酶解制备牦牛乳酪蛋白降血压肽的初步研究

目的:牦牛乳富含酪蛋白,其经酶解制备的降血压肽以安全性高、无副作用等优点已成为乳品开发和高血压防治药物研究的新热点.方法:本实验对从牦牛乳中提取的酪蛋白,依据复合蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶及胰蛋白酶各自的最适pH及温度采用酶解方法制备降血压肽,并且以ACE抑制活性为指标初步筛选最佳水解酶.结果:五种酶ACE抑制肽抑制率分别为:复合蛋白酶为39.02%,中性蛋白酶为67.48%,碱性蛋白酶为56.10%,木瓜蛋白酶为71.54%,胰蛋白酶为8.94%.结论:说明,在最适pH及温度条件下,木瓜蛋白酶和中性蛋白酶为制备降血压肽的最佳酶选,这为后续进一步的制备降血压肽实验提供依据.     

响应面法优化酶解鱼鳞制备ACE抑制肽的研究

鱼鳞是鱼类加工的下脚料之一,含有丰富的蛋白质和矿质元素等营养物质,是非常好的可利用生物资源. 文中研究了碱性蛋白酶酶解鱼鳞制备ACE抑制肽的优化工艺. 以ACE抑制率为指标,在酶解温度、酶解pH、加酶量、底物质量浓度等条件下先进行单因素实验,在此基础上运用响应面法优化碱性蛋白酶酶解鱼鳞制备ACE抑制肽的工艺条件. 结果表明：在加酶量61%(约12 000 U/g)、pH 89、温度547 ℃的条件下酶解2 h,ACE抑制率理论值为8536%,实际酶解物的ACE抑制率为862%,相对误差为091%.     

碱性蛋白酶水解豆粕制备ACE抑制肽水解条件的优化

为了寻求高效的血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽制备方法,在实验室条件下利用碱性蛋白酶水解豆粕生产ACE抑制肽,并采用单因素和多因素实验相结合的方法对酶解条件进行优化.结果发现,适当延长碱性蛋白酶的水解时间和提高p H,可大幅度提高ACE抑制肽的抑制活性.单因素和多因素实验综合结果显示,碱性蛋白酶水解豆粕产生ACE抑制肽的适宜水解条件为:p H为9.0,水解温度为50℃,水解时间为4 h,蛋白酶质量分数(酶质量/底物质量)为2.0%,底物质量浓度为40 g/L,在此条件下制备的ACE抑制肽的抑制率可达到97.97%.     

血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽的酶法制备

以扇贝裙边的酶解产物——蛋白多肽对ACE活性的抑制率作为控制水解程度的指标,确定制备ACE活性抑制肽的最佳酶种及酶解工艺技术条件.通过胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合风味酶、枯草杆菌蛋白酶5种酶酶解扇贝裙边得到的蛋白多肽对ACE抑制能力的比较发现,5种酶在不同酶解时间所得到的酶解蛋白多肽都具有一定的ACE抑制能力,其中胃蛋白酶酶解蛋白多肽的ACE抑制率最高,为91.33%;再经L9(3)4正交实验对胃蛋白酶酶解工艺条件进行优化,确定酶解反应最佳条件是酶量400 U.g-底1物,pH 2.5,温度32℃,底物浓度(原料∶水)1∶2,酶解时间3 h;试验结果还表明,单酶(胃蛋白酶)的酶解蛋白多肽比复合酶(复合风味酶)和双酶(胃蛋白酶 木瓜蛋白酶)的酶解蛋白多肽对ACE活性的抑制能力都强.     

