银杏叶多糖对人恶性黑色素瘤细胞增殖的影响

研究了银杏叶多糖(PGBL)对人恶性黑色索瘤(A375)细胞增殖的影响.采用50μg·ml-1、100μg·ml-1和200μg·ml-1浓度的PGBL作用于A375细胞,MTT法检测细胞生长和增殖情况.结果表明,不同浓度的PGBL都可抑制A375细胞的增殖,且呈浓度、时间依赖性.证明PGBL对恶性黑色素瘤有一定的防治作用.     

紫菜多酚对人恶性黑色素瘤细胞A375增殖和诱导凋亡的影响及机制探讨

以紫菜为原料,通过乙醇溶剂提取、硅胶柱层析、高效液相制备色谱等步骤,得到紫菜多酚组分C1、C2、D1、D2四个组分.通过MTT法测定组分C1、C2对人恶性黑色素瘤细胞A375的增殖抑制作用,结果表明:组分C1、C2作用于A375细胞48 h的IC50分别为1.10、1.58 mg·m L-1.采用Annexin V/PI双染测定细胞凋亡情况发现,A375细胞经紫菜多酚组分C1处理后凋亡的细胞比例增加.经组分C1作用的A375细胞中黑色素含量和相对酪氨酸酶活力均得到提高,且与药物浓度呈正相关关系;透射电镜检测A375细胞超微结构的变化发现紫菜多酚组分C1可诱导A375细胞趋向正常分化.     

二去水卫矛醇对四种肿瘤细胞的体外抑制作用

采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度二去水卫矛醇(DAG)对人胃癌细胞SGC-7901、人肺癌细胞H460、人鼻咽癌细胞CNE和人肝癌细胞BEL-7404的抑制率研究DAT对4种肿瘤细胞的体外抑制作用.结果表明,DAG对4种癌细胞:CNE、H460、SGC-7901和BEL-7404有较强的抑制作用,作用72h后半数抑制浓度(72h-IC50)分别为4.12μg· ml-1,15.98μg·ml-1,16.00μg· ml-1和16.73μg·ml-1.显微镜下可见经药物作用后细胞圆缩、胞质浓缩、胞浆内颗粒集中边缘化甚至细胞溶解等损伤现象.DAG在体外对上述4种癌细胞有明显的抑制生长作用.     

2-丁亚砜-1,4-萘醌诱导人恶性黑色素瘤A375细胞凋亡及其机制

目的:探究2-丁亚砜-1,4-萘醌(BSNQ)对人恶性黑色素瘤A375细胞的诱导凋亡作用,阐明其诱导凋亡的机制.方法:MTT比色法检测BSNQ对人黑色素瘤A375细胞的杀伤作用.Annexin V-FITC/PI双染法与流式细胞术检测BSNQ对人黑色素瘤A375细胞的诱导凋亡作用.Western blotting法检测Akt信号通路相关蛋白的表达情况.流式细胞术检测BSNQ对A375细胞内ROS的调控作用.结果:BSNQ处理A375细胞其存活率逐渐降低.BSNQ能够显著诱导A375细胞发生凋亡.抗凋亡蛋白p-Akt和Bcl-2表达量逐渐降低,pro-caspase-3表达量逐渐降低,促凋亡蛋白Bad和cleaved-caspase-3表达量逐渐升高(P0.05).BSNQ能够显著增加细胞内ROS水平.同时,BSNQ与NAC共同处理后,能够显著降低BSNQ诱导的细胞凋亡程度.结论:BSNQ通过上调细胞内ROS水平,下调Akt信号通路的活性,诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡.     

