人输卵管液和输卵管上皮细胞培养液诱发精子的顶体反应

目的：探讨人输卵管液和上皮细胞培养液对人精子顶体反应的诱发作用。方法：用Ｈａｍ′ｓＦ１０作对照组，输卵管液和上皮细胞培养液为实验组，分别与生育力组（ｎ＝２０）和不育组（ｎ＝２０）的精子进行共孵育，用精子顶体三色染色法对顶体状态进行评价。结果：共孵育３ｈ时与Ｈａｍ′ｓＦ１０对照组相比较，两种输卵管液均可显著提高生育力组和不育组的精子顶反应率（Ｐ〈０．０５），但这两种输卵管液处理的生育力组与不育组之间     

重组人卵透明带蛋白(rhZP3)对人精子顶体反应的诱导作用

目的：观察重组人卵透明带蛋白（rhZP3）对人精子顶体反应的诱导作用。方法：正常生育力人精子经过获能后,分别用BSA、孕酮和含不同浓度的重组人ZP3蛋白的培养液共孵育。诱导精子顶体反应,对实验组和对照组的精子的顶体发生状态用考马斯亮蓝染色法进行评价。结果：精子与培养液共孵育30min后,rhZP3组与BSA组之间差异有显著性（P〈0．05）,顶体反应率随rhZP3质量浓度增加而升高。结论：重组人ZP3蛋白对人精子顶体反应有显著的诱导效应,且在一定范围内与质量浓度成正相关,重组人ZP3蛋白具有发展精子顶体反应试剂盒的潜能。     

人输卯管组织与小鼠胚胎共培养的初步观察

为了检测人输卵管组织共培养系统对胚胎早期体外发育的影响,将超排得来的小鼠2细胞期胚胎与人输卵管组织共培养,或以人输卵管组织培养后的条件培养液进行培养。培养液为Ham's F10+10％FCS,并以其作为对照培养液。实验结果显示:无论是组织共培养或是条件培养液共培养,胚胎体外发育达囊胚率,胚胎逸出透明带率及胚胎的发育速度都较F10对照组高。其中输卵管壶腹部组织共培养及其条件培养液共培养对胚胎发育的促进作用较峡部大,而且其条件培养液共培养是以组织培养一周内所得的条件培养液效果最好。组织共培养和条件培养液共培养发育的胚胎正常分裂,没有差别,形态也均正常。实验提示人类输卵管上皮可能分泌某种因子能促进胚胎发育。     

人输卵管组织或条件培养液与小鼠胚胎体外共培养的初步研究

为了检测人输卵管组织共培养系统对胚胎早期体外发育的影响，将超排得来的小鼠2细胞期胚胎与人输卵管组织共培养，或以人输卵管组织培养后的条件培养液进行培养，培养液为Ham’SF10＋10％FCS，并以其作为对照培养液。实验结果显示：输卵管组织悬浮培养在最早几天里就已开始形态上的变化，组织小块沿周边向外生长，形成中间厚，周边薄的小片状。2－4d后可有片状贴附在培养皿底部生长，一些散落单细胞可长成细胞群落。培养1－2周，组织块色粉红。通透、有光泽，并逐渐生长。第3周开始，组织块中有灰白点状显现，一般从中央开始，最后变成灰…     

BAY及DMSO在体外对小鼠精子顶体反应的影响

目的探究BAY(激素敏感脂酶抑制剂)及DMSO(二甲基亚砜)对小鼠精子顶体反应(AR)的直接影响。方法分别通过5个和6个不同的浓度梯度的BAY及DMSO在体外探究其对小鼠精子AR的影响,在不同孵育时间段采用FITC-PSA和考马斯亮蓝染色法对小鼠精子的顶体反应进行鉴定。结果在所选浓度范围内BAY未能直接影响精子的顶体反应及存活率(P>0.05),而DMSO在一定浓度和时间内可直接影响精子顶体反应及精子存活率。结论 DMSO和BAY对小鼠精子发生的作用是通过不同途径来实现的,前者可直接影响精子顶体反应和精子的存活率,而后者则与顶体反应及存活率无关。提示在AR的研究中使用DMSO时需控制好作用浓度及作用时间。     

小鼠卵巢颗粒细胞条件培养液中蛋白质和激素水平

测定用于精子顶体反应和早期胚胎离体培养的小鼠卵巢颗粒细胞条件培养液中的蛋白质和激素水平。结果表明：单层培养的颗粒细胞体外培养后生长良好,能稳定分泌蛋白质、雌二醇（Ｅ２）和孕酮（Ｐ）。在培养液中加入促卵泡素（ＦＳＨ）和胰岛素（ＩＮＳ）时,Ｅ２的分泌量无显著变化。     

