黄芩生长与黄芩苷积累规律研究

试验研究了黄芩愈伤组织和栽培黄芩的生长特性和黄芩苷积累规律.研究表明,黄芩愈伤组织的生长和黄芩苷的积累并不同步,而是先生长后合成.栽培黄芩在6～7月和8～9月有两个生长高峰期,其中6～7月的黄芩地上部分增长量最为显著,增长了582%,在此期间主要进行初级代谢,在9～10月,根部的黄芩苷含量快速积累,其含量提高了76.4%,而茎叶中的黄芩苷含量均明显减小,分别减少了33.8%和21.5%,说明黄芩生长由初级代谢向次级代谢快速转化,这与在黄芩愈伤组织中的积累规律非常相似.     

齿瓣延胡索细胞悬浮系的建立和延胡索乙素的形成

就各种因素对齿瓣延胡索悬浮细胞生长和延胡索乙素形成的影响做进一步的研究。结果表明：随着接种量的提高，细胞生长加速，培养液浊度增大，齿瓣延胡索细胞悬浮液培养中最适接种量为2g/30ml;pH5.6最有利于细胞生物量的积累；2，4—D与2种细胞分裂素的组合，对于生长量积累和THP含量的作用最显著；在培养基中添加甘露糖和半乳糖，对于提高培养物THP含量是有效的；G1y Phe Lys的作用效果最显著，细胞鲜质量、干质量和THP含量均最高。     

蔗糖对悬浮培养肉苁蓉细胞的生长及苯乙醇苷合成的影响

通过研究悬浮培养肉苁蓉细胞生长、蔗糖消耗的关系,结果表明蔗糖是限制细胞生长的主要因素.在不同的蔗糖浓度下,比较肉苁蓉细胞干重和主要活性成分苯乙醇苷的合成情况,在30g/L的蔗糖浓度下最有利于肉苁蓉细胞的生长,最大生物量达10.84 g/L,苯乙醇苷最高含量可达干重的16.32%,产量为1296.04mg/L.     

超声波对黄芩苷生物转化的影响

采用超声波技术对黄芩苷转化培养液进行处理,研究超声波处理对黄芩苷转化效果的影响.高效液相色谱检测显示,只有培养液经超声波处理的实验组中有苷元黄芩素的吸收峰出现,超声波处理对黄芩苷生物转化有显著影响.实验确定超声波最佳处理条件为频率40kHz,时间40min.     

甘薯胚性悬浮系的建立及其细胞生长特性研究

徐薯18叶片接种在附加2mg/L,4-D的MS固体培养基上，形成了质地松散的胚性愈伤组织，胚性愈伤组织在附加1mg/L,2,4-D的MS液体培养基中进行悬浮培养，建立了增殖迅速、分散度良好的具有较高体胚分化能力的细胞悬浮系。小型细胞团（直径小于350μm）以2％－4％的接种量转移到无激素MS液体培养基中，可分化出大量体胚。在继代初期，悬浮系pH值呈下降趋势，细胞处于旺盛分裂时期，导致悬浮系鲜质量、干质量、细胞紧实体积（PVC）的显著升值；4d以后，pH值逐渐回升，细胞分裂缓慢而体积增长迅速，导致鲜质量、PVC增加而干质量少有变化；6d以后pH值继续回升而细胞分裂和生长受到明显抑制。     

酸,碱对钠膨润土悬浮系pH值的影响

通过测试ｐＨ值及电导率的方法,研究钠蒙脱石在ｐＨ＝１￣３的酸、碱体系中形成质量分数为０．１％的悬浮系时,钠蒙脱石－水体系ｐＨ值的变化行为。钠蒙脱石悬浮系呈现缓冲性质,保持ｐＨ值的能力决定于它在中性水溶液中形成的悬浮系的ｐＨ值大小。悬浮系的ｐＨ值稳定约需７ｄ的时间,在老化时间内,呈酸性的悬浮系其ｐＨ值回升,呈碱性的悬浮系,其ｐＨ值回落。     

黄芩苷几种固体制剂制备和质量检查的实验设计

黄芩具有广泛的中药用途,其药效成分黄芩苷已被应用于不同剂型的药物中。将黄芩苷不同剂型的制备引入药学专业本科生的药剂实验中,结合黄芩苷的性质和不同剂型的特点,设计并制备出了适合本科生实验教学的黄芩苷片剂、滴丸和栓剂三种固体剂型,并分别对其进行质量检查,均取得了较好的实验效果。构建的实验方法可作为实验教学素材引入本科生药剂学开放性实验课中。     