酶法水解乳清蛋白过程的优化

以浓缩乳清蛋白为原料，选择碱性蛋白酶（Alcalase）水解乳清蛋白。分析了pH、温度、酶和底物比（E／S）和反应时间等因素对乳清蛋白水解的影响。通过响应面法分析，确定了碱性蛋白酶（Alcalase）酶解乳清蛋白的最佳水解条件为：pH8．5、反应温度55℃、酶和底物比0．05。水解3．0h，水解度为19．34％。     

米糠蛋白活性肽的制备工艺研究

初步研究酶法水解米糠蛋白制备米糠活性肽的工艺条件,同时探讨了不同料液比、pH值、温度和提取时间对蛋白水解率的影响.通过正交优化实验得出酶水解米糠蛋白的最佳条件是:酶解温度37℃,加酶量为0.5%,酶解时间是3h,酶解pH值为9.结果表明碱性蛋白酶酶解法和三氯乙酸酸溶法相结合,是一种很理想又有效的制备蛋白肽的方法.     

CPP生产副产物--CNPP酶膜耦合法 制备ACE抑制肽研究

采用酶解与膜分离耦合的方法,以酶膜耦合法生产酪蛋白非磷酸肽(CPP)得到的副产物——酪蛋白非磷酸肽(CNPP)为原料制备高活性ACE抑制肽.用Protease N、胰蛋白酶、Fla-vourzyme、AS1398、酸性蛋白酶等几种蛋白酶对经过酶膜耦合制备的酪蛋白非磷酸肽进行二次酶解,同时与1 K膜分离耦合,然后对二次酶膜耦合所得产物的ACE抑制活性进行比较.结果表明,Protease N比其他几种蛋白酶更适合用于酪蛋白非磷酸肽制备高活性的ACE抑制肽,其产物的蛋白质量浓度为1 g/L时的ACE抑制率达到55.60%.     

瑞士乳杆菌发酵制备牦牛乳酪蛋白源性降血压肽的工艺研究

目的:以牦牛乳源酪蛋白为原料,利用瑞士乳杆菌,对发酵法制备降血压肽的工艺进行初步探讨.方法:试验首先采用凝乳酶沉淀法从耗牛乳中提取酪蛋白,依据瑞士乳杆菌的发酵特点,按5％(体积比)接菌量进行发酵制备降血压肽.然后并以降血压肽对血管紧张素转换酶(ACE)的抑制率为指标,主要探讨了底物浓度、pH值、发酵时间三因素对瑞士乳杆菌发酵法制备降血压肽工艺的影响.结果:在接菌量为5％,其他三因素各设置五个水平进行工艺优化,最优工艺条件为:底物浓度4％、发酵pH值8.0、发酵时间16 h.此工艺条件下ACE抑制率可达约68％.结论:通过实验说明底物浓度、pH值、发酵时间等参数的控制对发酵酪蛋白制备抑制肤很重要,此试验数据为后续进一步完善制备降血 压肤的实验奠定了重要的基础.     

酶解鱿鱼蛋白的制备

探讨了中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、风味蛋白、酶菠萝蛋白酶以及复合蛋白酶对鱿鱼蛋白的酶解效果.实验结果表明,在相同水解条件下,复合酶对鱿鱼蛋白的水解效果优于单酶,确定了木瓜蛋白酶和中性蛋白酶为水解鱿鱼蛋白的适宜水解酶,两种酶量的比例为1:1,正交实验得出最佳水解条件为:温度50℃、pH7、时间8 h、加酶量6 000IU/g.     

文冠果降血压肽的制备及其活性研究

以文冠果蛋白为研究对象,采用酶解法制备文冠果蛋白酶解肽,并对其体外抗高血压活性进行研究。以水解度为指标确定酶解条件。蛋白水解物经超滤得到分子量为1k Da,1~5 k Da和5 k Da 3个区段的多肽组分,测定其对血管紧张素转化酶(Angiotensin Converting Enzyme,ACE)的抑制率。最佳酶解条件为:底物质量浓度40g/L,加酶量8%(质量分数)(碱性蛋白酶),酶解时间175 min,酶解温度55℃和酶解p H 9.0,此条件下水解度最高为22.97%;3种多肽组分中1k Da的ACE抑制率最高为83.43%,其半抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC50)为0.394 mg/m L。文冠果蛋白酶解多肽具有显著的体外抗ACE活性,可作为降血压肽的开发原料。     