人参水溶性总蛋白对小鼠黑色素瘤细胞B16的增殖抑制及对Bcl-2/Bax表达的影响

研究人参水溶性总蛋白对小鼠黑色素瘤细胞的增殖抑制作用及对Bcl-2/Bax表达的的影响:(1)MTT法测定人参水溶性总蛋白对黑色素瘤B16细胞株的增殖抑制率。(2)RT-PCR(Real-time PCR)法检测Bcl-2、Bax基因的mRNA表达情况。(3)Western blot测定凋亡蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果:(1)人参水溶性总蛋白对小鼠黑色素瘤B16细胞株有明显的增殖抑制作用,其抑制率随着加药浓度的增加而升高;并与加药浓度呈现一定的量效关系。(2)随着人参水溶性总蛋白浓度的增高(0、100、500、1 000μg/m L),RT-PCR检测的Bcl-2 mRNA相对表达量逐渐降低,Bax mRNA相对表达量逐渐升高,当加药浓度为1 000μg/m L时,Bcl-2的相对表达量最低,为0.20±0.05;Bax的相对表达量最高,为16.83±0.07;与对照组相比,Bcl-2和Bax基因的相对表达量差异均有统计学意义(P0.05)。(3)经Western blot测定,各组Bcl-2蛋白的表达均低于对照组,各组Bax蛋白表达均高于对照组,且随着加药浓度的增加,Bcl-2蛋白表达量逐渐降低,Bax蛋白表达量逐渐升高。说明人参水溶性总蛋白可以抑制小鼠黑色素瘤B16细胞株增殖,其分子机制可能与调控Bcl-2/Bax凋亡蛋白的表达有关。     

GDNF对小鼠睾丸支持细胞增殖的影响

探讨胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived fieurotrphie facmr,GDNF)对小鼠睾丸支持细胞(sertoli cell)增殖的影响.对5～10 d的昆明小鼠睾丸Sertoli细胞进行分离培养,利用MTT法检测不同质量浓度GDNF(5,10,20,50μg/L)对Sertoli细胞增殖的影响,流式细胞仪测定DNA含量、分析细胞生长周期的变化.结果表明:5,10μg/LGDNF对Sertoli细胞的增殖有促进作用(p<0.05),20μg/LGDNF对Sertoli细胞增殖有明显促进作用(p<0.01);流式细胞仪检测表明GDNF促进了Sertoli细胞由Go期进入S期和G2期,细胞增殖指数(P1)增加,S期细胞指数(SPF)增加.说明GDNF对体外培养的Sertoli细胞具有促进增殖的作用.     

白桦脂酸对Cx32组成的细胞缝隙连接功能的影响

目的:体外观察白桦脂酸对天然表达缝隙连接蛋白32(Cx32)的BRL-3A细胞的细胞缝隙连接(GJ)功能及Cx32蛋白表达水平的影响.方法:SRB法检测不同质量浓度白桦脂酸对BRL-3A细胞的毒性;细胞接种荧光示踪法观察不同质量浓度白桦脂酸对GJ功能的影响;Western blot方法检测白桦脂酸影响GJ功能的质量浓度对Cx32蛋白表达水平的影响.结果:白桦脂酸在0~1μg/m L质量浓度对BRL-3A细胞无毒性作用;白桦脂酸(0.01~1μg/m L)质量浓度依赖性地降低GJ功能,但对Cx32表达无影响.结论:白桦脂酸在0.01~1μg/m L质量浓度范围内,降低BRL-3A细胞的GJ功能;这种作用与Cx32蛋白的表达水平无关.     

黄腐酚逆转B16-F10黑色素瘤细胞恶性表型

本研究从体外增殖、细胞周期分布、克隆形成和迁移能力、黑色素合成以及糖酵解水平等考察了黄腐酚(XN)对B16-F10高转移潜能小鼠黑色素瘤细胞恶性表型的影响。结果表明，XN明显抑制B16-F10细胞增殖、克隆形成和体外迁移，阻滞细胞周期于G0/G1期，并上调细胞黑色素合成水平。同时发现XN下调B16-F10细胞的葡萄糖摄取，降低乳酸脱氢酶和己糖激酶活性及NAD⁺/NADH比率，下调缺氧诱导因子1(HIF-1α)和沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)表达。另外，XN明显延长荷B16-F10黑色素瘤小鼠生存期。总之，本研究表明XN逆转B16-F10黑色素瘤恶性表型，并发挥抗肿瘤增殖和转移活性，或与其调控肿瘤糖代谢效应相关。     

甘草查尔酮B体外细胞毒作用研究

为考察甘草查尔酮B(Licochalcone B)对不同肿瘤细胞增殖的抑制作用,初步探讨其作用机制,本研究采用MTT染色法检测甘草查尔酮B对5种肿瘤细胞人乳腺癌细胞(MCF-7)、人膀胱移行细胞癌细胞(T24)、人宫颈癌细胞(HeLa)、高转移性小鼠黑色素瘤细胞(B16F10)、小鼠黑色素瘤细胞(B16F0)的增殖抑制作用;台盼蓝拒染法测定甘草查尔酮B对B16F0细胞的致死率;相差显微镜观察细胞形态;JC-1染色测定线粒体膜电势(△Ψm)。结果表明:甘草查尔酮B(5、7.5、10、12.5、15μg/mL)可浓度依赖性地抑制5种不同肿瘤细胞的增殖,在最高浓度时,抑制率分别为67.52%、67.24%、65.41%、62.81%、68.13%;随甘草查尔酮B处理浓度的增加,B16F0细胞死亡率升高,细胞皱缩,脱落细胞增多;甘草查尔酮B可明显降低B16F0细胞的线粒体膜电势,且呈现浓度依赖性。以上结果显示:甘草查尔酮B对多种肿瘤细胞体外增殖均有明显的抑制作用,这可能与其所致的线粒体损害有关。     

