融合聚精氨酸九肽的小热休克蛋白 原核表达及蛋白纯化

目的构建小热休克蛋白-聚精氨酸九肽融合蛋白的原核表达载体,表达纯化融合蛋白.方法在小热休克蛋白表达载体的基础上利用点突变方法引入聚精氨酸九肽对应序列,转入BL21大肠杆菌感受态细胞进行原核表达,利用亲和层析方法对表达蛋白进行纯化.结果成功构建了融合聚精氨酸九肽的HSP16. 5融合蛋白表达载体,并对其在大肠杆菌细胞中的原核表达进行条件优化,研究显示:在诱导剂IPTG浓度为0. 5 mmol、37℃条件下诱导4 h目的蛋白产量较高.结论此实验成功构建了小热休克蛋白-聚精氨酸九肽融合蛋白的原核表达载体,得到了高纯度的小热休克蛋白-聚精氨酸九肽融合蛋白,为进一步研究其功能奠定基础.     

热休克蛋白70的生物学功能研究进展

热休克蛋白是熟休克反应中转录合成的一组特殊糖蛋白.其中HSP70是最保守和最重要的一种蛋白质,HSP70具有多种生物学功能,包括分子伴侣功能,参与肿瘤免疫,抗细胞凋亡功能,提高细胞的应激耐受性,促进细胞增殖等等.本文着重对HSP70生物学功能研究的进展作一综述.     

谷氨酰胺对小鼠脑损伤中热休克蛋白70表达的影响

将45只体质量为21～24 g的雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组(Sham)、脑缺血再灌注组(I/R)和谷氨酰胺组(Gln),每组15只.采用线栓法制备小鼠大脑中动脉栓塞模型,取材前对各组小鼠进行神经功能损伤评分,分别使用TTC染色、HE染色、尼氏染色和TUNEL染色检测各组小鼠脑组织梗死体积、病理损伤情况、尼氏体数量和神经元凋亡情况.采用试剂盒检测各种小鼠脑组织中SOD活性和MDA含量,采用qRT-PCR和Western blot检测各组小鼠脑组织中HSP70的表达,探讨谷氨酰胺(Gln)诱导热休克蛋白70(HSP70)的表达及对小鼠大脑损伤的保护作用及其机制.结果显示,Gln处理脑缺血再灌注小鼠后,小鼠神经功能损伤评分明显降低(P<0.01),脑组织梗死体积明显减少(P<0.01),脑组织中HSP70的表达水平显著增加(P<0.001),尼氏体数量增加,脑组织中SOD活性增加(P<0.05),MDA含量减少(P<0.05),TUNEL阳性细胞数比例明显减少(P<0.01).以上结果表明,Gln通过诱导HSP70的表达,可以减少脑组织梗死体积...     

三株弧菌热休克蛋白70基因的克隆和序列分析

 根据GenBank中同类蛋白序列设计特异PCR引物,从2株创伤弧菌Vibrio vulnificus和1株河弧菌Vibrio fluvialis中扩增出热休克蛋 白70（heat shock protein, hsp70）基因片段。对这3个片段进行克隆、测序和分析的结果表明,3个片段长均为1 911 bp,包含完整的 hsp70 ORF,编码636个氨基酸。它们的氨基酸序列与GenBank中其它物种hsp70的氨基酸序列比较发现,2株创伤弧菌hsp70基因序列 和同种其它菌株的同源性高,达98%以上;而河弧菌的hsp70序列属首次克隆;与多种原核和真核生物的hsp70氨基酸序列一起构建 了系统进化树,结果支持传统的分类结果。     

水貂朊蛋白前体基因的原核表达

 构建了水貂朊蛋白前体基因的表达载体,所筛选出的阳性克隆质粒经转化表达菌BL21(DE3)后,收获表达菌,纯化鉴定表明获得了目的产物.     

HSP70在肺癌组织中表达水平的研究

采用免疫组织化学ＳＡＢＣ法检测３９例肺部组织中ＨＳＰ７０的表达。结果显示：ＨＳＰ７０在高度分化的肺鳞癌和肺腺癌细胞中的阳性表达率与癌旁正常肺组织之间具有高度显著性差异（Ｐ〈０．０１）,ＨＳＰ７０的表达在高分化的肺鳞癌与肺腺癌之间则无显著性差异（Ｐ〉０．０５）,在低分化的肺鳞癌和肺腺癌组织中,ＨＳＰ７０呈阴性反应,ＨＳＰ７０在肺癌组织中表达水平的高低与肺癌细胞的分化程度密切相关,而与肺癌的组织学类型     