木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶水解制备绿豆多肽

用木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶顺序水解的方法制备绿豆多肽: 先对水解体系的pH值、 碱性蛋白酶与绿豆分离蛋白的质量比（E/S比）、 水解温度、 绿豆分离蛋白质量分数进行单因素实验; 再在单因素实验基础上, 采用4因素3水平正交实验设计优化碱性蛋白酶水解条件. 获得最佳水解条件为： 绿豆分离蛋白的质量分数为8%, 水解温度为55 ℃, E/S比为8%, pH=9.0. 在最佳顺序水解条件下, 绿豆分离蛋白的水解度达32.58%.     

Alcalase酶解蛋清粉制备抗凝血肽的工艺优化

采用Alcalase碱性蛋白酶酶解蛋清粉制备食源性抗凝血肽。结果表明:底物浓度过大会抑制水解度的增长,底物质量分数为1%时蛋白质完全水解后的产物抗凝血活性最佳;高温和低温均对水解度有影响,低温酶解产物的抗凝血活性较好;pH值对水解度的影响与Alcalase的最适pH值有关;pH值为7时,抗凝血活性最好;酶/底物浓度增大,但底物不变的情况下,对水解度的提高不明显,酶/底物浓度过大,导致抗凝血活性降低。考虑交互作用经试验优化设计确定的酶解最佳工艺参数为:底物质量分数为1%,酶解温度为50 ℃,酶/底物质量分数为5%,酶解pH为8。在该条件下水解2 h,凝血抑制率达到68.92%。     

鲭鱼罐头蒸煮液蛋白酶解产物的生物活性分析

以鲭鱼罐头蒸煮液为原料,采用生物酶解方法制备活性肽,以实现鱼罐头加工废弃液的高值化利用.研究结果表明,采用复合酶(碱性蛋白酶和胰蛋白酶)分段酶解,得到相对分子质量MW1 ku的组分占50%,高于碱性蛋白酶(30%)和胰蛋白酶(28%)单酶水解效果.进一步采用超滤方法分离酶解产物,得到不同相对分子质量范围的3个组分,其中MW1 ku的P1组分的抗氧化活性和ACE抑制效果最好.     

大米蛋白水解条件的响应面法优化

运用响应面法优化大米蛋白酶法水解条件,提高大米蛋白水解度和提取率。本研究首先应用单因素实验法分析酶添加量、温度、pH值以及酶解时间对大米蛋白水解的影响;然后在单因素实验基础上,进一步采用Box-Behnken法进行实验设计,考察上述4个因素对大米蛋白水解度和蛋白质提取率的影响。研究结果表明最佳酶解条件为温度62℃,酶添加量2.5%,pH值8.2,酶解时间10.5h,此时大米蛋白的水解度可达到41.5%,蛋白质提取率可达93.1%。研究成果可为酶解制备可溶性大米蛋白肽的工业化应用提供参考。     

酶解蛋膜制备小分子多肽的工艺研究

目的 以废弃蛋膜为原料,用碱性蛋白酶水解制备小分子多肽.方法 在单因素实验的基础上以水解度、肽质量分数为响应值,采用4因素(时间、温度、酶用量、pH)3水平的响应面(Re-sponse Surface Method,RSM)分析法根据回归分析确定影响因子.结果 在分析各因素的显著性和交互作用后,得到最佳水解条件:时间2.3h、温度48℃、酶用量2.0%、pH9.1,蛋膜水解度(DH)达到18.23%,肽含量达到62.38%.结论 为废弃蛋膜的综合利用提供了一条思路.     