松萝酸对3种肿瘤细胞增殖和凋亡的影响

为了探究松萝酸对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响,体外培养人白血病细胞U937、人骨肉瘤细胞MG-63、人黑色素瘤细胞A375,用不同浓度的松萝酸分别作用于3种细胞24 h和48 h,用MTT法检测3种肿瘤细胞的增殖情况. Hoechst 33342染色观察U937经松萝酸处理后细胞形态的变化,Western Blot检测U937中凋亡相关蛋白的表达情况.结果发现,松萝酸对U937、A375和MG-63细胞增殖均有抑制作用,且均呈现出时间和剂量依赖性. 3种肿瘤细胞中,松萝酸对U937增殖的抑制效果最好.通过Hoechst 33342染色发现,随着松萝酸浓度的升高,凋亡的U937细胞数逐渐增多. U937细胞经松萝酸处理后,Bax蛋白的表达量增高,Bcl-2蛋白和Caspase-3蛋白的表达量降低,Bax蛋白表达量与Bcl-2蛋白表达量的比值增加.由此认为,松萝酸诱导的U937细胞凋亡与Caspase依赖性线粒体途径有关.     

铁棍山药多糖对PC12及Hepa1-6细胞在体外增殖的影响

采取闪式提取法从铁棍山药中提取山药多糖,利用胰蛋白酶去除多糖中的杂蛋白,冷冻干燥获得山药多糖制品.分别以10μg/mL、100μg/mL、500μg/mL、1 000μg/mL浓度添加于生长良好的PC12及Hepa1-6细胞中,再分别二次培养12h、24h、36h,研究山药多糖在体外对PC12及Hepa1-6两种细胞增殖的影响.结果显示:在培养24h后,当山药多糖浓度为10μg/mL、100μg/mL时,对PC12细胞增殖的影响没有差异性(P>0.05),但当浓度进一步提高到500μg/mL、1 000μg/mL时,则对PC12细胞的增殖体现出显著影响(P<0.05);对于Hepa1-6,在培养12h且山药多糖浓度在10μg/mL、500μg/mL时,对Hepa1-6细胞增殖的影响差异性显著(P<0.05),同时在100μg/mL浓度下,山药多糖对Hepa1-6细胞的增殖抑制更加明显(P<0.01).但当浓度达到1 000μg/mL时,对Hepa1-6细胞增殖呈现促进作用.在培养24h时,各浓度的山药多糖对Hepa1-6细胞增殖的影响均没有差异性(P>0.05).当培养36h后,在山药多糖浓度为10μg/mL、100μg/mL、500μg/mL下,统计显示对Hepa1-6细胞增殖的影响差异性显著(P<0.05).上述结果说明,山药多糖在一定的浓度范围内具有明显的抗肿瘤作用.     

苯甲酰新乌头原碱对骨髓瘤细胞RPMI8226增殖及凋亡的影响

目的:探究苯甲酰新乌头原碱(BMA)对骨髓瘤细胞RPMI8226(RPMI8226)增殖及凋亡的影响.方法:将对数期生长RPMI8226细胞随机分为空白对照组、BMA(0. 1、0. 5、1、10、100μmo L)组,24 h后用CCK8测定各组光密度(A),根据A值计算出半数抑制质量浓度(IC50);根据所测IC50将对数期生长RPMI8226细胞分为空白对照组、阴性对照组、BMA(4、6、8μmo L)各组,作用12～48 h,用CCK8测定不同作用时间下各组RPMI8226细胞A值,计算出各组增殖抑制率;根据BMA对RMPI8226增殖抑制率的影响规律再设空白对照组、BMA(4、8μmo L)组,作用24、48 h,用Annexin V/PI双染色流式细胞术检测各组细胞凋亡率.结果:作用24 h后,各组BMA换算成质量浓度,在13～13 000 ng/m L(即1～10μmo L)质量浓度,各组A值随药物质量浓度的增加而减少,P 0. 05,其IC50质量浓度为1 040 ng/m L;作用12～48 h,各组细胞增殖抑制率随加入的BMA的增加、作用时间的增加而增加,各组P 0. 05;作用24、48 h后各组细胞凋亡率随加入BMA的增加、作用的增加而增大,各组P 0. 05.结论:BMA能抑制RPMI8226增殖并使其凋亡.     