草鱼生长激素基因的克隆及原核表达研究

应用RT-PCR技术从草鱼脑垂体总RNA中克隆草鱼生长激素cDNA(cGH)，全长669bp，含开放阅读框633bp，编码210个氨基酸，分子量为23．6kDa，等电点为6．28；与已报道的草鱼GH有12个碱基、3个氨基酸残基的差异，同源性为98％．将草鱼cDNA定向插入原核表达载体pGEX-4T-1，构建了重组草鱼GH基因质粒pGEX-GcGH，经IPTG诱导，pGEX-GcGH在大肠杆菌中可表达49．6kDa的融合蛋白．     

成人急性白血病淋巴细胞HSP70蛋白及mRNA的表达研究

研究热休克蛋白70(HSP70)在成人急性白血病淋巴细胞中的表达。用W estern blot法检测化疗前、后及正常人HSP70的蛋白表达,RT-PCR法检测其HSP70mRNA的表达。化疗前成人急性白血病淋巴细胞HSP70蛋白表达明显低于正常人(P<0.05);其HSP70mRNA表达的灰度值为(0.112±0.005),明显低于正常(人0.198±0.002)(P<0.05);而化疗后,成人急性白血病淋巴细胞HSP70及其mRNA(0.287±0.001)明显高于正常人(0.198±0.002)(P<0.05)。HSP70在成人急性淋巴细胞白血病淋巴细胞中高表达,对癌细胞起保护作用。     

热休克蛋白的研究进展

在不利的环境中,各种有机体都有其共同对应的分子反应,即正常基因的表达抑制和一组特殊基因——热休克基因的激活和表达,导致热休克蛋白的大量产生,热休克蛋白主要作为分子伴侣而参与蛋白质的折叠、转运及组装等过程,能恢复或加速清除细胞内已变性的蛋白质而稳定细胞结构,细胞产生热耐受。随着对热休克蛋白研究的不断深入,在生物工程和医学等方面的应用前景十分广阔。     

不同盐度下镉对太平洋牡蛎不同组织热休克蛋白70基因表达的影响

研究不同盐度作用下,镉对太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)热休克蛋白70(Hsp70)基因表达的影响,为从养殖源头加强贝类的安全生产提供技术支撑,并为其产品质量控制提供基础数据。分别将太平洋牡蛎在盐度13psu、20psu、27psu和34psu下驯化14d后,将其暴露于10μg/L镉溶液中28d进行蓄积实验,随后转移至干净的海水中进行排出实验;将未暴露于镉溶液的对应盐度处理组设置为空白组;最后采用实时荧光定量PCR法进行基因表达量测定。研究结果显示:4个盐度作用下,外套膜中Hsp70基因的mRNA表达趋势大体相同,体内镉浓度较低时Hsp70基因被诱导,镉浓度较高时Hsp70基因被抑制。消化腺Hsp70基因表达大部分受到抑制,盐度20psu组于第42天受到诱导,盐度27psu组于第28天受到诱导,盐度34psu组于第7,21和42天受到诱导。表明Hsp70基因对重金属镉具有显著的反应性,作为镉早期污染综合预警指示分子具有可行性。     

热激蛋白的分子进化研究

热激蛋白是细胞内含量最丰富的蛋白质之一,在各种生物体内广泛分布.近年来对热激蛋白的研究已深入到结构、性质、功能等各面,其研究主要集中在:1)作为分子伴侣协助细胞内肽链的折叠;2)参与MHCⅠ类的分子呈递;3)使抗原通过内吞作用进入靶细胞;4)肿瘤免疫和分子疫苗开发.然而,虽然热激蛋白的研究已成为医学、生物学上的热点,其在分子进化上的研究也日渐增多,但这方面的报道仍然较少,本文主要从热激蛋白分子进化方面作一综述,这对理论研究、生物进化分析上都有着重要的意义.     

海带凝集素的分离及性质研究

海带 (Laminariajaponica)经TBS缓冲液粗抽提 ,然后进行硫酸铵分级实验 ,测定盐析范围为 70 %硫酸铵饱和度 ,经 70 %硫酸铵饱和度分级后 ,海带凝集素 (LJL)纯化倍数为 9,总活力回收为 410 % ,LJL粗抽提液糖含量为12 .94% .该凝集素不被已测试的D 果糖、葡萄糖、γ 球蛋白所抑制 ,但被卵清蛋白抑制     

Calcium pretreatment increases thermotolerance of Laminaria japonica sporophytes

Calcium is a secondary messenger in plant signaling,and its concentration changes spatially and temporally during the course of heat stress.In the present study,potassium antimonate was used to visualize calcium localization in blades of a marine macroalga,the juvenile Laminariajaponica sporophytes under heat stress (25 ℃).Result showed that loosely bound calcium was mainly distributed on the cell wall under normal conditions (10 ℃),and flowed into the cytoplasm when exposed to heat.The simutaneous assay on the antioxidant system changes was performed.Oxidative damage,as measured by generation of reactive oxygen species (ROS) malondialdehyde (MDA) content,increased significantly during heat stress,and calcium pretreatment alleviated oxidative damage.The assay on the activities of six antioxidant enzymes demonstrated that their enzymatic activities were inhibited when exposed to heat stress,but Ca2+ pretreatment effectively attenuated the inhibition.Results in the present study inferred that calcium homeostasis plays an essential role in L.japonica sporophyte when exposed to heat,and calcium pretreatment could improve its thermo-tolerance.     