黄芩愈伤组织的诱导培养及其黄芩苷的含量测定

试验首次建立了黄芩愈伤组织中黄芩苷的测定方法,并对黄芩愈伤组织生长和黄芩苷生成的稳定性进行了初步研究.采用高效液相色谱法测定愈伤组织中黄芩苷的含量,色谱条件为:色谱柱为ODS-C18柱,流动相:水-甲醇-磷酸(47∶53∶0.2),流速为1 mL/m in,检测波长为280 nm,室温.结果表明:黄芩苷在2.6μg/mL~120μg/mL范围内线形关系良好(r=0.9994),平均回收率为99.74%,RSD为0.85%,该方法具有简便、快速、稳定性好,可用于愈伤组织中黄芩苷的含量测定.     

黄芩苷对PMMA表面的修饰

为得到一种具有特殊功效的聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA),用氢氧化钠溶液对PMMA片的表面进行预处理,在黄芩提取液中用黄芩苷对PMMA表面进行修饰.该修饰工艺在常温常压下,pH值为5的黄芩提取液中进行,修饰后的透明PMMA板材,使用贴膜法进行抑菌测试.使用发光二极管(LED)光源对修饰后的PMMA进行滤光测试,对修饰后的PMMA进行红外光谱扫描,并对黄芩苷上能量分布进行了简单计算,依据修饰后的PMMA板材的红外光谱和黄芩苷上能量分布,初步分析了黄芩苷对透明PMMA板材表面修饰的机理.结果表明,该工艺简单、成本低,易操作,且修饰后的PMMA具有一定的抑菌及去除蓝光的效果.     

玉米细胞悬浮系建立和单细胞培养影响因素的研究

以玉米幼胚为外植体进行离体培养,获取愈伤组织,建立悬浮细胞系.试验结果表明:基因型无论是对细胞悬浮系建立还是对单细胞培养都有很大影响;改良1/2B5培养基用于细胞悬浮培养能获得良好的细胞生长与分裂;继代培养时间以及大量元素减半都影响玉米悬浮细胞的生长.     

培养条件对银杏悬浮培养细胞黄酮合成影响研究

对12个不同品种的银杏树幼叶及其诱导的愈伤组织进行了银杏黄酮含量测定，发现其存在较大差异．梅核品种幼叶黄酮含量最高，为3．32％，大白果品种幼叶黄酮含量最低，为0.84％；梅核品种幼叶愈伤组织黄酮含量最高，达1．26％，岭南品种幼叶愈伤组织黄酮含量最低，为0.22％．选取生长旺盛、银杏黄酮含量高的愈伤组织在B5液体培养基中进行了银杏细胞悬浮培养，研究了多种条件对银杏细胞生长和银杏黄酮含量的影响．结果表明，在150mL培养瓶中装有50mL培养液，接种量为鲜质量30—40g/L，对培养细胞给予3000—40001x的光照、以蔗糖为碳源最有利于黄酮的合成，以葡萄糖为碳源则最有利于细胞生长．HPLC检测结果显示，银杏悬浮培养细胞中银杏黄酮含量可达细胞干质量的2．82％．     

不同产地黄芩中的黄芩苷提取转移率研究

采用同一提取方法对不同产地的黄芩中黄芩苷的提取转移率进行考察,并对结果进行分析,以研究不同产地黄芩药材中黄芩苷提取转移率,完善黄芩药材的质量标准.实验结果显示,不同产地的黄芩药材的有效成分转移率有显著差别,药材转移率是影响药材质量的一个重要参数.建议在黄芩药材质量标准中加入提取转移率这项指标作为药材主要质量指标之一.     

黄芩总黄酮的提取工艺研究

采用正交试验,以黄芩苷和总黄酮为指标,筛选水煎煮提取工艺,通过提取工艺研究,寻求黄芩总黄酮的最佳提取方法,提取方法的正交试验表明,水煎煮法中A 3B 2C 3D1为最佳提取工艺.获得最佳提取条件:药材粉碎成粗粉,煎煮三次,每次加12倍量水,提取1小时,趁热滤过,合并滤液.优选的工艺稳定可行.     

