采集妊娠奶牛静脉血液，从血浆中提取胎儿DNA，利用牛Y染色体上性别决定基因（sex-determining region Ylinked gene, SRY gene）的特异性序列设计引物，应用巢式PCR扩增SRY基因特异性片段，同时以牛肌动蛋白（β-Actin）特异性片段的扩增产物作为内参照，对32头妊娠奶牛早期胚胎性别进行鉴定。结果表明：从不同妊娠期奶牛血浆中提取胎儿游离DNA进行胚胎性别鉴定的总准确率为80％，其中1～2月龄、2～3月龄、4～8月龄胚胎性别鉴定的准确率分别为60％、85．7％、92．3％。     

利用降落PCR扩增KMT-1基因

用试剂盒提取一株牦牛源多杀性巴氏杆菌(C47-8)基因组DNA,同时应用降落PCR和普通PCR扩增KMT-1基因片段。结果表明:降落PCR法扩增出KMT-1基因片段的特异性条带与目的片段长度一致,普通PCR法没有结果。相同的反应体系,降落PCR程序能明显提高PCR的特异性,可用于扩增普通PCR难以扩增的基因片段。     

两重巢式PCR检测母体外周血中胎儿游离DNA

使用两重巢式PCR技术检测母体外周血中胎儿游离DNA,为非损伤性产前鉴定胎儿性别和诊断单基因疾病奠定基础.采用改良的chelex100方法提取60例孕龄为16~36周孕妇的外周血浆中游离胎儿DNA,依据NCBIX染色体长臂ATL1位点,Y染色体上DYS14位点序列,设计并合成引物,用巢式PCR同时扩增2个基因片段,以鉴定胎儿性别.结果表明:有ATL1位点和DYS14位点的扩增产物261bp和198bp鉴定为男性胎儿,而仅有261bp扩增产物鉴定为女性胎儿.均以真实出生性别进行确认后发现,此方法能有效提高检测特异性.两重巢式PCR能够简便并准确地鉴定胎儿性别,对单基因疾病特别是X-连锁遗传病的诊断有积极意义.     

野葛特异性PCR检测方法的建立与应用研究

一个物种特有的DNA序列可以开发成能够识别该物种及其加工产品的标记.为寻找野葛(Pueraria lobata)特有的DNA序列,建立野葛特异性PCR检测方法,通过对Gen Bank中野葛基因信息的检索分析,筛选出了同源序列少特异性强的野葛查耳酮合成酶基因作为研究对象.对该基因的特定区域设计引物,建立了野葛特异性定性PCR检测方法.利用该方法对野葛14个不同居群的DNA进行PCR扩增,均能扩增出226 bp的片段.而用相同引物分别对20种其他植物的DNA进行扩增均未出现特异性扩增产物. PCR灵敏度实验结果表明该方法的检测灵敏度达到0.02 ng基因组DNA,对市场上的葛根产品进行检测结果表明该方法可以有效鉴定葛根产品中是否含有野葛成分.该野葛特异性PCR检测方法特异性强、灵敏度高,可用于野葛成分的检测与鉴定.     

两种观赏鸟性别的快速鉴定研究

虽然CHD基因的保守性和性特异性引物已被广泛应用于性别鉴定领域,但羽毛样以及PCR体系等的选择却会产生不同的鉴定效果,因此如何对这些影响单性态观赏性鸟类性别鉴定的多重因素进行最优化处理以达到快速鉴定的目的,就成了人工繁育过程中最亟待解决的问题.本文用固定影响因素(PCR体系除外)的方法,对PCR体系进行优化处理,羽毛提取DNA,然后CHD基因的相关引物进行性别鉴定.结果表明:所有雌性鸟类得到CHD-Z和CHD-W的两条带,雄性1条CHD-Z带的高效鉴定.因此,确立了此类鸟的快速鉴定体系,即画眉鸟性别鉴定体系,用于鉴定换羽季的画眉鸟的性别;以及红嘴相思鸟性别鉴定体系,用于鉴定红嘴相思鸟的性别;同时可为多种体型相似的鸟类的快速鉴定提供参考.     

黄鳝性别决定与SRY基因不相关

以人和鼠的SRY片断为探针与黄鳝基因组DNA进行杂交,发现雌雄黄鳝中均有相同的杂交带.用一对SRY基因保守区HMGbox的引物,在雌雄黄鳝的基因组DNA中均扩增出约200bp片段.将此片断克隆测序后发现雌雄个体中此片断仅相差1个bp,且与人的SRY基因HMG盒基因极相似.以该片段与雌雄个体的RNA进行Northern杂交未能检测到杂交带,RT-PCR反应扩增出一条微弱的200bp片段.以上结果表明:在雌雄黄鳝的基因组DNA中均存在SRY同源片断;黄鳝中的SRY同源片断可能与其性别无直接关系,而是具备其他功能,由此推测低等脊椎动物的性别决定可能由其他基因控制.     