林下参花挥发油化学成分及其抗肿瘤细胞增殖活性研究

目的探讨林下参花挥发油化学组成及其对多种肿瘤细胞增殖活性的影响.方法通过水蒸气蒸馏法制备林下参花挥发油,应用GC-MS方法鉴定其化学成分,利用MTT法研究其对小鼠成纤维细胞NIH-3T3毒性及对人肺腺癌细胞A549、人宫颈癌细胞He La、人胃癌细胞SGC7901、小鼠黑色素瘤细胞B16和小鼠肾上腺皮质瘤细胞Y1增殖的影响.结果从林下参花挥发油鉴定出85种成分,包括脂肪族、萜类、芳香族等化合物,含量最高为棕榈酸、亚油酸、十三酸等;其在400μg/m L以下对于NIH-3T3细胞生长无毒性作用,且能够抑制Y1,He La,SGC-7901,B16细胞系增殖,对A549细胞系增殖无影响.结论林下参花挥发油化学成分含量较高的是脂肪族和萜类化合物,并且发现其对多种肿瘤细胞系具有抑制增殖活性.     

右旋一叶萩碱对小鼠黑色素瘤B16增殖及细胞周期的影响

目的:探讨右旋一叶萩碱对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和细胞周期的影响及其作用机制。方法:右旋一叶萩碱作用于小鼠黑色素瘤细胞B16,MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期。结果:右旋一叶萩碱以时间和浓度依赖的方式抑制B16细胞生长;药物作用72 h IC50为63.34μmol/L;右旋一叶萩碱诱导B16细胞凋亡并显著减少S期、G2/M期细胞。结论:右旋一叶萩碱可以抑制黑色素瘤细胞的恶性增殖,其作用机制与诱导细胞凋亡、减少S期和G2/M期细胞有关。     

西兰花中异硫氰酸盐诱导HepG-2凋亡的研究

探讨西兰花中异硫氰酸盐(isoth iocyanates,ITCS)诱导HepG-2细胞凋亡作用及其可能机制.用不同质量浓度ITCS处理肝癌HepG-2细胞,通过SRB法、细胞形态学观察、流式细胞仪和激光共聚焦显微镜实验,观察ITCS对HepG-2细胞的抑制率和细胞凋亡的影响.结果:1、10、50和150μg/mL的ITCS作用于HepG-2细胞72 h后,ITCS可抑制HepG-2细胞的增殖,其IC50为15.824μg/mL;120μg/mL的ITCS作用HepG-2细胞24 h后,细胞出现早期凋亡细胞的形态;60、120、240μg/mL的ITCS作用于HepG-2细胞48 h后,可见细胞凋亡率分别为(16.6±2.8)%、(21.9±4.4)%和(70.2±5.3)%;15、30、60μg/mL的ITCS作用于HepG-2细胞24 h后,细胞内的Ca2 质量浓度升高,且随着ITCS给药剂量的增加而升高(P<0.05).ITCS能够促进人肝癌细胞系HepG-2细胞的凋亡,其作用机制可能与ITCS升高细胞内Ca2 质量浓度有关.     

黄芪甲苷通过JAK/STAT3信号通路抑制肺癌细胞增殖和迁移的作用机制研究

目的 探究黄芪甲苷(Astragaloside IV,AS-IV)对肺癌细胞增殖、迁移及作用机制的影响.方法 将体外培养的肺癌细胞A549分为空白对照组和AS-IV 5、10、20μmol/L组.应用四唑盐(MTT)比色法检测细胞存活率;应用蛋白免疫印记实验检测A549细胞P-JAK1和P-STAT3蛋白的表达;细胞集落实验和划痕实验观察A549细胞增殖和迁移情况.结果 黄芪甲苷在浓度低于20μmol/L时没有明显的细胞毒性,低毒下的黄芪甲苷可剂量依赖性抑制P-JAK1和P-STAT3蛋白的表达;细胞集落实验划痕实验结果表明,低毒下的黄芪甲苷可抑制A549细胞增殖和迁移.结论 黄芪甲苷能够通过JAK/STAT3信号通路抑制肺癌细胞A549增殖和迁移.     