pH渐变条件下双酶协同水解大豆蛋白

研究了在没有外加碱的pH渐变条件下．用枯草杆菌碱性蛋白酶(Alcalase 2．4L,酶活力2．4AU/g)和黑曲霉酸性蛋白酶(酶活力3000u／g)双酶协同水解从大豆蛋白制备寡肽(10个氨基酸以下的肽)水解物的可行性．考察了单酶单因素水解条件、双酶加入方式对大豆蛋白降解率和蛋白质水解度的影响,并在此基础上通过正交试验进一步优化出双酶一次性投料方案下水解大豆蛋白的最佳条件：水解温度为60℃．碱性蛋白酶加入量为每g蛋白15μL,酸性蛋白酶加入量为6％,底物浓度为40g／L,水解时间为18h．在上述最佳条件下,大豆蛋白的降解率可达76％,蛋白质的水解度可达26％,水解物中相对分子质量小于1350的寡肽达到了66％．结果表明,在不外加碱的条件下,采用双酶协同水解方法能够显著提高大豆蛋白降解率以及蛋白质水解度．     

花生分离蛋白复合酶水解工艺优化研究

探讨了超声波辅助前处理对花生分离蛋白复合酶解的影响,比较了碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶等六种蛋白酶解物清除DPPH自由基的效果,确定碱性蛋白酶和胰蛋白酶较佳的复合比例为8∶2.在此基础上,开展响应面优化试验,以DPPH自由基清除率和水解度为指标,探讨复合酶与风味蛋白酶酶解的较佳工艺参数,并分析DPPH清除率和水解度相关性.实验结果表明,复合蛋白酶制备花生分离蛋白抗氧化肽的较佳酶解工艺为pH 8.5,温度49.36℃,酶添加量(E/S,质量分数m/m)3.40%,酶解时间203.59 min.     

蚕蛹抗氧化肽的制备及其体外抗氧化活性评价

为更客观地评价蚕蛹抗氧化肽的抗氧化能力, 以人工胃肠模拟液对不同蛋白酶酶解物的抗氧化能力进行评价, 优选获得最佳的制备用酶——碱性蛋白酶. 在此基础上,以蚕蛹抗氧化肽总还原能力为指标, 利用响应曲面法(response surface method, RSM)优化碱性蛋白酶制备蚕蛹抗氧化肽的最佳酶解工艺. 结果表明: 碱性蛋白酶的最佳酶解条件为pH=8.30, 加酶量为15.34 μL(1 902 U), 温度为50.47 ℃, 时间为2.45 h; 在此条件下优化预测得到的2 mg 蚕蛹蛋白/mL 酶解液的总还原能力为0.434, 蚕蛹抗氧化肽对·OH 和DPPH· 自由基的半数清除率IC50 分别为4.51 与4.24 mg/mL.     

蜗牛水解液的制备及其乳酸发酵饮料的研究

用碱性蛋白酶对白玉蜗牛肉进行水解,探讨了水解温度、pH值、加酶量及固液比对蜗牛肉水解液水解得率的影响,通过正交试验确定了蜗牛肉水解的较佳条件,并以水解液为原料进行乳酸菌发酵,获得较佳的饮料制备工艺.结果表明:以碱性蛋白酶为水解酶,水解工艺条件为,温度50℃,pH 10.5,料液比1:5,加酶量6 000 U/g,水解3 h后加1%风味蛋白酶水解1 h时水解度为7.13%.水解液乳酸菌发酵的较佳工艺条件为:115℃高温灭菌15 min,蔗糖添加量5%,乳糖添加量2%,乳酸菌接种量3%～4%,时间6 h.     

海参内脏酶解制备海参肽工艺

以蛋白水解度和酶解液中海参肽相对分子质量的分布作为指标,考察不同蛋白酶的酶解效果,筛选水解海参内脏的最适合蛋白酶,并通过单因素实验和正交实验优化酶解工艺.实验结果表明:胰蛋白酶的水解效果最佳,可用于水解海参内脏制备海参肽;在底物质量分数为1.0%,加酶量为0.375 1 mkat·g^-1,pH值为8.0,酶解温度为37 ℃,水解时间为5 h的最优酶解条件下,海参内脏的水解度可达到48.90%,酶解液中的多肽(2 000~5 000 u)质量分数为52.68%,寡肽(含氨基酸)(≤2 000 u)质量分数为47.25%.