黑眶蟾蜍Bufo melanostictus卵胶膜大分子成份的研究

本研究用聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳的方法,在黑眶赡蜍的卵水、卵胶膜和各段输卵管分泌物中检测出了蛋白质、糖蛋白(包括多糖)和酯酶。在卵水中有16种蛋白质,其中2种是糖蛋白,3种是酯酶。在卵胶膜中检出16种蛋白质,其中有3种是糖蛋白,1种是酯酶。在各段输卵管分泌物中分别检测出不同数量的蛋白质、糖蛋白和酯酶。卵子浸入水中后,受精率下降。这可能是由于卵胶膜中可溶性物质扩散到水中去的缘故。关于酯酶,以前尚未见过报道,可能在受精过程中参与精子的顶体反应。     

昆虫精子获能与顶体反应的研究

综述了近年来国内外在昆虫精子获能与顶体反应方面的研究概况,并系统地简述了昆虫精子顶体复合体基本结构,以及目前用于动物精子获能与顶体反应方面先进的方法和技术,同时对昆虫受精机理的研究进行了展望     

Ionomycin诱导小鼠精子顶体反应的初步研究

目的:探讨Ionomycin诱导精子顶体反应的效果.方法:收集小鼠附睾尾精子,体外获能后用不同终浓度的Ionomycin处理相同时间,以及用相同浓度的Ionomycin处理不同时间.FITC-PNA染色观察并统计精子顶体反应率.结果:用终浓度为1、5、10、50μmol/L Ionomycin处理1 h的精子AR率分别为31.6%、52.2%、57.4%和64.0%.用终浓度为5μmol/L的Ionomycin处理10、30、45、60、120、180 min的精子AR率分别为17.2%、25.0%、41.2%、52.2%、54.0%和55.0%.结论:Ionomycin可以诱导小鼠精子的顶体反应,且顶体反应率随着浓度和诱导时间的变化而变化.     

酶消化法和匀浆法获得河蟹游离精子的比较研究

在pH 7.4的条件下,以不同的温度（27 ℃,32 ℃,37 ℃,42 ℃和47 ℃）、酶浓度（0.05 %,0.10 %,0.15 %,0.20 %和0.25 %）和酶作用时间（5 min,10 min,15 min,20 min和25 min）,通过正交试验,研究了胰蛋白酶消化中华绒螯蟹精荚获得游离精子的最佳反应条件.以每克精荚获得的精子数量为判据,发现酶作用时间是主要的影响因子,其次是温度和酶浓度.酶消化的最适反应条件是：温度为37 ℃,酶浓度为0.20 %,作用时间为5 min.酶消化法与机械匀浆法的比较研究发现,酶消化法从每克精荚中获得的精子量为7.41×108个,显著高于匀浆法,且精子的死亡率为4.75 %,显著低于匀浆法.此外,用人工诱导顶体反应法进一步检测酶消化法以及机械匀浆法所获得精子的顶体反应能力,酶消化法获得精子的顶体反应率为62.3 %,而匀浆法为64.5 %,两者无显著性差异.结果表明,酶消化获得游离精子的方法明显优于机械匀浆法.     

原代和传代培养的人输卵管上皮细胞对小鼠胚胎体外发育的影响

体内精卵结合、早期胚胎发育是在输卵管中进行,人们将配子、早期胚胎进行输卵管内移植（GIFT、TET）,发现胚胎发育率和妊娠率都提高。体外模仿输卵管内环境的最好方法是将胚胎与输卵管上皮细胞或组织共培养。本实验用已建立的原代和传代培养的人输卵管上皮细胞分别与小鼠早期胚胎共培养,观察其对早胚发育的影响。胚胎与不同培养时间的人输卵管壶腹部上皮细胞共培养的发育状况见表1。表1人输卵管上皮细胞对小鼠胚胎发育的影响P：原代培养第5－6d细胞;S1－S5：传代1－5代培养第4－5d细胞;T2、T4：传代第2和第4代培养第id细胞,设此…     

米非司酮对人输卵管胰岛素样生长因子-1及其受体表达的影响

目的: 探讨米非司酮对人输卵管上皮胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及其受体(IGF-1R)在增殖中、晚期表达情况的变化.方法:取育龄妇女增殖中、晚期输卵管,米非司酮组(8例)于术前12 h给予米非司酮25 mg口服,对照组(7例)不服用米非司酮,常规石蜡切片,用SP免疫组化法和图像分析技术检测IGF-1及IGF-1R的PU值的表达变化.结果:在月经周期的增殖中、晚期,无论米非司酮组或对照组,峡部、壶腹部、伞部上皮细胞IGF-1及其受体的表达,差异无显著性(P>0.05);在月经周期的增殖中、晚期,米非司酮组和对照组在输卵管相同部位上皮细胞IGF-1的表达差异无显著性(P>0.05);在月经周期的增殖中、晚期,在输卵管相同部位上皮细胞IGF-1R的表达米非司酮组较强,与对照组相比差异有显著性(P<0.05). 结论:米非司酮作用下,月经周期的增殖中、晚期人输卵管上皮IGF-1表达与对照组无明显差异,而IGF-1R的表达则明显强于对照组,说明米非司酮可能对该时期的输卵管环境造成改变.     