PCR-RFLP中Chelex-100制备DNA模板的方法建立及其条件优化

目的:建立一种快速、可靠、经济的DNA纯化技术用于分子流行病学调查及群体遗传学的研究.方法:根据MMP3基因外显子2中rs679620的SNP区域(-Lys45Glu-)设计引物,采用Chelex-100法从微量全血中提取人基因组DNA,利用PCR-RFLP对其进行检测,观察基因分型结果.结果表明:取10μL全血,加入200μL 5%Chehx-100溶液,56℃水浴保温30 min后,100℃水浴8 min,离心取上清为最佳用于PCR的DNA模板提取条件.经PCR扩增及酶切验证,其DNA条带特异、清晰,适用于基因分型.结论:提取人基因组DNA的Chelex-100法所需血样微量、操作简单,快速、可靠、经济,特别适合于大量样本的DNA提取,可用于人群分子流行病学调查及群体遗传学的研究.     

大肠杆菌K88ac,ST1,LTB基因融合

利用PCR技术,从大肠杆菌C83902质粒中扩增出K88ac基因,再从含ST1-LTB融合基因的重组质粒pXSLT1中扩增出ST1-LTB融合基因,构建了含K88ac-ST1-LTB融合基因表达质粒的重组菌株BL21(DE3)(pET-28KSL).经酶切鉴定和序列测定证实,构建的重组质粒pET-28KSL含有K88ac-ST1-LTB融合基因,且基因序列和阅读框架正确.经ELISA检测,重组菌株表达的K88ac-ST1-LTB融合蛋白能够被ST1,LTB单抗和K88ac抗体识别,表明已成功构建了K88ac-ST1-LTB融合基因,并实现了在重组大肠杆菌中的表达.     

科研成果跨领域应用是不务正业吗?

基因病毒工程国家重点实验室的常务主任金奇,除了做与传染病有关的项目研究之外,正在积极与华北制药集团和大庆油田合作,解决用微生物生产Vc和提高石油产量的难题。金奇在“863”计划里承担了两个课题,其中一个就是破译用于生产Vc菌株的基因组。Vc是我国重大战略医药品种之一,中科院早在十几年前,就发明了一种Vc发酵生产法,这种方法没有污染,而且产量高,但是需要特定的生产菌株,因此,国家把生产菌株的功能基因研究列进“863”计划。现在,金奇带领的课题组,与华北制药集团合作,利用基因组、芯片和分子生物学等技术,已经把菌株的基因测序完毕。     

云平台下基因 基因相互作用识别算法

针对现有的快速方差分析算法进行并行可扩展性改进, 设计一种高效的并行计算模型, 并提出一种基于MapReduce模型的基因 基因相互作用识别算法--MRANOVA算法. 该算法有效解决了现有基因 基因相互作用识别算法在海量数据规模下普遍存在计算复杂度过高的问题. 实验结果表明, 该算法充分利用了云平台的并行计算能力, 随着数据量的增大, 加速比逐渐接近于集群数量, 可高效准确地完成基因 基因相互作用的识别.     

基于遍历基因组合的特征基因选取方法

特征基因的选取是非常热门的问题,在癌症是由某个或者某几个基因共同相互作用引起变异的假设下,从最简单的2个基因组合进行研究,遍历所有可能的基因组合,运用Logistic回归分类器,以预测精度和AIC准则为评价标准,对所有的模拟结果进行评价,得到最优基因组合（X55187,D14812）。同时运用交叉留一检验,验证了此基因组合建立模型的稳定性。最后又对预测精度大于90%的640对基因组合进行频数分析,并与已有文献进行比较,得到出现频率高的基因组合,预测精度并不一定高的结论。     

病毒诱导的基因沉默

病毒诱导基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)是近年发现的一种转录后基因沉默的现象,是快速鉴定植物基因功能的一种反向遗传学新技术,近年来成为植物基因功能研究的有力工具.文章从病毒诱导基因沉默的发现、作用机制、优势、病毒抑制子及其在植物基因功能研究和植物抗病毒的应用等方面进行了综述.     

病毒诱导的基因沉默

病毒诱导基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)是近年发现的一种转录后基因沉默的现象,是快速鉴定植物基因功能的一种反向遗传学新技术,近年来成为植物基因功能研究的有力工具.文章从病毒诱导基因沉默的发现、作用机制、优势、病毒抑制子及其在植物基因功能研究和植物抗病毒的应用等方面进行了综述...     

以抗的表位为基础的基因免疫

基因免疫（ｇｅｎｅ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ）是指通过将目的基因克隆于真核表达载体后直接注入机体,表达相应抗原,诱生免疫应答。１９９０年,Ｗｏｌｆｆ等在研究ＤＮＡ的化学损伤及修复时偶然发现：肌肉注射含有编码虫荧光素酶（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ）报告基因的裸露质粒ＤＮＡ时,在注射局部有该报告基因的表达及酶活性表现。此后的研究发现表达的蛋白可在机体内诱生特异性的体液免疫应答。１９９３年,Ｕｌｍｅｒ等半流感病毒ＮＰ表达质粒注射入小鼠骨骼肌,不仅检测到特异性ＩｇＧ抗体,而且免疫小鼠的脾细胞在体外可特异杀伤Ｎ…     

基因芯片技术

基因芯片(Gene Chip)技术是近年来发展起来的高通量、高效率的分子生物学技术。该技术在分子生物学研究、医学临床检验、生物制药和环境医学等领域都显示出了强大的生命力，具有微型化、集约化和标准化的特点。本文简要介绍了基因芯片的原理、类型、制备与检测方法、应用及该技术现阶段遇到的一些困难和未来的发展方向。