Effects of medium nutrition on cell growth and isocamptothecin A and B production by suspension cell culture of Camptotheca acuminata

The effects of initial sucrose concentration, nitrate to ammonium ratio, total N concentration and phosphate concentration in medium on cell growth and isocamptothecin A and B synthesis by suspension call culture of Camptotheca acuminata were investigated in 250 mL shake flasks. 30 g L^-1 sucrose concentration was beneficial to secondary metabolites synthesis. The cell growth and metabolites synthesis were also affected by the ratio of NO3^-/NH4^＋ , and nitrate was tavourable for cell growth. The maximum dry weight was achieved when nitrate was used as the sole N souree. The effect of total initial N on the cell cultures was also investigated with NO3^-/NH4^＋ ratio of 1 ： 2. The final dry cell weight was similar throughout culture period and 50 mM initial N was favourable for secondary metabolite synthesis. 50 mM initial phosphate concentration facilitated both cell growth and secondary metabolites synthesis.     

不同化学因子对银杏发根悬浮培养生长效应的研究

以银杏幼叶、幼芽为材料,诱导银杏外植体产生发根,在建立发根悬浮培养体系的基础上,探讨不同种类植物生长调节物质、不同类型培养基以及蔗糖浓度对银杏发根悬浮培养生长的影响.以便获得银杏悬浮发根快速增殖的最适培养条件,为银杏发根大规模工业化生产提供必要的理论基础.实验结果表明:添加外源植物生长调节物质,对发根的生长是有利的,其中以NAA效果最好,其最佳浓度为1.0 m g/L,发根生长速度为8.59 m g.L-1.-d 1.B5培养基有利于发根的生长,其最佳生长速度为8.58 m g.L-1.d-1.培养基蔗糖的最佳浓度为15 g/L,银杏发根生长速度为7.36 m g.L-1.d-1.     

黄芩中黄芩苷提取的工艺研究

以黄芩为原料、甲醇为提取剂,采用醇提酸沉法从黄芩中提取黄芩苷.通过单因素试验和正交试验探讨了甲醇浓度、提取温度、提取时间、料液比4个醇提条件对黄芩苷提取率的影响,结合直观分析和方差分析,确定最佳提取条件:甲醇浓度为65%,提取温度为80℃,提取时间为2.5h,料液比为1∶10,黄芩苷提取率可达到23.03%.该方法提取率高,纯度高,重现性好.     

三叶半夏细胞悬浮培养和植株再生的研究

三叶半夏幼嫩叶片在MS+2,4-D2.0mg/L+BA0.5mg/L培养基上一个月内可以诱导出愈伤组织.取颜色鲜黄的愈伤组织进行悬浮振荡培养,经3～4次继代培养得到分散性好的细胞悬浮系.悬浮培养过程中细胞生长曲线呈S型,培养12～16d达对数生长期,细胞鲜重在第18d达到最大值.悬浮液pH值的变化在对数生长期同生长曲线一致.将细胞悬浮液过滤得到的小细胞团接种于MS+NAA0.2mg/L+BA1.0mg/L分化培养基上,40d分化出小植株.     

粘虫PuA7S细胞的悬浮培养病毒增殖及其细胞克隆

粘虫ＰｕＡ７Ｓ细胞能在ＴＮＭＦＨ培养基和Ｅｘ－Ｃｅｌｌ４０５，Ｅｘ－Ｃｅｌｌ４００两种无血清培养基中实现高密度悬浮培养。在１００ｒ／ｍｉｎ搅拌条件下，ＰｕＡ７Ｓ细胞上述培养其中的最大生长密度分别为１．６５＊１０＾６细胞／ｍＬ，３．５０＊１０＾５细胞／ｍＬ和２．０２＊１０＾６细胞／ｍＬ，群体倍增时间分别为４８ｈ，４５ｈ和４２ｈ，ＡｃＭＶＰＶ能够在ＰｕＡ７Ｓ细胞悬浮系统高水平增殖，在３种培养基培养细胞     

黄芩愈伤组织培养及细胞形态学观察

采用不同的植物激素、碳源、水解乳蛋白(LH)和水解酪蛋白(CH)、光暗条件对黄芩愈伤组织进行培养,通过石蜡切片观察愈伤组织细胞形态。结果表明:0.5mg/LNAA和2.0mg/LKt组合时愈伤组织生长量最多;1.0mg/L2,4-D和0.5mg/LKt组合时,黄芩甙含量最高;蔗糖为2%,葡萄糖为3%或4%时,都不利于黄芩甙的积累;LH、CH、黑暗条件能促进愈伤组织的生长而不利于黄芩甙的积累;光照能显著提高黄芩甙的含量;胚性愈伤组织占优势,已出现明显的微管组织的分化。