活性氧及其清除剂对人精子功能的调控

人类精液中存在着两种产生活性氧的来源－精子和白细胞。这些ＲＯＳ在不同水平对精子结构和功能具有不同效应。综述了ＲＯＳ及其清除剂对人精子存活率,运动性和获能功能的调控及可能的作用机理。     

蛇床子素对人精子细胞氧化应激损伤的保护作用

目的探讨蛇床子素对精子细胞氧化损伤的保护作用及机制.方法将收集的精子细胞分为5组,空白对照组无处理因素正常培养,模型组加入H2O2缺氧液培养1 h,各药物浓度组再加入H2O2缺氧液培养,同时加入50,150,450μmol/L蛇床子素培养液培养1 h,处理完毕后检测各组精子细胞存活率、精子活力、精子低渗膨胀实验、精子细胞SOD活力、MDA含量.结果蛇床子素可提高氧化损伤后精子存活率,增加精子活力,提高精子运动能力,提高精子细胞SOD活性,降低MDA含量,与模型组比较差异具有统计学意义(P0.05).结论 50,150,450μmol/L蛇床子素均能减轻精子细胞缺氧损伤,其机制可能与蛇床子素能提高精子氧化损伤时细胞膜稳定性、保护细胞完整性、提高精子活力有关.     

入卵过程中太平洋牡蛎精子超微结构的变化

本文研究了精子入卵过程中太平洋牡蛎精子超微结构的变化规律。研究表明，精子入卵过程分为4个时期：顶体反应期、穿卵前期、穿卵期和融合期。顶体反应期，精子顶体物质释放，顶体致密部分向外延伸，形成1层保护膜，亚顶体腔开始向顶端突起；穿卵前期，亚顶体腔前突形成顶体锥，并向卵膜释放亚顶体物质，精子外膜后移；穿卵期，精子核及线粒体进入卵膜形成的受精锥，线粒体数量减少，顶体突消失，精子外膜和尾部脱落；融合期，精子核进入卵内与质膜融合，核解体。     

建立人输卵管上皮细胞无血清培养

人输卵管上皮细胞（HOEC）可以体外较长时间无血清培养,DMEM／F12培养液的培养效果优于Ham’sF10,在加有多种因子和胎球蛋白的培养液中,HOEC可贴壁生长,生长能力达到合质量分数15％FCS的对照组的30％～40％,一般可传代2次,最长培养可维持38d,细胞形态与有血清培养差别不大,虽然无血清培养HOEC的生长速度、密度、传代成功率远不及有血清培养,但能抑制成纤维细胞生长,维持较纯的上皮细胞。     

自由基对人精子功能调控

人类精液中存在两种产生活性氧（ＲＯＳ）的来源－－精子和白细胞。这些ＲＯＳ在不同水平对精子结构和功能具有不同效应。结合本室成果,综述了ＲＯＳ及其清除剂对人精子存活率、运动性和获能等功能的调控及可能的作用机理,提示ＲＯＳ在男性生殖生理及病理过程中可能具有重要的生理病理作用,并为ＲＯＳ清除剂用于治疗男性不育症及抗男性生育提供理论和临床依据。     

抗精卵结合的生育调节工程疫苗研究中抗原多样性的比较

卵透明带是包围在动物卵和早期胚胎外的一层非细胞性糖蛋白类结构，精子受体即位于其中，是精卵识别、结合、防止多精子受精、保护早期胚胎发育直至着床所不可缺少的重要结构。对多种动物的比较研究发现，不同动物卵透明带内精子受体存在着种类特异性，可以特异地与同类精子顶体部的精子受体结合蛋白发生种类特异性结合，从而诱发顶体反应，以及其后的一系列受精反应过程，最后通过皮质颗粒及有关酶反应，导致透明带性质改变，封闭其它精子受体，避免多精子受精的发生。但是，精子受体蛋白结构内也存在部分种间交叉反应，如人与猪的卵透明带…     

中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)精子的形态和顶体反应的研究

研究了利用离子载体A23187诱导中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）精子产生顶体反应的最佳条件．结果表明：从雌性中华绒螫蟹纳精囊中获得的精子，在pH值为6．0，CaCl2浓度为0．2％的人工海水中，用离子载体A23187（40μg／mL）诱导70min，可以得到最大的精子顶体反应率（72％）．在此基础上用光镜观察了顶体反应过程中精子显微结构的变化，并采用天然海水配制的台盼蓝染色液和曙红B染色液对中华绒螯蟹精子的形态进行观察，确定中华绒螫蟹精子的顶体反应过程大致可分为4个阶段：第一阶段为辐射臂收缩，头帽鼓起；第二阶段为顶体囊外翻；第三阶段为顶体管前伸；第四阶段为顶体丝形成．     

超声波对黄芩苷生物转化的影响

采用超声波技术对黄芩苷转化培养液进行处理,研究超声波处理对黄芩苷转化效果的影响.高效液相色谱检测显示,只有培养液经超声波处理的实验组中有苷元黄芩素的吸收峰出现,超声波处理对黄芩苷生物转化有显著影响.实验确定超声波最佳处理条件为频率40kHz,时间40min.