补肾和解复方对再障患者CD34+细胞造血干/祖细胞调节作用的实验研究

目的:探索补肾和解方对再障患者CD34 造血干/祖细胞的刺激增殖和诱导分化作用.方法:采用免疫磁珠法(MACS)分离纯化再障患者骨髓CD34 细胞,造血细胞半固体和液体培养体系加入不同度补和解方制剂,检测对CD34 造血干/祖细胞增殖,形成祖细胞集落的提高率,并用流式细胞仪检测液体培养后细胞表面标记的变化.结果:补肾和解复方制剂(5～100μg.mL)能提高BFU-E、CFU-E、CFU-GEMM集落产率,补肾和解复方制剂50μg/mL是液体培养刺激CD34 细胞体外增殖的最佳浓度.补肾和解复方制剂诱导细胞14天后,细胞表面表达CD334 细胞随补肾和解复方制剂的浓度升高而增加,在补肾和解复方制剂的浓度升高而增加,在补肾和解复方制剂100μg/mL时以CD15 细胞数最高,CD71 细胞和G-A 细胞数仅在50μg/mL高于未加补肾和解复方制剂的对照组.结论:补肾和解复方制剂不但能促进再障患者CD34 造血干/祖细胞的增殖,并且能诱导定向分化,具有类生长因子和协同生长因子的作用.     

中药复方板蓝根颗粒抗柯萨奇B_4病毒作用的实验研究

采用中药复方板蓝根颗粒进行了体外抗柯萨奇病毒B4(CVB4)的研究,通过观察病毒引起的细胞病变效应(CPE)、MTT法检测细胞活性,作为考核药物抗病毒作用.结果表明:中药复方板蓝根颗粒对CVB4无直接灭活作用,但能抑制CVB4在Hep-2细胞内的的生物合成和阻止CVB4的吸附,其半数抑制浓度(IC50)分别为1129.00和1130.44μg/mL,治疗指数(TI)均为2.78.在100～1600μg/mL范围内复方板蓝根颗粒与CVB4抑制率呈明显的量效关系(P<0.01),在1600μg/mL时能抑制CVB4在Hep-2细胞内的增殖>50%.研究表明中药复方板蓝根颗粒能有效地抑制CVB4在Hep-2细胞中的增殖,其抗病毒作用发生在阻断病毒吸附细胞和抑制病毒进入细胞之后的复制增殖.     

铽-水杨酸-邻菲罗啉三元配合物共振光散射法测定DNA的研究

在pH=7.8的Tris-HCl缓冲液中,DNA可使铽-水杨酸-邻菲罗啉三元配合物共振光散射强度显著增强,在λ=351 nm处共振光散射强度(⊿ I)与DNA浓度具有良好的线性关系.方法的线性范围为0.16～1.2μg·ml-1,检出限为0.068μg·ml-1,RSD为1.82%～2.41%,加标回收率为92.0～106.0%.     

山奈酚抑制人胆囊癌细胞增殖及其对mTORC1通路的影响

目的:探讨山奈酚对人胆囊癌细胞(SGC-996细胞)增殖的影响及其机制.方法:采用浓度为0、25、50、75、100、125、150、175μmol/L的山奈酚干预SGC-996细胞24、48、72 h后,CCK-8法检测SGC-996细胞的体外增殖能力;干预48 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot法检测P-S6K1及P-S6等哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)途径相关蛋白的表达.结果:干预24 h时,浓度为0～175μmol/L的山奈酚对SGC-996细胞增殖的抑制作用不明显;干预48 h时,浓度为75μmol/L及以上的山奈酚可明显抑制SGC-996细胞的增殖(P0.05);干预72 h时,浓度为50μmol/L的山奈酚也可显著抑制SGC-996细胞的增殖(P0.05).浓度为100μmol/L山奈酚干预48 h,可显著诱导细胞凋亡(P0.05),显著降低P-S6K1和P-S6蛋白的表达水平(P0.05).结论:在一定浓度范围内,山奈酚随浓度的增加和时间的延长而明显抑制SGC-996细胞的增殖,并诱导其凋亡,而对细胞增殖的抑制作用可能是通过影响mTORC1信号通路实现的.