海带多糖中蛋白质去除方法的对比研究

采用4种方法对海带多糖进行了脱蛋白研究,并比较了脱蛋白效果与多糖损失之间的关系.结果表明:这四种方法脱蛋白效果优劣顺序依次为蛋白酶解法、三氯乙酸沉淀法、鞣酸沉淀法和Sevag法.脱蛋白过程中使蛋白质沉淀的机理可能是造成多糖损失的主要原因,蛋白酶解法脱蛋白效果最好且多糖得率最高.     

海带抗氧化多酚的制备及活性研究

用1:1的氯仿:甲醇超声提取海带成分,并用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇依次进行萃取,利用DPPH法、邻二氮菲-Fe2+氧化法、铁氰化钾还原法和邻苯三酚自氧化进行抗氧化实验,同时与抗氧化剂2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)和没食子酸(GA)进行对照。结果显示海带提取物与各萃取组分均具有较强的抗氧化能力,其中乙酸乙酯提取物(EA)抗氧化活性最强。在50μg/mL浓度时,EA清除DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子自由基的能力和还原能力均高于抗氧化剂BHT,且清除超氧阴离子自由基的能力也高于GA;另外,Aqueous组分在所有测定浓度下清除羟自由基能力均高于GA,清除O2-的能力也高于BHT。海带各提取物总酚含量的分析表明总酚含量与抗氧化活性之间具有一定的相关性,总酚含量高其抗氧化能力也相应提高,表明多酚是提取物中重要的抗氧化成分。4种抗氧化方法的比较表明DPPH法的相关系数最高(R=0.987),是海带体外抗氧化实验最有效的方法。     

卵黄蛋白原的性质及热休克蛋白90对其合成代谢的调控

卵黄蛋白原(VTG)广泛存在于卵生脊椎动物和无脊椎动物的卵母细胞中,为卵母细胞的生长和胚胎的发育提供营养。VTG一般在卵巢、肝胰脏和(或)脂肪等组织中合成。VTGcDNA具有较强的保守性,为7 kB左右。VTG具有单体、二聚体等多种形式,其中二聚体有同源二聚体和异源二聚体两种形式。脊椎动物体内,热休克蛋白90(HSP90)通过和雌激素受体结合间接诱导VTG的合成,近年来的研究报道表明HSP90同样对无脊椎动物体内VTG合成也具有诱导作用,但其作用机制有待进一步研究。     

植物激素对海带孢子体发生的影响

采用析因试验设计,对影响海带孢子体发生的主要环境因子进行优化,筛选出温度8℃、光强30umol-m^-2·s^-1、光时12h的最佳环境条件．基于此条件,对吲哚乙酸（IAA）、赤霉素（GA,）、脱落酸（ABA）、激动素（KT）和矮壮素（CCC）等5种植物激素进行了初步筛选,结果表明0．1mg·L^-1IAA、2．0mg·L^-1KT对海带孢子体的发生有显著促进作用,0．5mg·L“IAA及0．1、0．5、1．0mg·L^-1ABA抑制孢子体的发生,GA3、CCC无显著的影响．采用拉丁方区组设计,对具有显著促进作用的KT进行浓度筛选,获得了促进孢子体发生的最佳浓度4mg·L^-1．在此条件下,孢子体于第5天发生,第16天发生率达94．2％±2．0％,孢子体发生显著加快．此外,孢子体发生与细胞增殖呈异速生长关系,并且连续光照斜率高于短光照,表明短光照更适合孢子体的发生．     

海带对罗源湾养殖区海水的生物修复研究

研究了罗源湾海带栽培期间3-5月的水质状况,以及室内海带个体对养殖废水的净化作用.结果表明:大面积海带栽培可改善罗源湾的水质状况,降低无机氮磷含量.3-5月海带栽培区的总无机氮(DIN)的降低率分别达到25.48％、19.62％、44.65％,总无机磷(DIP)的降低率分别为20.17％、32.00％、38.72％.在7d实验期间,海带个体对养殖废水的净化效果明显,DIN的去除率可达98％以上.海带在养殖废水中能正常生长,保持一定的日增长率,鲜质量及叶片长有所增加.